姜黄素调节NMDAR/Ca^(2+)/CaMKⅡ信号通路对异氟醚诱导的幼龄小鼠术后认知功能障碍的影响

目的探讨姜黄素(Cur)调节N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)/钙离子(Ca^(2+))/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路对异氟醚(ISO)诱导的幼龄小鼠术后认知功能障碍(POCD)的影响。方法将72只C57BL/6J小鼠分为对照组、ISO组、低剂量Cur组(Cur-L组,50 mg/kg)、中剂量Cur组(Cur-M组,100 mg/kg)、高剂量Cur组(Cur-H组,200 mg/kg)、Cur-H+NMDA(NMDAR激活剂)组(200 mg/kg+8 mg/kg),每组12只。经对应给药处理30 min后,对照组小鼠吸入含30%氧气和空气的混合气体2 h,其余各组小鼠吸入2%ISO 2 h,每天1次,持续14 d。末次给药24 h后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习与空间记忆能力;HE染色检测海马CA1区病理学变化;免疫荧光染色检测小鼠海马CA1区神经元特异核蛋白(NeuN)阳性表达;TUNEL染色检测神经细胞凋亡;酶联免疫吸附试验检测海马CA1区组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白印迹法检测海马CA1区组织中NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表达;荧光探针检测海马CA1区Ca^(2+)浓度。结果与对照组比较,ISO组小鼠海马CA1区病理损伤严重,逃避潜伏期延长,神经细胞凋亡率升高,海马CA1区组织中IL-1β和TNF-α水平升高,NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表达及Ca^(2+)浓度升高(P<0.05),穿越平台次数和NeuN阳性细胞数减少(P<0.05);与ISO组比较,Cur-L组、Cur-M组、Cur-H组小鼠海马CA1区病理损伤减轻,逃避潜伏期缩短,神经细胞凋亡率降低,海马CA1区组织中IL-1β和TNF-α水平降低,NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表达及Ca^(2+)浓度降低(P<0.05),穿越平台次数和NeuN阳性细胞数增加(P<0.05),且呈剂量依赖性;NMDA减弱了高剂量Cur对ISO诱导的小鼠POCD的改善作用(P<0.05)。结论Cur可能通过抑制NMDAR/Ca^(2+)/CaMKⅡ信号通路改善ISO诱导的小鼠POCD。

鞘内注射ω-芋螺毒素SO_3对神经痛大鼠脊髓Fos及Jun蛋白表达的影响

目的ω-芋螺毒素SO3是从海洋生物线纹芋螺中提取的一种多肽,为新型、特异性N型电压敏感性钙离子通道阻滞剂。通过研究鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对坐骨神经慢性挤压伤(CCI模型)大鼠脊髓Fos、Jun蛋白表达的影响,探讨N型钙通道在伤害性信息传递中的作用。方法雄性SD大鼠72只,随机均分为9组,其中3组为假手术或单纯制作CCI模型后3、14d;3组为单次鞘内注射生理盐水或不同剂量SO3;另3组为持续鞘内注射生理盐水或不同剂量SO3共7d。在预定时间点,经左心室灌注4%多聚甲醛,取L4-L6段脊髓制备石蜡切片。用相应抗体行免疫组织化学染色,检测各组动物脊髓标本中Fos样或Jun样免疫反应阳性细胞的数量。结果大鼠CCI后脊髓背角Fos样或Jun样免疫反应阳性细胞数量显著升高;单次或持续鞘内注射生理盐水对其无明显影响;单次或持续鞘内注射SO3均可剂量依赖性抑制其上升。结论神经损伤后脊髓Fos、Jun蛋白表达增加,鞘内注射SO3可以减轻此种反应,提示N型钙通道阻滞剂在脊髓水平可以部分阻断伤害性信息传递。

一种新型N-型电压敏感性钙通道拮抗剂虎纹蜘蛛毒素-I对大鼠内脏痛模型镇痛作用的研究

目的研究一种新型N-型电压敏感性钙通道拮抗剂虎纹蜘蛛毒素-Ⅰ(HWAP-I)经蛛网膜下腔用药对福尔马林诱导的大鼠急性炎性内脏疼痛的抑制作用.方法福尔马林快速注入SD大鼠乙状结肠壁粘膜下层作为疼痛模型,以数种可评估的反映内脏疼痛的固定性行为作为疼痛评分指标(疼痛分数).此前30 min经留置的导管注射各待测试剂于蛛网膜下腔内,以观察其对该模型疼痛行为的作用.结果以生理盐水阴性对照组和美国同类镇痛新药SNX-111(0.2,0.5和0.75μg/kg·b.w.)和盐酸吗啡(0.05,0.1和0.2μg/kg·b.w.)两个阳性对照组比较,HWAP-I(0.1～1.0μg/kg·b.w.)均能以剂量依赖方式明显抑制福尔马林结肠壁粘膜下注射所诱导的大鼠急性伤害性行为反应.HWAP-I和SNX-111在0.2μg/kg·b.w.时即有稳定和明显的疼痛抑制作用.虽然在同等剂量时SNX-111镇痛效果略大于HWAP-I,但在≥0.5μg/kg·b.w.的较高剂量时SNX-111会引起大鼠产生明显的运动能力障碍,而HWAP-I在此剂量范围内则未见明显的这类毒副作用.盐酸吗啡镇痛作用起效快于HWAP-I和SNX-111,但维持时间较后二者短.结论作为一种新型的多肽类N-型电压敏感性钙通道拮抗剂,HWAP-I和其类似物SNX-111经蛛网膜下腔用药后,对结肠壁粘膜下注射福尔马林引起的大鼠急性炎性内脏疼痛具有和盐酸吗啡类似的、剂量依赖性抑制作用,且维持时间更长.

梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞内Ca^(2+)及N型Ca^(2+)通道的变化及意义

目的对Ca2+和N型Ca2+通道在兔不全梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞中的变化进行研究。方法成年同龄雄性新西兰白兔30只,随机分两组,15只中膀胱出口不全梗阻8w尿流动力学证实为不稳定膀胱者为实验组,15只为对照组(成年雄性新西兰白兔仅仅手术游离兔膀胱颈而不做结扎梗阻为对照组)。采用急性酶法分离及传代培养的方法获得单个膀胱逼尿肌细胞,采用激光共聚焦显微镜观察模型膀胱逼尿肌细胞静态Ca2+浓度;运用共聚焦显微镜及免疫组织化学方法观察N型Ca2+通道在梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞中的变化。结果静息状态下不全梗阻性不稳定膀胱组逼尿肌细胞内游离钙离子浓度明显增高(Ca2+超负荷);共聚焦显微镜及免疫组化均证实不稳定膀胱逼尿肌细胞膜之N钙离子通道数量明显增多。结论膀胱逼尿肌细胞Ca2+及其N型Ca2+通道病理性改变是出现不稳定膀胱的重要因素。

含氨基酸小分子N型钙通道阻滞剂的合成及其镇痛活性

目的获得具有镇痛活性的小分子化合物。方法用简便的方法,设计合成了8个含氨基酸的小分子化合物,并用小鼠热板法测定其镇痛活性。结果药理实验表明,部分化合物具有镇痛活性。结论化合物4 c的镇痛效果最好,可作为先导化合物进行研究。

带N型管箱换热器中筒体厚度对管板设计厚度的影响

对于带N型管箱的固定管板换热器,管板与两侧筒体直接焊接;文章从基本原理入手,考察管板周边区域的受力情况,分析了筒体厚度对旋转刚度参数Kf及管板边缘支撑条件的作用;区分壳程带与不带膨胀节两种情况并结合换热管加强系数K的调整,文章通过八个算例来分析圆筒厚度变化对管板内径向应力分布以及极值的影响。由于壳程筒体的轴向刚度与其自身厚度有关并会直接影响到管板的设计厚度,文章分析了这一影响规律并提出了壳程筒体由不同厚度段组成时的轴向刚度计算。

N-型钙通道及其阻断剂研究进展

N-型电压依赖性钙通道主要分布于疼痛传递与调控通路的神经元突触末梢,参与疼痛介质(如谷氨酸和P物质)的释放和调节,在疼痛传递和调控过程中具有重要作用。因此,阻断N-型钙通道可以产生镇痛作用,特别是慢性疼痛和神经病理性疼痛。FDA已批准肽类阻断剂齐考诺肽鞘内给药,治疗全身性疼痛以及吗啡耐受或无效患者的严重慢性疼痛,证实N型钙通道是一个非常有意义的镇痛药物研究新靶标。近年来,口服有活性的小分子化合物研究越来越受到人们的重视,各种文献和专利报道的新结构类型层出不穷。本文就相关研究进行了综述。

疼痛相关融合基因的构建及siRNA对其抑制作用的研究

目的:通过构建用于RNAi筛选的模拟靶基因,筛选出起作用的siRNA,为进一步研究以Cav2.2e[37a]为靶标的基因治疗提供依据。方法:构建了EGFP-e37a/e37b融合基因,将其放入载体质粒中进行表达。按照siRNA的设计原则设计了四对siRNA(编码为I号、Ⅱ号、Ⅲ号、IV号),并将其放入质粒表达载体中,用siRNA表达载体与融合基因表达载体共转染BHK细胞进行了RNAi试验。用荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测RNAi效果。结果:EGFP-e37a/e37b融合基因通过PCR、测序等方法鉴定为正确;在荧光显微镜下可见siRNAⅡ使细胞的荧光效率明显受到抑制,流式细胞术可见siRNAⅡ的RNAi效率在24h达到了90%左右,其余3条siRNA抑制作用不明显。结论:本研究将目的基因e37a与EGFP基因进行了融合构建,通过EGFP的绿色荧光效应显示目的靶基因在细胞内的表达,并观察到RNAi抑制效果,筛选出了有功能的siRNA。

N型钙通道在大鼠福尔马林内脏炎症痛中的作用研究

目的：观察N型钙通道在福尔马林诱导的内脏炎症痛中的作用。方法：选用成年健康Wistar大鼠，随机分5组：正常对照组（N）；单纯福尔马林直肠致炎组（F）；脊髓蛛网膜下腔插管组（IT），插管内注射生理盐水组（NaCl）；插管内注射SNX-111组（SNX-111）。记录实验组大鼠的疼痛行为反应，致痛后以15min为一个时间段，共记录8个时间段，计2h，分别计算疼痛分数；福尔马林致痛后30min用原子吸收光谱分析和La^3＋阻断技术测定L6—S1-2阶段脊髓细胞内Ca^2＋含量。结果：F、IT组与NaCl组8个时间段内疼痛分数无显著性差异（P〉0．05）；IT组与F组相比也无明显差异（P〉0．05）；SNX-111组与NaCl组在致痛后75min内疼痛分数明显减少（P〈0．01或P〈0．05）。F、IT组与NaCl组在福尔马林致痛后30min脊髓细胞内Ca^2＋含量无明显变化（P〉0．05）；IT组与F组相比也无明显差异（P〉0．05）；SNX-111组与NaCl组相比Ca^2＋含量明显减少（P〈0．01）。结论：SNX-111能明显减轻福尔马林内脏炎症痛行为反应，降低脊髓内Ca^2＋含量，提示N型钙通道可能在福尔马林致内脏炎症痛感受中起重要作用。

Q及N型Ca^(2+)通道在兔不全梗阻性不稳定膀胱中功能的初探

目的:对Q及N型Ca2+通道在兔不全梗阻性不稳定膀胱中的功能进行研究。方法:成年同龄雄性新西兰白兔30只,其中15只为对照组(仅仅手术游离兔膀胱颈而不做结扎梗阻为对照组),15只为膀胱出口不全梗阻8周尿流动力学证实为不稳定膀胱者为实验组。模型成熟后,采用急性酶法分离及传代培养的方法获得单个膀胱平滑肌细胞。运用膀胱平滑肌M受体激动剂和Q及N型Ca2+通道阻滞剂,进行共聚焦显微镜检测其Ca2+浓度变化;了解膀胱平滑肌细胞是否存在Q及N型Ca2+通道;运用免疫组织化学方法进一步证实膀胱平滑肌细胞上是否存在Q及N型Ca2+通道及其变化。结果:共聚焦显微镜及免疫组化均证实膀胱平滑肌细胞膜存在Q及N型Ca2+通道,且不稳定膀胱平滑肌细胞膜之Q及N型Ca2+通道数量明显增多。结论:膀胱平滑肌细胞Ca2+及其通道病理性改变是出现不稳定膀胱的重要因素之一。

含氨基酸小分子N型钙通道阻滞剂的合成及其镇痛活性

目的获得具有镇痛活性的小分子化合物。方法设计合成了8个含氨基酸的小分子化合物,并用小鼠热板法进行镇痛活性的测定。结果用简便的方法合成了8个目标化合物,药理结果表明,部分化合物具有一定的生物活性。结论化合物5d、5f效果较好,可以作为先导化合物进行研究。

一类新型N型钙通道阻滞剂的比较定量构效关系研究

使用结构和量子化学参数对一系列N取代N-甲基二肽衍生物的N型钙通道阻滞活性进行了定量构效关系研究,并使用SOMFA方法建立了三维定量构效关系模型.结果表明分子的范德华体积和最低未占据轨道能量是影响化合物生物活性的主要因素.N原子上取代基的溶剂可及面积也对化合物的钙通道阻滞活性有重要影响.三维定量构效关系模型进一步支持了以上结果.这些研究结果可为设计更高活性的N型钙通道阻滞剂提供有价值的参考信息.

中枢N-型钙离子通道对应激性高血压大鼠去甲肾上腺素释放的影响

目的：研究N-型电压门控性钙离子通道影响高血压大鼠的血压以及蓝斑投射到下丘脑去甲肾上腺素释放动力学的机制。方法：将24只雄性SD大鼠（180~200 g）随机分为对照组和模型组,模型组大鼠用噪声和足底电击刺激大鼠血压升高,在建立慢性应激性高血压大鼠模型的基础上,电刺激蓝斑核,运用碳纤维电极检测技术测定大鼠下丘脑内去甲肾上腺素（NE）的释放量,进一步观察给予电压门控性钙离子通道阻断剂对NE的刺激-分泌量和在体血压的影响。结果：与对照组相比,高血压模型组大鼠血压升高（P〈0.05）,电刺激蓝斑核,下丘脑检测到的去甲肾上腺素的释放信号幅度增大（P〈0.05）。侧脑室给予N-型钙离子通道阻断剂使模型组大鼠的血压下降（P〈0.05）,去甲肾上腺素的释放信号幅度减少（P〈0.05）。结论：中枢部位的电压门控N-型钙离子通道参与应激性高血压大鼠下丘脑去甲肾上腺素的释放和血压的调控。

N型钙通道与疼痛

N型电压依赖性钙通道 (VDCCs)在疼痛的传递与调控中具有重要作用。它们密集分布于脊髓背角伤害感受性神经元突触前末梢 ,参与主要疼痛介质如谷氨酸和P物质等释放的调节。通过阻断上述通道 ,选择性N型VDCCs阻断剂表现出强效镇痛作用 ,N型VDCCsCaV2 .2亚基基因敲除小鼠也表现为痛阈提高。N型VDCCs还分布于自主神经系统和中枢神经系统突触部位 ,现有的N型VDCCs阻断剂用于疼痛治疗时出现的各种副作用与这些部位的突触抑制有关。最近发现 ,背根节伤害感受性神经元上存在一种特异的N型VDCCs亚型 。

N型电压依赖性钙通道阻断剂镇痛作用研究进展

N型电压依赖性钙通道作为与疼痛密切相关的靶点,分布于伤害性信息传递的神经通路上,激活后通过引起钙离子内流而触发突触囊泡释放疼痛相关的神经递质,参与痛觉传导。阻断N型电压依赖性钙通道可以产生镇痛作用,特别是针对慢性疼痛。目前,针对该靶点的药物齐考诺肽已经上市,经鞘内给药用于治疗对吗啡镇痛耐受或无效患者的严重慢性疼痛,但其应用却受到给药途径及副作用的限制;因而具有口服镇痛活性的小分子N型电压依赖性钙通道阻断剂的研究越来越受到人们的重视。本文就相关研究进展进行综述。

固定管板换热器N型管箱应力评定方法

当固定管板换热器采用N型管箱结构时,采用SW6. 0中的JB 4732算法可以计算校核筒体或管箱端部的总应力,但有时会出现压力载荷单独作用下筒体或管箱端部的总应力校核不通过的情况,导致筒体或管箱端部厚度比按照GB/T 151设计的更厚。根据一次结构法原理分析表明JB 4732算法存在着保守性,为此介绍了一次结构法和ASME管板设计方法,发现ASME管板设计方法与一次结构法是一致的,由ASME管板设计方法可以得到3种管板一次结构,而JB 4732算法采用的只是第1种一次结构。将这3种管板一次结构用在某换热器的有限元分析设计中,得到了不同的评价结果,选择其中最经济的设计方案,避免了筒体或管箱端部保守的设计。可为换热器结构优化设计提供一定的参考。

大鼠N型钙通道ⅢP区原核表达、纯化及活性研究(英文)

高保真PCR克隆出编码大鼠海马组织N型钙通道α1B亚基ⅢP区的DNA序列,分别与表达载体pET28b和pGEX-4T-1连接,转化入能补充稀有密码子tRNAs的大肠杆菌Rosetta菌株中,通过优化表达条件,实现了高效诱导表达.再通过低温诱导,将包涵体用尿素溶解再稀释后透析法复性、酶切、亲和柱层析等方法得到较纯的可溶性目的蛋白HIS-Cav22P、GST-Cav22P和Cav22P,紫外吸收光谱检测实验证明了重组蛋白HIS-Cav22P能和钙离子可逆地结合.最后通过GST沉降实验证明了芋螺毒素SO3与Cav22P存在体外相互结合作用.上述结果为揭示芋螺毒素SO3特异性阻断大鼠海马组织N型钙流的分子机制提供了直接的依据,也为建立筛选新的非吗啡型天然镇痛药物的技术平台提供了基础.

U形管式换热器N型管箱结构应力评定方法

管壳程筒体与管板整体连接时,连接处是结构不连续的高应力区,当采用弹性应力分析设计方法时,此处的弯曲应力分类是个难点。介绍了一次结构法,ASMEⅧ-1 UHX篇方法以及当量平盖法,对一次结构法和ASME规范方法进行了比较,发现二者是一致的,并归结出3种一次结构。针对算例,采用当量平盖法和一次结构法进行分析,得到相应的应力评定结果,但结果存在差异,对其进行了分析,可为此类结构设计提供一定参考。

L/N型钙通道阻滞剂对于小鼠肾脏足细胞损伤的保护作用

目的探讨给予L/N型钙通道阻滞剂处理小鼠后,小鼠受损足细胞的损伤变化情况。方法采用随机数字表法将雄性野生型BALB/C小鼠60只分为空白对照组、阳性对照组、硝苯地平组、西尼地平组,每组各15只。空白对照组无特殊处理,阳性对照组、硝苯地平组、西尼地平组采用经眼周静脉丛注射阿霉素15 mg/kg引起小鼠足细胞损伤,硝苯地平组小鼠在足细胞损伤建模后给予L型钙通道阻滞剂(硝苯地平15 mg/kg,口服给药,每日1次)处理;西尼地平组小鼠在足细胞损伤模型建立后给予L/N型钙通道阻滞剂(西尼地平10 mg/kg,口服给药,每日1次)处理。药物处理小鼠4周后,比较4组小鼠收缩压、24 h蛋白尿、足细胞损伤标记podocin的mRNA相对表达量及肾脏组织的病理变化。结果与空白对照组[(121.87±3.80)mmHg]、阳性对照组[(123.07±3.67)mmHg]比较,硝苯地平组[(104.47±3.94)mmHg]与西尼地平组[(105.4±4.57)mmHg]小鼠的收缩压均有所降低,但硝苯地平组与西尼地平组小鼠的收缩压比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组[(17.88±0.69)mg/dL、(27.73±3.18)μg]比较,阳性对照组小鼠的血尿素氮[(73.36±2.17)mg/dL]、24 h蛋白尿含量[(626.73±31.50)μg]明显升高,肾脏的组织podocin的相对表达量(0.23±0.05)明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组比较,硝苯地平组小鼠的血尿素氮[(73.39±2.50)mg/dL]、24 h蛋白尿含量[(631.80±25.26)μg]、肾脏的组织中podocin的相对表达量(0.29±0.06)无显著改善,差异无统计学意义(P>0.05),而西尼地平组小鼠血尿素氮[(53.63±2.39)mg/dL]、24 h蛋白尿[(389.86±45.19)μg]含量明显降低,肾脏的组织中podocin的相对表达量(0.65±0.11)显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,阿霉素引起小鼠肾脏较为严重的肾小球硬化,硝苯地平组小鼠较阳性对照组肾脏的病理改变不明显,而西尼地平组小鼠的肾脏肾小球硬化明显缓解。免疫组化检测显示,与空白对照组比较,阿霉素引起肌间蛋白的表达量明显增加;硝苯地平组小鼠较阳性对照组肌间蛋白表达变化不显著,而西尼地平组小鼠肌间蛋白的表达明显降低。结论L/N型钙通道阻滞剂西尼地平能有效保护小鼠肾脏足细胞损伤,降低小鼠蛋白尿的产生,值得临床推广应用。

新型镇痛药ω-芋螺毒素的合成等效物ziconotide

ω-芋螺毒素的合成等效物Ziconotide作为一种新型非吗啡类镇痛剂,是首个应用于临床的具有神经元特异性的N-型电压敏感型性钙通道阻滞剂。大量临床前和临床资料证明,通过鞘内注射Ziconotide治疗严重慢性疼痛,可缓解其他治疗手段包括鞘内注射吗啡无效的疼痛;且长时间使用该药物不会产生耐受性和成瘾性。