北京黑猪MYH3和MYH13基因多态性与肉质性状的关联分析

【目的】试验旨在研究肌球蛋白重链3(myosin heavy chain 3,MYH3)和肌球蛋白重链13(myosin heavy chain 13,MYH13)基因遗传变异对猪肉质性状的影响。【方法】利用北京黑猪背最长肌样本进行肉质性状(肌内脂肪(intramuscular fat, IMF)、水分、滴水损失、酸碱度(pH)、肉色L^(*)值、肉色a^(*)值和肉色b^(*)值)表型数据的测定。利用PCR和Sanger测序技术对MYH3和MYH13基因启动子区和CDS区进行基因分型。将性别、场、日龄作为协变量,采用协方差分析,确定与猪肉质性状相关的SNPs,利用实时荧光定量PCR检测基因表达水平。【结果】试验共筛选到9个SNPs,其中MYH3基因CDS区有1个错义突变(c.5782 G>C)与IMF显著相关(P<0.05),且MYH3基因表达水平与IMF呈正相关;MYH13基因CDS区有4个SNPs,其中2个(c.1923 G>A、c.1308 G>A)与肉色a^(*)值显著相关,1个(c.963 G>A)与滴水损失显著相关,1个(c.237 G>T)与肉色L^(*)值显著相关(P<0.05);MYH13基因启动子区有4个SNPs,其中2个(rs699287502、rs318639161)与肉色L^(*)值显著相关,2个(rs321315318、rs330770991)与滴水损失显著相关(P<0.05),且MYH13基因表达水平与滴水损失呈负相关。【结论】MYH3基因有1个SNP与IMF显著相关,且其基因表达水平与IMF呈正相关。MYH13基因中存在3个SNPs与滴水损失显著相关,且该基因启动子区2个SNPs基因表达水平与滴水损失呈负相关;3个SNPs与肉色L^(*)值显著相关;2个SNPs与肉色a^(*)值显著相关。以上SNPs均可作为影响北京黑猪肉质性状的候选基因功能位点。

Myh13敲除小鼠表型的初步分析

目的对Myh13基因敲除小鼠模型进行初步的表型分析,探讨Myh13的生物学功能。方法利用qRT-PCR和Western blotting技术检测小鼠中Myh13的表达情况;采用基因测序、q RT-PCR和Western blotting法验证Myh13敲除小鼠;统计杂合子小鼠自交产生的子代小鼠中各基因型比例;观察小鼠体质量变化趋势,并检测血液生化指标;对小鼠眼外肌进行HE染色和透射电子显微镜观察。结果在小鼠模型中,Myh13特异性高表达于眼外肌组织。经DNA、RNA和蛋白水平验证,Myh13敲除小鼠中目的基因成功剔除。杂合子小鼠子代中各基因型小鼠比例符合孟德尔遗传规律。Myh13敲除对小鼠的体质量、血生化指标无明显影响。HE染色结果提示,与野生型小鼠相比,杂合子和纯合子小鼠的眼外肌均无明显异常。电子显微镜下,杂合子和纯合子小鼠眼外肌中可见散在脂滴,并且纯合子小鼠还可见肌质网扩张的现象。结论 Myh13的敲除可改变小鼠眼外肌的微观结构,可能会影响眼外肌的功能。