Myocardin相关转录因子-A对缺氧缺血诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究Myocardin相关转录因子-A(MRTF-A)对缺氧缺血诱导的心肌细胞凋亡的影响及机制。方法 20只大鼠采用随机数字表分为假手术组和缺血再灌注组。假手术组大鼠实行开胸手术但不构建缺血再灌注模型,缺血再灌注组结扎冠状动脉30min再松开2h建立在体心肌缺血再灌注损伤模型。采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测MRTF-A表达;体外培养大鼠原代心肌细胞,转染MRTF-A及小分子mRNA表达质粒并构建缺氧缺血模型。通过流式细胞术检测细胞凋亡率,以Western blot法分析凋亡相关基因bcl-2蛋白表达;采用荧光素酶检测bcl-2转录活性。结果假手术组和缺血再灌注组的心肌凋亡细胞分别为(8.14±2.33)%和(82.35±7.93)%,缺血再灌注组高于假手术组(P<0.05)。假手术组有少量MRTF-A蛋白表达,缺血再灌注组胞浆中有大量MRTF-A蛋白表达。在体外培养的原代心肌细胞中,对照组、模型组、MRTF-A处理组与MRTF-A抑制组的凋亡率分别为(4.63+2 33)%、(79.97+9.09)%、(43.63+3.52)%和(72.16+5.37)%;bcl-2的蛋白表达分别为0.313+0.014、0.186+0.019、0.254+0 013与0.175+0.017。模型组凋亡率高于对照组(P<0.01),MRTF-A处理组的凋亡率低于模型组(P<0.01);MRTF-A抑制组的凋亡率高于MR:TF-A处理组(P<0.05);模型组bcl-2的蛋白低于对照组(P<0.01),MRTF-A处理组的bcl-2的蛋白高于模型组(P<0.01);MRTF-A抑制组的bcl-2的蛋白低于MRTF-A处理组(P)<0.05);MRTF-A对bcl-2的转录活性的调控与对照组相比明显升高(P<0.01),而MRTF-A对突变后的bcl-2的转录活性与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论缺血再灌注损伤诱导了大鼠心肌细胞凋亡,上调了心肌组织中MRTF-A的蛋白表达;MRTF-A通过上调bcl-2的转录活性表达起到对缺氧缺血诱导的大鼠原代心肌细胞凋亡损伤的保护作用。

LPS诱导急性肺损伤大鼠肺组织甲状腺转录因子-1表达变化

目的探讨内毒素(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织甲状腺转录因子-1(TTF-1)、肺表面活性物质相关蛋白-A(SP-A)表达的变化。方法采用免疫组化和RT-PCR检测各组肺组织TTF-1、SP-A表达。结果ALI后12、24 h,肺组织中TTF-1、SP-A表达水平明显降低,且TTF-1蛋白变化与SP-A mRNA变化呈显著正相关。结论ALI大鼠肺组织TTF-1表达明显降低可能与ALI发生、发展有关。

MRTF-A在体内和体外调控乳腺癌发展过程中COL1A1基因的表达

目的探讨心肌素相关转录因子-A (MRTF-A)对乳腺癌中I型胶原蛋白基因(COL1A1)基因表达的调控机制。方法选取18例经彩色多普勒超声确定为乳腺肿块的患者,后经病理检查,8例为良性,10例为恶性。实时定量PCR检测乳腺肿块及人乳腺癌细胞中MRTF-A和COL1A1的表达。MRTF-A干扰RNA转染乳腺癌细胞后,检测COL1A1的表达,荧光素酶报告检测MRTF-A与COL1A1启动子的结合。染色质免疫共沉淀(Ch IP)检测MRTF-A对COL1A1转录的影响。Wnt 3a和-catenin干扰RNA转染乳腺癌细胞后,检测MRTF-A和COL1A1的表达。结果MRTF-A和COL1A1在恶性肿块的表达显著高于其在良性肿块的表达。MRTF-A沉默可以抑制COL1A1 mRNA的表达,且降低COL1A1启动子荧光素酶活性。MRTF-A可与COL1A1启动子上CAr G DNA片段有效结合,MRTF-A沉默可降低乙酰化组蛋白H3K9和RNA聚合酶Ⅱ在COL1A1启动子处富集。Wnt 3a及-catenin在恶性肿块中的表达显著高于其在良性肿块中的表达,且无论是Wnt 3a沉默还是-catenin沉默均可显著抑制MRTF-A和COL1A1的表达。结论MRTF-A通过激活COL1A1的转录促进乳腺癌转移,Wnt/-catenin信号可调控此过程。