红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响

目的:观察红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响,并探讨可能机制。方法:取对数期T24细胞,随机分为对照组(常规培养)、红芪多糖组(加入红芪多糖0.8μg/L)、SP600125组(加入SP60012510μmol/L)、联合组(加入红芪多糖0.8μg/L、SP60012510μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;双染法检测细胞凋亡率;JC-1法检测细胞线粒体损伤;免疫印迹法检测细胞相关蛋白表达。结果:与对照组比较,红芪多糖组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量降低;凋亡率,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达量,p-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/JNK、p-c-Jun/c-Jun升高(均P<0.05)。SP600125组24、48、72 h吸光度值,线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低(均P<0.05)。与红芪多糖组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低(均P<0.05)。结论:红芪多糖可抑制膀胱癌T24细胞增殖,并通过介导线粒体途径促进其凋亡,作用机制可能与激活JNK/c-Jun信号通路有关。

脂联素通过分泌型卷曲相关蛋白2及相关通路缓解AngⅡ诱导的心肌肥厚

目的探讨脂联素(APN)通过调控分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)及相关通路对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥厚的作用及机制。方法出生3d Wistar大鼠中分离出原代心室肌细胞(NRVMs)。采用免疫荧光法检测NRVMs的骨架蛋白α-SMA的表达。将提取的NRVMs分为空白组、1 nmol/L组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、500 nmol/L组,检测不同浓度AngⅡ对NRVMs的作用。将NRVMs分为空白组、AngⅡ组、APN+AngⅡ组、AngⅡ+APN+si-sFRP2组、AngⅡ+APN+LiCl组、APN组、SP600125+AngⅡ组以及SB203580+AngⅡ组检测APN对AngⅡ作用的影响。采用Western blotting法检测各组细胞sFRP2的表达量以及Wnt/β-catenin、p38/JNK通路的激活。采用qPCR法检测各组细胞心肌肥厚相关指标以及sFRP2的表达水平。结果在NRVMs中加入AngⅡ24 h后,与空白组相比,1 nmol/L组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、500 nmol/L组ANP、BNP的表达升高(FANP=27.30,P=0.002;FBNP=38.18,P=0.002),p-JNK和p-p38表达均升高(Fp-JNK=57.65,P<0.001;Fp-p38=8.880,P=0.018),sFRP2的表达下调(FAngⅡ=47.53,P<0.001)。加入APN预处理1 h后,与单加AngⅡ组相比,APN+AngⅡ组NRVMs心功能损伤标志物ANP、BNP的表达降低(FANP=101.8,P<0.001;FBNP=51.14,P<0.001),sFRP2的含量上调(F=88.93,P<0.001),同时Wnt/β-catenin(F=41.33,P=0.006)及p38/JNK(Fp38=73.42,P<0.001;FJNK=39.28,P=0.002)通路的激活被抑制。加入p38/JNK通路抑制剂后,能够达到APN预处理的效果(FANP=122.9,P<0.001;FBNP=202.3,P<0.001)。结论 APN可能通过上调sFRP2,抑制Wnt/β-catenin、p38/JNK通路的激活,从而抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚。

过表达miR-151a-3p抑制PC-3前列腺癌细胞增殖和迁移

目的研究上调微小RNA-151a-3p(miR-151a-3p)对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响和机制。方法采用实时荧光定量PCR检测PC-3M、C4-2B、22RV1、DU-145、PC-3、LNCaP人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-151a-3p的表达量。以miR-151a-3p表达量最低的PC-3细胞为研究对象,生物信息学预测并采用双荧光素酶报告基因实验检验miR-151a-3p的潜在靶基因。转染miR-151a-3p模拟物或阴性对照微小RNA(miR-NC)至PC-3细胞。实时荧光定量PCR检测miR-151a-3p和潜在靶基因mRNA的表达量,Western blot法检测靶基因及下游信号通路蛋白表达量。采用MTT法检测PC-3细胞的增殖,Transwell^(TM)实验检测PC-3细胞的迁移能力。结果 miR-151a-3p在前列腺癌细胞的表达量明显低于RWPE-1人正常前列腺上皮细胞,其中PC-3细胞中的表达量最低。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验表明NIMA相关激酶2(NEK2)是miR-151a-3p的潜在靶基因。转染miR-151a-3p模拟物后,PC-3细胞中miR-151a-3p的表达量明显上升,NEK2基因的表达量明显降低,NEK2基因下游磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K-AKT-mTOR)信号通路蛋白水平降低。上调miR-151a-3p明显抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移。结论miR-151a-3p在前列腺癌细胞中表达降低,上调miR-151a-3p的表达可通过降低NEK2基因及下游PI3K-AKT-mTOR信号通路蛋白的表达抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移。

当归多糖对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响

目的探究当归多糖(ASP)通过调节c-Jun氨基末端激酶(JNK)/转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)(JNK/Nrf2/ARE)信号通路对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响。方法用皮下注射D-半乳糖溶液125 mg·kg^(-1),每日1次,连续6周,建立小鼠衰老模型;ICR小鼠120只,随机分为对照组、模型组及低、高剂量实验组,各30只。造模成功后,低、高剂量实验组小鼠分别每日腹腔注射100,200 mg·kg^(-1)ASP,对照组与模型组注射等量生理盐水,连续干预4周。用试剂盒测定脑组织总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;用蛋白质免疫印迹法检测脑组织中JNK、Nrf2和ARE蛋白表达水平;用免疫组织化学法检测脑组织衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)表达情况。结果对照组、模型组、低、高剂量实验组小鼠脑组织T-AOC活性分别为(4.95±0.38),(0.69±0.71),(2.98±0.17),(3.76±0.21)U·mg-1;SOD活性分别为(84.21±2.62),(49.33±2.15),(60.76±2.42),(71.23±2.51)U·mg-1;GSH-Px活性分别为(45.56±2.84),(16.23±2.92),(25.97±1.31),(34.43±2.11)U·mg-1;MDA含量分别为(3.54±1.02),(9.21±2.83),(6.13±2.60),(4.86±1.25)nmol·mg-1;脑组织JNK蛋白相对表达量分别为0.95±0.05,0.23±0.06,0.41±0.11,0.68±0.12;Nrf2蛋白相对表达量分别为0.92±0.07,0.09±0.05,0.32±0.07,0.70±0.11;ARE蛋白相对表达量分别为0.90±0.06,0.13±0.07,0.30±0.08,0.62±0.09。低、高剂量实验组分别与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ASP可通过抑制氧化应激损伤,同时下调SA-β-Gal表达,发挥抗衰老作用,其作用机制可能与激活JNK/Nrf2/ARE抗氧化信号通路的信号转导有关。

三七总皂苷对缺氧诱导下视网膜神经节细胞凋亡的作用机制研究

目的探究三七总皂苷对缺氧状态下视网膜神经节细胞凋亡的作用机制。方法将细胞分为5组:对照组(细胞未处理组)、模型组(400μmol·L^(-1)氯化钴作用24 h建立缺氧模型)和低、中、高3个剂量实验组(2,10,50μg·mL^(-1)三七总皂苷预处理6 h后,加入400μmol·L^(-1)氯化钴作用24 h)。实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测检测细胞中JNK信号通路(磷酸化c-Jun氨基末端激酶,p-JNK;磷酸化c-jun, p-c-jun)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平(分别是2-ΔΔCt值和灰度值)。结果对照组、模型组和低、中、高3个剂量实验组的细胞存活率分别是(100.00±2.68)%,(57.37±4.81)%,(62.70±2.21)%,(70.97±1.40)%和(85.30±3.96)%;这5组的凋亡率分别是(3.82±0.39)%,(28.25±2.56)%,(15.37±1.96)%,(12.49±3.21)%和(8.53±0.63)%;这5组的Bax蛋白表达水平分别是0.63±0.12,1.42±0.05,1.18±0.15,0.95±0.10和0.82±0.07;这5组的Caspase-3蛋白表达水平分别是0.55±0.05,1.54±0.13,1.24±0.10,0.99±0.10和0.70±0.09;这5组的Bcl-2蛋白表达水平分别是1.33±0.08,0.60±0.11,0.83±0.05,1.02±0.08和1.20±0.09;这5组的p-JNK蛋白相对表达量分别是0.62±0.08,1.34±0.09,1.22±0.07,1.00±0.05和0.80±0.08;这5组的p-c-jun蛋白相对表达量分别是0.45±0.12,1.48±0.23,1.17±0.55,1.07±0.26和0.85±0.11。基因结果的趋势与蛋白一致。对照组和低、中、高3个剂量实验组与模型组比较,以上指标差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论三七总皂苷可以通过抑制JNK信号通路对缺氧状态下视网膜神经节细胞有保护作用。