microRNA-146a通过靶向MAPK4和Myosin Va基因调控羊驼黑色素细胞增殖、迁移

旨在研究microRNA-146a(miR-146a)对羊驼黑色素细胞增殖和迁移的调控及其分子机制。本研究使用双荧光素酶试验验证MAPK4和Myosin Va是miR-146a的靶基因;利用荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹试验检测在羊驼黑色素细胞中过表达miR-146a对相关下游基因表达的影响;利用CCK8和Transwell检测miR-146a过表达对羊驼黑色素细胞增殖和迁移的影响。结果显示,与对照组相比,将miR-146a和MAPK4或Myosin Va共转染293T细胞,双荧光素酶活性分别极显著下降36%和30%(P<0.001);MAPK4和Myosin Va基因转录水平分别极显著下调67%和47%(P<0.001,P<0.01);蛋白质水平的表达量分别显著或极显著下调38%和69%(P<0.05,P<0.01);增殖和迁移相关的基因CREB、MITF、MLPH和Rab27a在转录水平和蛋白水平的表达均极显著下调(P<0.01,P<0.001);CCK8和Transwell结果显示,过表达miR-146a使羊驼黑色素细胞的增殖和迁移能力极显著下调(P<0.01)。综上所述,miR-146a通过靶向调控MAPK4和Myosin Va,使增殖和迁移相关的基因MEK1、CREB、MITF、MLPH和Rab27a的表达下调,从而对羊驼黑色素细胞的增殖和迁移起抑制作用。

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因myosin Va表达的影响

目的:观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机理,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。方法:本实验采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、RT-PCR等先进检测手段和方法,观察了多项指标,尤其是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。结果:肌球蛋白Va(myosin Va),在糖尿病大鼠肾脏表达下调,肾消康治疗组表达上调。结论:应用Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,myosin Va是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一,并对该基因做荧光定量RT-PCR测序分析,这在国内外尚属首次。基因功能分析表明,在糖尿病状态下,myosin Va表达下调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中myosin Va表达上调,可见肾消康对myosin Va基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。

Myosin Va RNAi慢病毒载体的构建及对肺癌PG细胞运动和迁移能力的影响

目的构建人非常规肌球蛋白myosinVa基因RNAi慢病毒载体,并探讨其对人肺巨细胞癌PG细胞运动和迁移能力的影响。方法针对已经筛选确定的myosinVa基因RNAi有效靶序列,合成靶序列及其阴性对照的寡聚DNA,并连接到pSuper载体获得中间实验质粒pSuper-shM5A及阴性对照pSuper-shCON;然后将H1promoter-shM5A/shCON表达框重组到慢病毒载体plenti4上,分别得到plenti4-H1-shM5A和shCON载体,并进行慢病毒包装。随后用病毒上清感染PG细胞,并筛选出zeocin抗性的稳定细胞系PG-shM5A和shCON。通过RT-PCR方法检测PG-shM5A和shCON细胞的myosinVamRNA表达水平;用创伤愈合和Boyden小室实验测定PG-shM5A和shCON细胞的运动和迁移能力。结果限制性内切酶酶切和测序证实,成功构建myosinVaRNAi慢病毒载体plenti4-H1-shM5A。慢病毒包装成功后,感染PG细胞并获得zeocin抗性的细胞;用RT-PCR方法证明,myosinVamRNA被抑制70%以上。创伤愈合和Boyden小室实验表明,感染携带myosinVaRNAi慢病毒的PG细胞运动和迁移能力显著下调。结论成功构建myosinVaRNAi慢病毒载体plenti4-H1-shM5A,它能有效抑制人肺巨细胞癌PG细胞的myosinVa表达并降低其运动和迁移能力,初步揭示了myosinVa与肿瘤细胞恶性行为的相关性。

黑素体在黑素细胞内运输及调控机制的研究进展

黑素体(MS)是黑素细胞(MC)中一种合成、储存和运输黑素的特殊膜性细胞器,其类型、数量、分布及成熟状态决定了人类肤色的差异。MS在MC内的运输是3种动力蛋白与两种细胞骨架之间相互作用的结果,此过程受多种调节因素影响。MS运输障碍与多种色素性疾病相关,加深对MS运输机制的了解有助于提高对MS运输障碍相关性疾病的认识,为临床治疗和药物研发提供新依据。

免疫荧光法标记中华绒螯蟹精巢中的肌球蛋白-Va

肌球蛋白-Va是最具典型特征的肌球蛋白-V.肌球蛋白-Va参与细胞内小泡的运输和在缺少微管的的神经区域的小泡运输机制中是一种非常重要的马达蛋白。本文以杭州当地水产品市场的成熟的雄性中华绒螯蟹为材料,采用间接免疫荧光标记的方法并发现肌球蛋-Va在中华绒螯蟹精巢中表达。