上海市非结核分枝杆菌感染趋势及耐药分析

目的分析上海市近7年来非结核分枝杆菌(NTM)的感染趋势、分布及耐药情况。方法对1998-2004年间医院确定为NTM的菌种用传统的生化反应法进行菌种鉴定,及以罗氏培养基为基础的绝对浓度法中的间接法做NTM的药物敏感试验。结果从1998-2004年NTM感染占分枝杆菌属培养阳性率分别为1.49%、1.17%、1.98%、2.46%、2.66%、2.72%、3.00%,基本呈上升趋势;感染菌种的分布Ⅰ群为18.7%、Ⅱ群5.1%、Ⅲ群25.1%、Ⅳ群51.1%;大多数NTM对常用的抗结核药物呈高度耐药,特别是Ⅳ群中的龟分枝杆菌和偶发分枝杆菌出现多重耐药现象。结论上海市NTM感染呈逐年上升趋势;感染菌种的分布以Ⅳ群快速生长的NTM为主;NTM对常用的抗结核药物呈高度耐药现象。

1034例利福平耐药结核杆菌对其它一线抗结核药物耐药性分布特征

目的了解广州市近17年来，结核分枝杆菌临床分离株利福平耐药情况及对其它一线抗结核药物的敏感性分布特征。方法回顾性分析广州市胸科医院1992年2月-2008年7月期间门诊结核病人一线抗结核药物敏感性试验结果。结果10167例结核分支杆菌分离株中，耐R菌株1034例，耐H菌株2214例，耐S菌株1073例，耐E菌株622例，总体耐药率为25．80％；在1034例R耐药株中，H、R共同耐药者927例，占R耐药株总数的89．65％，却只占2214例H耐药株的41．87％；而R、S共同耐药者502例，R、E共同耐药者237例，分别占耐R株总数的48．55％及22．92％，明显少于R、H共同耐药者。结论耐RFP菌株绝大部分同时对INH耐药，但反之不然，现有的耐药机制难以解释此种现象，结核杆菌是否存在其它耐药机制有待进一步研究。

深圳市结核病耐药性监测动态分析

目的了解深圳市结核病的耐药状况及其动态变化。方法采用“比例浓度法”对每例菌株进行H、R、E、S四种药物的敏感试验。结果1999年至2005年进行耐药监测共3761例,原发性耐药率27.7%(958/3459),继发性耐药率41.1%(124/302);原发性耐多药率4.2%(146/3459),继发性耐多药率16.2%(49/302)。四种抗结核药的耐药频率顺序由高至低依次为S、H、R、E。结论积极推行肺结核病归口管治和实施DOTS策略,结核病疫情明显下降,结核病耐药率呈下降趋势。

利用重组蛋白制备和鉴定分枝杆菌HSP65单克隆抗体

目的制备针对牛分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以CpGODN1826/Alum为佐剂,不同的HSP65融合蛋白为免疫抗原和检测抗窄,用聚乙二醇(PEG)法制备杂交瘤细胞,ELISA检测杂交瘤细胞分泌抗体的效价和类型,Western blot分析抗体的特异性。结果获得5株稳定分泌抗HSP65蛋白的McAb,3株细胞分泌的mAb为IgG1亚类,2株为IgG2a。ELISA和Western blot结果显示,mAb能特异性结合HSP65-PSA-tag、HSP65-MUC1-tag和HSP65重组蛋白,但与Chaperon-PSA重组蛋白和宿主菌BL21的菌体裂解蛋白不发生结合。结论纯化的重组蛋白可代替的牛分枝杆菌,用于HSP65 mAb的制备和鉴定。获得的HSP65 mAb为HSP65及其重组蛋白的功能研究奠定基础。

酶联免疫斑点检测（TSPOT-TB）结核分枝杆菌与结核病的相关性分析

目的研究酶联免疫斑点（T SPOT-TB）检测结核分枝杆菌特异性T细胞与结核病的相关性分析。方法用酶联免疫宽点技术测定早期分泌性抗原靶ESAT-6和ESAT-10特异性T细胞，由传染病研究所证实或可疑的72例病人作为实验对象，并将TSPOT—TB的测定结果和传统的诊断方法相比较。结果64例肺结核或肺外结核病人中，TSPOT—TB方法检测到63例，表明其灵敏度为98．4％。其中的45例病人同时做结素实验，仅有40例呈阳性（89％），而TSPOT—TB测定100％为阳性（P=0．056）。72例病人中，有6人被排除活动性结核，其中5（83．3％）人TSPOT-TB实验阴性，因此可以在可疑活动性结核病人快速排除非结核病人。结论TSPOT-TB实验对检测结核是一种灵敏的方法，对现在低发病率背景下检测结核的诊断程序及治疗监测是一种有用的补充。

糖尿病合并肺结核患者耐多药结核分枝杆菌基因突变的检测

目的:探讨耐多药结核分枝杆菌临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在糖尿病合并肺结核患者耐药性检测中的应用价值。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术对41株自糖尿病合并肺结核患者痰液中培养分离的同时耐利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)的多耐药临床分离株和46株对RFP、INH、SM敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变状况。结果:46株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因SSCP图谱正常,特异性为100%。PCR扩增产物SSCP分析结果显示:41株多耐药临床分离株中,36株rPOB基因图谱异常,26株KatG基因图谱异常,29株rpsL基因图谱异常,检测敏感性分别为rPOB(87.8%)、KatG(63.4%),rpsL(70.7%)。结论:结核分枝杆菌对RFP、INH、SM产生耐药性的机制主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。

肺泡灌洗液噬菌体裂解法检测肺结核诊断价值研究

目的探讨肺泡灌洗液噬菌体裂解法快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对30例肺结核患者及30例非肺结核患者肺泡灌洗液标本进行噬菌体裂解法实验,并与常规肺结核检查方法对照。结果肺泡灌洗液噬菌体裂解法敏感性60.0%,与痰抗酸染色相比较,差异有显著意义,其特异性为100%,高于PPD试验及结核抗体检测。此法阳性预测值为100%,阴性预测值为71.4%。结论肺泡灌洗液噬菌体裂解法检测结核分枝杆菌快速、简便,可作为结核病诊断的重要方法。

固体硝酸盐还原酶用于结核分枝杆菌药敏试验的可行性研究

目的探讨固体硝酸盐还原酶试剂用于结核分枝杆菌药物敏感性试验的可行性。方法以标准绝对浓度法为参考方法,对79株不同耐药模式的结核菌进行固体硝酸盐还原酶药敏试验,并对两种试验结果进行kappa检验。结果三种一线抗结核药物的敏感性和特异性分别为:利福平:94.6%和97.6%;异烟肼:97.7%和88.2%;链霉素:97.2%和95.3%。经kappa检验,k系数分别为0.92,0.87,0.92。74.7%的菌株在7天就获得药敏试验结果,10天为98.7%,14天达100%。结论固体硝酸盐还原酶试剂配制简单,保存时间长,用于结核分枝杆菌药敏试验,省时且经济适用。

左氧氟沙星联合微卡治疗复治老年肺结核疗效的观察

目的:观察和评价含有左氧氟沙星的化疗方案联合应用微卡(母牛分枝杆菌)治疗复治老年肺结核的疗效。方法:将97例老年肺结核患者随机分为:治疗组(V+M组)50例,对照组(H组)47例;化疗方案:治疗组4VHZM/5VHL3,对照组4HZO/5HZO。观察两组痰菌阴转率、病灶吸收率、空洞闭合率以及免疫功能改善情况。结果:治疗组痰菌阴转率、病灶吸收率、空洞直径缩小率分别为84%、85%、66%,明显高于对照组的42%、35%、26%(P<0.01)。治疗组CD3、CD4较治疗前明显升高,CD8明显降低,CD4/CD8比值升高,两组不良反应率差异无显著性(P>0.05)。结论:左氧氟沙星与微卡联用可提高复治老年肺结核的疗效,使用安全。

微卡结合标准化疗方案治疗复治涂阳肺结核效果研究

目的 评价化疗并用母牛分枝杆菌菌苗治疗复治涂阳肺结核的效果.方法 将患者随机分为微卡加化疗治疗组与单纯化疗对照组,观察治疗结束肺部病灶吸收、空洞闭合及痰菌阴转情况.结果 满疗程痰菌阴转率分别为93.5%和75.6%,治疗组高于对照组,两组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.治疗组与对照组肺部病灶吸收率分别为84.8%和48.9%,空洞闭合率为60.9%和37.8%,两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 微卡能提高痰菌阴转率,有助于病灶吸收,可作为复治涂阳肺结核的免疫治疗和化疗的辅助治疗.

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对不同分枝杆菌致敏动物的鉴别作用

目的探讨结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对不同分枝杆菌致敏动物的鉴别作用。方法以不同分枝杆菌分别致敏豚鼠,致敏成功后,每只豚鼠皮内分别注射结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)。用双盲法记录注射后24和48h注射局部硬结的纵径和横径,计算其均值。结果PPD对结核分枝杆菌活菌、死菌和卡介苗致敏豚鼠的皮肤反应均为阳性,局部硬结直径分别为(13.91±1.04)mm、(13.11±1.40)mm和(13.16±1.43)mm。结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对结核分枝杆菌活菌致敏豚鼠的皮肤反应为强阳性(≥10mm),局部硬结直径为(10.53±2.66)mm;对结核分枝杆菌死菌致敏豚鼠的皮肤反应为弱阳性(≤5mm)或阴性,局部硬结直径为(1.61±1.39)mm;对卡介苗致敏豚鼠的皮肤反应为阴性,局部硬结直径为0。结论结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白可鉴别结核分枝杆菌活菌、死菌和卡介苗致敏动物。

白细胞介素32与结核病的研究进展

白细胞介素32(interleukin 32,IL-32)是一种潜在性非常高的促炎症细胞因子(cytokine,CK),在很多炎症性疾病中都能检测到它的存在。相关疾病的研究中,其在传染性结核病(tuberculosis,TB)领域的研究于最近几年有一定的进展,有研究表明IL-32与结核病的免疫机制相关。这对于结核病致病机理研究、有效诊断和治疗可能有重要意义。

结核分枝杆菌Mtb81蛋白的表达及应用研究

目的克隆结核分枝杆菌Mtb81蛋白的编码基因Rv1837c,并在大肠杆菌中表达、纯化,获得重组蛋白Mtb81。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv1837c基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG诱导表达,纯化表达产物,获得重组Mtb81。ELISA检测重组Mtb81蛋白的敏感性和特异性。结果重组质粒pETRv1837c测序表明具有正确的编码序列,质粒构建成功,重组蛋白Mtb81在大肠杆菌中以包涵体和可溶性形式稳定表达。以Mtb81为抗原ELISA检测结核病患者血清抗体总敏感性为20.83%,特异性为95.83%。结论结核分枝杆菌Mtb81重组蛋白能在大肠杆菌工程菌种成功表达,为进一步的应用研究奠定基础。

应用分子线性探针技术快速筛查耐多药结核病的研究

目的应用分子线性探针(Geno Type MTBDRplus·GTplus)技术检测绵阳地区结核分枝杆菌的耐药性,了解耐多药结核病的状况,为制定地区结核病的预防控制策略提供科学依据。方法应用病例对照研究方法,对绵阳市9个县(市、区)送检的235株结核分枝杆菌同时运用GTplus和国际标准法-比例法检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药性,分析GTplus诊断耐多药结核病的敏感性和特异性。结果 228株样本的结果有效,GTplus检测绵阳地区结核病耐多药率为14.04%(32/228),与比例法14.47%(33/228)相比,诊断耐多药结核病的结果差异无统计学意义(P>0.05),敏感性和特异性分别为81.82%(27/33)和97.44%(190/195);结果报告时间1 d,明显快于比例法的42 d。结论 GTplus诊断耐多药结核菌特异、敏感、快速、方便,对控制结核病的传播具有重要意义。

巢式聚合酶链反应检测麻风菌利福平耐药基因的研究

目的提高检测麻风菌的利福平耐药基因(rpoB)的敏感性。方法设立含聚合酶链反应增效剂(Q-solution)试验组和无PCR反应增效剂对照组,以比较增效剂对PCR的影响;采用巢式PCR,对第一轮PCR未扩增出rpoB基因390bp片段的标本,再进行第二轮PCR,扩增出rpoB突变集中区域的193bp片段;之后用双脱氧链终止法,对阳性PCR产物直接测序。结果Q-solution可显著提高PCR的敏感性,但是常规PCR检测rpoB基因的敏感性仅为45·2%。在确立巢式PCR最佳条件后,使用Q-solution可使其敏感性提高至90·5%。结论PCR反应增效剂和巢式PCR相结合可明显提高检测rpoB的敏感性和特异性。

环介导等温扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌的研究

〔目的〕寻找1种快速的,且敏感度高,特异性强的结核分枝杆菌的检测方法。〔方法〕环介导等温扩增基因检测(Loop-mediated isothermal amplification LAMP)是一种便捷、灵敏度高而又特异性强的核酸基因扩增检测技术。本课题组根据结核分枝杆菌gyrB特征性序列设计3对特征性引物对痰液中和培养基中的结核分枝杆菌进行检测。其中1对环状引物结合于特征性序列中环状结构部分,可极大地加快LAMP反应速度,且不干扰内引物在LAMP反应中作用。〔结果〕实验结果表明:使用环状引物的LAMP反应可在0.5h内完成,总共分析时间不超过1h。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,LAMP检测技术具有与实时PCR(Real-timePCR)技术相同的特异度。另外,由于LAMP检测技术是在恒温的情况下进行,不需要特别昂贵的仪器设备,检测方法简单,结果判定直接。〔结论〕该方法的特点和优势可以使之在基层实验室及现场监测方面广泛使用,在快速检测方面具有一定的开发潜力。