MYH10基因在大恒699肉鸡、白羽肉鸡以及藏鸡不同组织器官中的表达差异研究

为了研究MYH10基因在不同鸡种不同组织器官间的表达差异,试验利用定量PCR方法检测了MYH10基因在白羽肉鸡、大恒699肉鸡、藏鸡不同组织器官（胸肌、腿肌、下丘脑、垂体）、不同生长阶段（2周龄、6周龄、10周龄）的表达量。结果表明：在2周龄,白羽肉鸡公鸡胸肌中MYH10基因的表达量显著高于大恒699肉鸡（P〈0. 05）,白羽肉鸡母鸡胸肌中MYH10基因的表达量极显著低于其他鸡种（P〈0. 01）,藏鸡公母鸡腿肌中MYH10基因的表达量极显著高于其他鸡种（P〈0. 01）;在6周龄,白羽肉鸡公鸡胸肌中MYH10基因的表达量显著高于大恒699肉鸡（P〈0. 05）,藏鸡母鸡胸肌和腿肌中MYH10基因的表达量分别显著高于大恒699肉鸡和白羽肉鸡;在10周龄,藏鸡公母鸡胸肌中MYH10基因表达量极显著高于其他鸡种（P 〈0. 01）。说明MYH10基因参与了鸡肌肉组织的生长和发育过程的调控。

稳定敲低MYH10基因细胞株的建立

目的构建稳定敲低MYH10基因的COS-7细胞株。方法在293TX细胞中进行病毒的包装,用获得的高效价慢病毒感染COS-7细胞,通过免疫印迹和荧光显微镜,检测病毒感染后COS-7细胞MYH10蛋白表达的变化。结果在构建的两种重组质粒中,MYH10-lentiviral shRNA-2在转染后表现出明显的干扰作用,感染后能明显下调COS-7细胞的MYH10蛋白表达。结论病毒感染的COS-7细胞可明显抑制COS-7细胞内源MYH10的表达,说明了稳定敲低MYH10基因的COS-7细胞株的建立,为进一步研究MYH10在相关疾病中的功能奠定了基础。

A1AT、MYH10在膀胱尿路上皮癌中的表达及其临床意义

目的探讨α-抗胰蛋白酶A1AT、肌球蛋白10MYH10在膀胱尿路上皮癌组织中的表达与其病理分级和临床分期的关系。方法采用免疫组化SP法检测标本中A1AT、MYH10的表达,根据临床病理资料进行分析;A1AT、MYH10的表达情况与膀胱癌的病理分级及临床分期的关系采用χ2和Fishers确切概率法统计分析。结果在癌旁正常膀胱组织中A1AT和MYH10的阳性表达率分别为10%、0%,而在60例膀胱尿路上皮癌细胞及癌旁间质细胞中,阳性表达率分别为81.7%、60%,膀胱尿路上皮癌细胞及癌旁间质细胞A1AT和MYH10阳性表达率显著高于癌旁正常膀胱组织(P<0.01)。A1AT和MYH10的阳性表达率在低分级膀胱尿路上皮癌中分别为68%、36%,在高分级膀胱尿路上皮癌中分别为91.4%、77.1%,在非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌中分别为65%、30%,在肌层浸润性膀胱尿路上皮癌中分别为90%、75%。A1AT和MYH10在高分级、肌层浸润性膀胱癌组织中的阳性表达率明显高于低分级、非肌层浸润性膀胱癌组织,2种标记物在膀胱癌的病理分级和临床分期之间表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 A1AT、MYH10在膀胱尿路上皮癌的发生、发展过程中可能起到重要作用,可作为膀胱尿路上皮癌的新的肿瘤标记物,并为膀胱尿路上皮癌的预防及诊疗提供新的靶点。

大白猪和山西黑猪肌肉组织中MYH10基因发育性表达研究

为了研究MYH10在猪不同类型肌肉中的表达变化趋势,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,Real-time PCR)技术检测了3个发育日龄的大白猪和山西黑猪三种肌肉组织中MYH10基因的表达变化。结果表明,MYH10基因在两个品种的背最长肌和腰大肌中的表达存在相似的变化趋势。在25日龄的背最长肌和腰大肌中的表达量最高,在70 d时表达量降到最低水平,而后背最长肌表达量逐渐升高,但腰大肌的表达量仍然保持在低水平。两个品种不同组织间的表达结果相似,在25 d和70 d时MYH10在腰大肌中表达极显著高于背最长肌和股二头肌(P<0.01),而在发育后期背最长肌和股二头肌中的表达量逐渐升高,150 d时极显著高于腰大肌的表达量(P<0.01)。本研究的结果充分说明,MYH10在肌纤维发育与分化过程中具有重要的调节作用。

基于公共数据库分析CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌中表达及预后的意义

目的探讨CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌中表达及预后的意义。方法通过GEO数据库分析获取肾透明细胞差异基因,并使用DAVID数据库对差异基因进行富集分析和功能注释,通过HPA数据库获取CLDN10与MYH10在正常肾脏组织蛋白表达图谱,再通过GEPIA数据库获取CLDN10与MYH10表达差异及肾透明细胞癌患者的预后信息。结果GEO数据库分析表达谱数据集GSE105261共得到438个差异基因,DAVID数据库富集分析表明这些差异基因主要富集在分泌过程、细胞外的外泌体、细胞外基质结构组分以及抗生素的生物合成。GEPIA数据库分析显示:CLDN10与MYH10在正常对照组中表达较肿瘤组显著增高(P<0.05),差异具有统计学意义。CLDN10表达与MYH10表达呈显著正相关(P<0.05),并且CLDN10、MYH10表达量与肾透明细胞癌患者的病理分期呈负相关(P<0.05),与总生存及无病生存呈明显正相关(P<0.05)。结论CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌组织中低表达,并且与患者的生存预后明显相关,CLDN10与MYH10有望成为预测肾透明细胞癌患者预后的生物标志物及治疗的靶点。

微小RNA-223-3p通过调节MYH10基因促进巨核细胞多倍体化

目的探讨微小RNA-223-3p(miR-223-3p)对巨核细胞分化和成熟的影响,并初步探索其中可能的机制。方法通过实时定量PCR检测巨核细胞分化过程中miR-223-3p的内源性表达变化趋势,而后外源调节miR-223-3p在细胞系中的表达量,并通过流式细胞术检测其对于巨核细胞分化和成熟的影响,运用生物信息学分析,找到其发挥相关生物学作用的靶基因MYH10,并通过实时定量PCR、荧光素酶、流式细胞术验证MYH10是miR-223-3p的靶基因。结果内源性miR-223-3p随着巨核细胞的分化成熟表达量增加,在K562和Meg-01细胞系中转染miR-223-3p mimics后可升高巨核细胞相关表面标志CD41和CD61的阳性率,同时显著促进多倍体的形成,MYH10的基因表达随miR-223-3p表达升高而下降,通过双荧光素酶报告基因技术验证MYH10基因是miR-223-3p的靶基因,进一步抑制MYH10基因表达后,可促进巨核细胞多倍体化。结论 miR-223-3p可通过调控MYH10的表达调节巨核细胞的成熟。

基于多数据库分析MYH10在肾透明细胞癌中的表达与意义

目的分析MYH10基因在肾透明细胞癌中的表达水平及意义。方法应用UALCAN数据库分析MYH10基因在肾透明细胞癌组织与正常对照组织中的差异性表达、肿瘤分级、启动子甲基化和预后,应用GEPIA数据库检索MYH10基因的表达及肿瘤分级,应用GEPIA数据库分析MYH10基因表达对肾透明细胞癌患者生存时间的影响,应用Oncomine数据库检索肾透明细胞癌中与MYH10有共表达的基因,应用GEPIA分析MYH10与共表达基因的相关性,并通过STRING数据库对MYH10的蛋白质相互作用网络进行分析。结果肾透明细胞癌组织中MYH10表达水平低于正常组织(P<0.05);MYH10过表达与肿瘤分级相关,并且随分级增高MYH10表达降低(P<0.05);低表达的MYH10基因与患者低生存率有关(P<0.05);MYH10与RAB3A的共表达显著相关,MYH10可能参与炎症反应和免疫细胞浸润;STRING蛋白质分析网络显示,MYH10可能与MYL6B、MYL6、MYL9、MYL12B、CDC42、MYL1、MYLPF、MYH9、MYL2、MYLK等蛋白相互作用。结论MYH10在肾透明细胞癌中呈低表达,其表达水平与肾透明细胞癌患者生存与预后有关,MYH10可能通过参与炎症反应和免疫细胞浸润影响肾透明细胞癌患者的临床结局。

人源Krt5促进斑马鱼成纤维细胞丝状伪足形成和伤口愈合

目的:探究斑马鱼角蛋白Krt5和M1/M2型巨噬细胞极化因子调节斑马鱼下颌和心脏芽基可塑性再生过程的机制。方法:在斑马鱼胚胎成纤维细胞PAC2中过表达人源Krt5,添加4个代表性的巨噬细胞极化因子蛋白。在检测蛋白表达情况后,免疫荧光法观察Krt5和F-actin在PAC2细胞的分布变化;细胞划痕实验检测PAC2细胞迁移能力;转录组测序和免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析Krt5调控网络。结果:Krt5围绕着细胞核,在胞浆成束成网分布并扩展到细胞质膜;过表达Krt5增加鬼笔环肽标记的F-actin代表的细胞丝状伪足形成,并加快细胞迁移愈合;转录组分析显示,Krt5明显增加Rac2/Rhov、NF-κB、Mylkb、Ifnphi1、IL-13和IL-11的转录,降低多个胶原蛋白、肌动蛋白和TGF-β家族基因转录,同时IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10诱导处理总体上与Krt5作用一致;IP-MS证实Krt5与α-辅肌动蛋白(Actn1)和非肌肉肌球蛋白重链(Myh9b,Myh10)紧密结合。结论:Krt5可能通过与肌动蛋白相互作用激活Rac/Rho机制从而促进细胞生成丝状伪足,重塑细胞因子受体结构与巨噬细胞极化因子的相互作用。