精氨酸与N^G-硝基-精氨酸甲酯对大鼠正畸牙移动时诱导型一氧化氮合酶的影响

目的研究精氨酸(L-arg)与NG-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠牙周膜压力侧诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。方法将60只雄性S-D大鼠随机分为3组并建立正畸牙移动模型,分别于局部骨膜下注射精氨酸(L-arg组)、生理盐水(生理盐水组)和NG-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME组),每2d1次。定期处死动物,取材并制作组织切片,进行免疫组化染色和图像分析。结果各实验组iNOS的表达-时间曲线基本相似,均在加力后7d达到高峰,牙周膜压力侧iNOS的表达在同一时间点不同实验组之间比较差异无统计学意义。结论L-arg和L-NAME对大鼠正畸牙移动牙周膜内iNOS的表达并无影响,两者可能通过其他途径影响正畸牙牙周膜的改建和正畸牙的移动。

丁基苯酞对原代培养胎大鼠皮层神经细胞外液NO及胞浆内cGMP水平的影响

用分光光度法和放射免疫分析法分别检测ＮＯ及ｃＧＭＰ水平，同时观察ｌ丁基苯酞（ｌＮＢＰ）和ｄ丁基苯酞（ｄＮＢＰ）对原代培养的胎大鼠皮层神经细胞外液ＮＯ及胞浆内ｃＧＭＰ水平的影响。结果表明，ｄＮＢＰ（０１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１）对低糖低氧条件下或含Ｎ甲基Ｄ门冬氨酸（ＮＭＤＡ）或含ＫＣｌ的培养基中皮层神经细胞外液ＮＯ及细胞内ｃＧＭＰ水平明显升高，而ｌＮＢＰ（０１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１）则能明显降低ＮＯ和ｃＧＭＰ水平。提示：ｄＮＢＰ和ｌＮＢＰ对低糖低氧，ＮＭＤＡ或ＫＣｌ诱导的ＮＯ释放和ｃＧＭＰ生成有相反的作用。

L-Arg-NO通路对大鼠延髓腹面加压区心血管活动的影响及与L-Glu通路的关系

目的 研究一氧化氮 (NO)前体 L -精氨酸 (L - Arg)单侧微量注入大鼠延髓腹面加压区 (VSMp)对动脉血压 (AP)、心率 (HR)、肾灌流压 (PPk)的影响及与 L -谷氨酸 (L - Glu)升压作用的关系。 方法 采用延髓腹外侧部微量注射法 ,以整体灌流肾为模型观察与 NO有关药物对心血管活动的影响。 结果 (1) VSMp内微量注入L - Arg(4 0～ 10 0 nmol) ,AP和 HR呈剂量依赖性下降 ,与生理盐水注入后的变化相比较 ,差异均有显著性。如预先注入 NO合酶抑制剂 L -硝基 -精氨酸甲酯 (L - NAME)或鸟苷酸环化酶抑制剂甲基蓝 ,L - Arg的降压效应被衰减。(2 ) VSMp内微量注入 L - Arg(10 0 nmol) ,PPk与 AP同步下降 ,与基础值比较 ,差异有显著性。 (3) VSMp内微量注入 L - Glu(35 0 nm ol) ,AP上升。如预先注入 L - Arg(4 0～ 10 0 nmol)后 5 m in再注入 L - Glu,L - Glu的升压效应被衰减 ,衰减程度与 L - Arg呈剂量依赖性关系。 结论 VSMp内的 L - Arg- NO通路参与动脉血压的调控 ,其机制之一可能是通过抑制 VSMp内的谷氨酸能神经突触。

一氧化氮对缺氧豚鼠心肌细胞游离钙浓度的影响

目的 :探讨左旋精氨酸 (L - arginine,L - arg)及 NG-亚硝基 - L -精氨酸甲酯 (NG- nitric- L - arginine- methyl ester,L NAME)对缺氧豚鼠心肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)变化影响。 方法 :采用离体豚鼠心 L angendorff法灌注 ,胶原酶 I型分离细胞 ,再用荧光指示剂方法 (Fure- 2 / AM)标记心肌[Ca2 + ]i 变化。分为 3组 :对照组、L - arg组和 L - NAME组。观察缺氧后心肌 [Ca2 + ]i的变化。 结果 :1正常氧状态下 ,心肌 [Ca2 + ]i 均值为 12 0 .0± 14.3nmol/ L(n=10 )。2缺氧状态下心肌 [Ca2 + ]i 增加与缺氧时间 (程度 )成正相关 ,相关系数 r为 0 .99左右。 3一氧化氮 (NO)在缺氧条件下对心肌 [Ca2 + ]i 有影响。 结论 :在短期轻度缺氧条件下 ,NO不足使心肌 [Ca2 + ]i 增加 ,若能设法增加细胞内的 NO含量 ,可以提高心肌细胞的自我保护作用。在长时间重度缺氧条件下 。

NO与梗阻性黄疸时肾功能损害的关系

目的 探讨梗阻性黄疸时肾脏功能与血浆一氧化氮 (NO)水平及肾内诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)表达之间的关系。方法 用胆总管结扎法建立大鼠梗阻性黄疸模型 ,模型制备成功后 2周分别检测正常组 (N组 ,n =10 )、胆总管结扎组 (BDL组 ,n =2 0 )和NG 硝基L精氨酸甲酯组 (L NAME组 ,n =2 0 )大鼠血浆胆红素、尿素氮、肌酐和NO水平 ,免疫组织化学染色法观测肾内i NOS的表达。结果 BDL组大鼠血浆胆红素、尿素氮、肌酐、NO水平均明显增高 ( P<0 .0 1) ,肾内iNOS表达阳性 ;L NAME组大鼠血浆胆红素无明显变化 ,尿素氮、肌酐与NO水平均明显下降 ,与正常组水平相似 ,其间无明显差别 ,肾内iNOS表达亦不明显。结论梗阻性黄疸时肾功能明显受损 ,血浆NO水平增高 ,肾内iNOS表达增加 ,NO在肾功能损害的发生中起一定作用 ,一氧化氮合酶抑制剂对梗阻性黄疸肾功能损害具有保护作用。

L-硝基精氨酸甲酯对实验性葡萄膜炎的影响

目的 :观察一氧化氮 (NO)含量含量在葡萄膜炎房水及玻璃体中的变化及 L -硝基精氨酸甲酯 (NG- nitro- L - argininemethyl ester,L- NAME)的治疗效果。 方法 :采用兔眼玻璃体内注射内毒素脂多糖 (L PS)制备葡萄膜炎模型 ,以检测房水蛋白浓度、细胞数目和组织病理观察判定炎症程度 ,同时检测房水及玻璃体中 NO的变化 ,考察 L- NAME在不同时期使用的疗效。 结果 :葡萄膜炎房水及玻璃体中 NO含量显著增高 ;即刻使用 L- NAME,显著降低了 NO水平 ,同时其蛋白浓度、细胞数目及组织炎症程度明显降低 ;6 h使用 L - NAME,则 NO浓度下降不显著 ,蛋白浓度、细胞数目及组织炎症程度没有明显改善。结论 :NO参与了葡萄膜炎的病理过程 ,即刻使用 L - NAME可抑制实验性葡萄膜炎的发展。

Ν-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用

目的 :探讨一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂N 硝基 L 精氨酸甲酯 (L NAME)对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用。 方法 :用 2 2dSD雄性大鼠复制单侧隐睾模型。实验分假手术组、隐睾组、隐睾 +L NAME组 [术后腹腔注射L NAME ,10mg/(kg·d) ],每组大鼠各 10只。术后 7d ,用生物素 dUTP/酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡 ,用硝酸还原酶法测定睾丸组织中N0含量 ,用化学比色法测定睾丸组织中NOS活性。 结果 :术后第 7d ,与假手术组睾丸相比 ,隐睾组睾丸发生凋亡的生殖细胞数显著增加 ,隐睾 +L NAME组睾丸发生凋亡的生殖细胞数比隐睾组显著减少 (P <0 .0 1) ,隐睾 +L NAME组睾丸组织中NO含量及NOS活性与隐睾组相比显著降低 (P<0 .0 1)。 结论 :隐睾组织中NO和NOS升高是隐睾生殖细胞凋亡增加的病理机制之一 ,L NAME通过抑制NOS活性、减少NO的产生来降低睾丸组织生殖细胞的凋亡发挥其保护作用。

L-精氨酸对高糖引起内皮功能失调的保护作用

目的通过研究L-精氨酸和NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮和超氧阴离子的影响以探讨L-精氨酸对高糖引起内皮功能失调的保护作用。方法不同浓度L-精氨酸、NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯、葡萄糖和胰岛素加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,24 h后分别测定细胞培养液中一氧化氮合酶和超氧化物歧化酶活性及一氧化氮和超氧阴离子浓度。结果25 mmol/L葡萄糖使内皮细胞一氧化氮合酶活性增高,一氧化氮产生增加,超氧化物歧化酶活性下降,超氧阴离子产生增加;L-精氨酸对一氧化氮合酶、一氧化氮、超氧化物歧化酶的影响与对照组相比无显著性差异(P>0.05),但可以使超氧阴离子产生减少;25 mmol/L葡萄糖+L-精氨酸使内皮细胞一氧化氮合酶活性增强,一氧化氮产生增加,L-精氨酸可以改善高糖引起的超氧阴离子升高。不同浓度的胰岛素使内皮细胞一氧化氮合酶活性增高,一氧化氮产生增加,对超氧化物歧化酶活性和超氧阴离子产生无明显影响;不同浓度胰岛素+L-精氨酸使内皮细胞一氧化氮合酶活性增强,一氧化氮产生增加,对超氧化物歧化酶活性无明显影响,但可以使超氧阴离子水平降低。100μmol/L NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降,一氧化氮产生减少,对超氧化物歧化酶活性无明显影响,但使超氧阴离子产生增加;25 mmol/L葡萄糖+NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降,一氧化氮产生减少,但对高糖引起的超氧化物歧化酶活性下降和超氧阴离子升高无明显影响。10 mu胰岛素+10μmol/L NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯和100 mu胰岛素+100μmol/L NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降,一氧化氮产生减少,对超氧化物歧化酶活性无明显影响,但使超氧阴离子升高。结论L-精氨酸对一氧化氮合酶、一氧化氮、超氧化物歧化酶无明显影响,但可以使超氧阴离子产生减少;NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降,一氧化氮产生减少,对超氧化物歧化酶活性无明显影响,但使超氧阴离子产生增加。

硝基左旋精氨酸甲脂对碱烧伤后角膜新生血管作用的实验研究

目的:探讨碱烧伤后角膜新生血管形成过程中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达及作用;观察局部应用硝基左旋精氨酸甲脂(LNAME)对角膜新生血管形成的影响。方法:采用碱烧伤诱导角膜新生血管模型,将50只SD大鼠随机分成5组:A组为治疗I组,B组为治疗Ⅱ组,C组为治疗Ⅲ组,D组为对照组和E组为正常组。治疗组(A、B、C组)碱烧伤后分别滴用0.3%,1%,3%的硝基左旋精氨酸甲脂滴眼液,对照组(D组)滴赋形剂,E组滴用30g·L-1的硝基左旋精氨酸甲脂滴眼液。采用裂隙灯照相,免疫组化染色,多媒体彩色图像病理分析系统分别计算8h、1,4,7,14,28d共6个不同时间点的角膜新生血管面积和诱导型一氧化氮合成酶免组染色的平均光密度值。并观察局部用药的毒副反应。结果:碱烧伤后大鼠角膜上诱导型一氧化氮合成酶主要表达于基质层中浸润的炎性细胞和新生血管内皮细胞。iNOS的表达与角膜新生血管面积在治疗组B、C组与治疗组A和对照组之间在统计学上的差异有显著意义(P<0.05)。重复局部给药良好耐受。结论:局部应用LNAME对炎性角膜新生血管有一定的治疗作用;iNOS表达水平与炎性角膜新生血管明显相关;局部应用LNAME无明显毒副作用,是安全有效的给药方式。

肾性高血压大鼠延髓尾端神经元型一氧化氮合酶表达的改变

实验采用免疫组织化学方法观察两肾一夹肾性高血压大鼠延髓尾端两个区域 (延髓腹面降压区和尾端加压区 )内神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)表达的变化。肾性高血压大鼠延髓尾端这两个区域的nNOS的表达均增加 ,说明高血压时L Arg NO通路活性增强。NO的前体L Arg能增强nNOS的表达 ,nNOS抑制剂L NAME则降低nNOS的表达。以上两个区域nNOS表达变化的特点在肾性高血压 4周和 7周的动物相同 ,肾性高血压 7周的nNOS表达和 4周比较 。

一氧化氮合酶抑制剂在噪声性听力损伤中的保护作用

目的本实验探讨一氧化氮合酶抑制剂 N-硝基左旋精氨酸甲酯(N^G-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)在噪声损伤中的作用。方法将豚鼠(体重350～400 g)随机分为无噪声对照组(n=20)、噪声+生理盐水组(n=20)、噪声+L-NAME 组(n=20)。噪声刺激(4 kHz 倍频程,115 dB SPL 5 h)结束72 h 后,测试脑干诱发电位(auditory brainstem responses,ABRs),制备耳蜗组织匀浆测 NO 的水平,用免疫组化观察诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iNOS)在耳蜗的活性。结果无噪声组动物听阈无明显变化;噪声刺激后生理盐水组听阈上升的幅度明显高于 L-NAME 组(P<0.05);噪声+生理盐水组耳蜗 NO 含量明显高于对照组(P<0.05)与噪声+生理盐水组相比,噪声+L-NAME 组耳蜗 NO 含量明显减少(P<0.05)。噪声刺激后,噪声+L-NAME 组iNOS 活性强度弱于生理盐水组。结论 iNOS 催化合成的 NO 参与噪声对耳蜗组织的损伤;L-NAME 可通过抑制 iNOS 活性对噪声性听力损伤(noise induced hearing loss,NIHL)发挥保护作用。

大鼠脑内一氧化氮痛觉调制机制的实验观察

目的 探讨脑内一氧化氮在大鼠痛觉调制中的作用。方法 以钾离子透入引起大鼠甩尾反应的电流强度作为痛反应指标 ,观察侧脑室注射NG-硝基 -L -精氨酸甲酯、NG 硝基 D 精氨酸甲酯、硝普钠和血红蛋白等 ,对大鼠痛阈的影响。结果 侧脑室注射一氧化氮合酶抑制剂NG-硝基 -L -精氨酸甲酯后 ,大鼠痛阈明显增加 ;而注射NG-硝基 -D -精氨酸甲酯则对痛阈无明显影响。侧脑室注射一氧化氮供体物质硝普钠后 ,痛阈明显降低 ;而注射硝普钠与血红蛋白的混合液和Hb则对痛阈无显著影响。结论 大鼠脑内NO水平降低有镇痛作用 ,而NO水平的升高则有痛敏作用。提示 ,大鼠脑内NO在痛觉调制的复杂过程中 ,发挥着重要作用。

Nitric oxide and soman poisoning

目的：探查索曼中毒机制是否有ＮＯ参与．方法：预先侧脑室注射Ａｒｇ、ＮＡＭＥ，观察索曼中毒小鼠惊厥潜伏期、死亡率及脑中ＮＯＳ活性变化．结果：Ａｒｇ预处理时，潜伏期从５２ｍｉｎ（对照组）缩短到４３ｍｉｎ（Ａｒｇ１６０ｎｍｏｌ），死亡率由５０％（对照组）增加至８１％（Ａｒｇ１６０ｎｍｏｌ）．ＮＡＭＥ预处理时，潜伏期从４０ｍｉｎ延长到１４５ｍｉｎ（ＮＡＭＥ２２０μｍｏｌ），死亡率由８７％（对照组）减少至５０％（ＮＡＭＥ２２０μｍｏｌ）．索曼的小鼠毒性被Ａｒｇ增强、被ＮＡＭＥ减弱，均有剂量依赖性．索曼中毒可使小鼠大脑、小脑及海马的ＮＯＳ活性分别增加４％，１５％及１１％．