柱前衍生化HPLC法测定N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液的含量

目的建立柱前衍生化高效液相色谱（HPLC）法测定N（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液含量的方法。方法 采用异硫氰酸苯酯作柱前衍生剂，色谱柱为Waters sunfire ODS柱（4．6mm×250mm），流动相为：乙腈-0．1mol／L醋酸钠（用稀醋酸调整pH5．50）为44：56，柱温30％，检测波长254nm.结果线性范围为0.025～2.5mg／mL（r=0．9998），平均加样回收率为99．9％，RSD为0．5％。结论此法操作简单快速，灵敏度高，结果准确可靠．适用于N（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液中N（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的含量测定。

首批N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺国家对照品的研制

目的建立首批N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺国家对照品。方法应用红外光谱、液质联用仪等对N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺进行结构确证,采用HPLC法测定纯度及氨基酸比值,采用3种方法进行含量测定。结果确定首批N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺对照品的含量为99.8%。结论首批N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺国家对照品可用于N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰铵及其制剂的定性和定量控制。

液相色谱-三重四级杆质谱联用法检测人类辅助生殖技术用液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺含量

目的:建立采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺指标成分的方法,分析不同用途培养液中N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺的含量。方法:采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法,使用SUPELCO Discovery HS F5-3色谱柱(150 mm×2.1 mm,3μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.35 mL·min^(-1),柱温40℃;质谱采用电喷雾离子源,负离子模式扫描,扫描方式为多反应监测。结果与结论:N(2)-L-丙酰胺-L-谷氨酰胺在1.276~12.76μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好;平均加样回收率在100.5%~103.0%,相对标准偏差小于1.98%。说明采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液灵敏、快速、准确、专属性强,可为体外生殖培养液的质量标准研究提供依据。

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的合成工艺优化

为了探索N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的合成工艺,确定最佳工艺以符合工业化生产的需求,以L-谷氨酰胺为原料,通过氨解反应合成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,并对反应条件及精制工艺进行优化。实验结果显示,当设定氨解反应温度为60℃,反应压力为0.5MPa,反应时间为5.5h,以及氨水体积与α-D-氯丙酰-L-谷氨酰胺质量之比(V∶m)为1.5∶1时,将所得粗品用75%乙醇溶液进行精制,合成得到的N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺经检测含量为99.65%,总收率约为55.77%。结果表明,经优化后的工艺简便安全、条件温和易控、生产周期短,适合工业化大量生产,且产品纯度、收率较高。

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺及有关物质的高效液相色谱分析

目的考察不同色谱条件下N（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（L-Ala-L-Gln）及其有关物质的色谱行为,建立L-Ala-L-Gln有关物质的高效液相色谱含量测定方法。方法氨基键合硅胶柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调pH值至4）70：30为流动相;流速为1.0 mL/min;检测波长为215 nm;柱温为40℃。结果L-Ala-L-Gln在10～100μg/mL浓度范围内呈良好线性关系（r=0.999 8）,并且可以同时测定含量和有关物质,重复性试验RSD为0.81%（n=6）。结论此法简单,分离度良好,结果准确,可以用于L-Ala-L-Gln的含量和有关物质的检测。

丙氨酰谷氨酰胺通过JAK2/STAT3通路减轻失血性休克小鼠急性肺损伤的作用机制

目的研究N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(NLAG)通过Janus激酶2(JAK2)/信号传导与活化转录因子3(STAT3)通路减轻失血性休克小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制。方法选择野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、NLAG+模型组、Ad-NC组、Ad-NC+模型组、Ad-NC+NLAG+模型组和Ad-JAK2+NLAG+模型组,每组8只。采用心脏穿刺、抽取30%总血量的方法建立失血性休克致ALI模型,造模前30 min给予生理盐水或NLAG腹腔注射干预,造模前2周给予相应的腺病毒Ad-NC或Ad-JAK2尾静脉注射。造模后24 h计算肺指数=肺湿重/体质量,肺组织进行HE染色并计算肺损伤评分,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性和p-JAK2、p-STAT3表达水平。结果模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达高于对照组,SOD活性低于对照组(P<0.05);NLAG+模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达低于模型组,SOD活性高于模型组(P<0.05);尾静脉注射腺病毒后,Ad-JAK2+NLAG+模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达高于Ad-NC+NLAG+模型组,SOD活性低于Ad-NC+NLAG+模型组(P<0.05)。结论NLAG明显减轻失血性休克小鼠的ALI,该作用与抑制JAK2/STAT3通路介导的炎症反应和氧化应激有关。

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺抑制失血性休克大鼠肠黏膜损伤

目的探讨N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(NLAG)对失血性休克大鼠肠黏膜屏障的作用及其对TLR4/Myd88信号通路表达的影响。方法清洁级SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham)、失血性休克组(HS)和NLAG组,每组10只。按大鼠总血容量35%放血建立HS模型,HS组自体血回输复苏,NLAG组于HS后腹腔注射NLAG。于HS发生后4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;检测血中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)和D-乳酸浓度;ELISA检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10浓度;Western-blot法检测TLR4、Myd88、NF-κB蛋白表达水平。结果 NLAG抑制脓毒症引发的全身炎症反应,降低血浆中I-FABP、D-乳酸含量,下调血浆中TNF-,IL-6和IL-10含量;抑制肠损伤,改善肠屏障功能,降低肠粘膜TLR4、Myd88、NF-κB蛋白表达水平。结论

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺对肾缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关因子表达的影响

目的探讨N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(LAG)对肾缺血再灌注致心肌细胞凋亡及相关因子表达的影响。方法清洁级Wistar大鼠30只,体重250~300 g,随机分为3组(n=10):假手术组(sham组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和LAG处理组(LAG+I/R组)。Sham组仅切除右肾,游离左肾动脉,关腹。LAG+I/R组和I/R组切除右肾,夹闭左肾动脉45min再灌注以制备肾缺血再灌注模型,分别于夹闭动脉前30min给予LAG150mg/kg和等量生理盐水。三组均于再灌注6h处死大鼠,取心肌组织,HE染色观察病理组织学变化,Masson染色观察心肌细胞变化;ELISA检测血浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western-blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果 N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺能够减轻肾缺血再灌注致心肌细胞损伤,可降低MDA表达水平,升高SOD表达(P<0.05),抑制心肌中Bax和Caspase-3蛋白表达(P<0.05)。结论肾缺血再灌注可导致心肌细胞凋亡,造成一定的心肌损伤,LAG对肾缺血再灌注心脏损伤的保护作用可能与升高SOD和Bcl-2表达,降低MDA、Bax和Caspase-3表达相关。

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的合成工艺研究

以D-2-氯代丙酰氯和L-谷氨酰胺为原料,缩合得到N-(D-2-氯丙酰)-L-谷氨酰胺,再经氨化后得到N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。缩合反应使用2倍氢氧化钠水溶液并采用与D-2-氯代丙酰氯同时滴加的方式、在两相的甲苯/水体系中、温度在0～5℃结果最佳,收率92%。氨解反应使用浓氨水、在60℃下结果最佳,收率67.5%。

茚三酮柱后衍生法测定丙氨酰-谷氨酰胺的含量

目的建立茚三酮柱后衍生化氨基酸分析仪测定N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-Ala-L-Glu)含量的方法。方法根据L-Ala-L-Glu与茚三酮反应后溶液在570 nm处有最大吸收的原理,以钾钠缓冲液为流动相,将L-Ala-L-Glu洗脱后,与茚三酮进行柱后衍生反应,生成可以被分光光度计检测的有色物质,氨基酸分析仪测定L-Ala-L-Glu的含量。结果 L-Ala-L-Glu在1～20 mg.L-1内线性关系良好(r=0.997 9),低、中、高3种浓度的回收率分别为94.5%,97.6%和98.7%;RSD分别为0.52%,0.10%和0.06%。结论本法操作简单,分离度良好,结果准确可靠,可用于L-Ala-L-Glu的含量测定。