重铬酸钾致N-ras基因DNA损伤作用研究

目的 研究重铬酸钾对N -ras基因的DNA损伤作用,探讨其致癌作用分子机制。方法 制备N -ras基因外显子1单链探针;重铬酸钾染毒细胞提取基因组DNA ,再经RDPCR扩增后与探针杂交显色。结果 重铬酸钾染毒剂量10 0 μmol L可检测到DNA损伤片段杂交条带,其损伤片段长于完整的N ras基因外显子1;更高剂量(10 0 0 μmol L)未能检测出DNA损伤作用。结论 重铬酸钾可能造成N- ras基因外显子1上游序列DNA损伤,且该损伤作用可能正是其致癌作用分子机制的关键所在。

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras基因表达的影响

目的探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras基因表达的影响。方法运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细包中N-rasmRNA量及N-Ras蛋白的表达量。结果树舌多糖组、猪苓多糖组中N-rasmRNA量及Ras蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论初步认为树舌多糖GF可通过降低N-rasmRNA量及Ras蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖。

N-ras基因DNA损伤检测方法的建立

目的建立应用依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)技术检测N-ras基因DNA损伤的试验方法。方法采用单引物PCR技术制备N-ras基因外显子1单链探针,酶切构建DNA损伤模型,再经RDPCR扩增后与探针杂交显色。结果单引物PCR技术制备单链探针获得成功,目的基因在相应位置出现了清晰的杂交条带。结论RDPCR技术可定位检测到该酶切DNA损伤位点,表明该方法已成功建立,将有利于其在化学致癌作用机制研究及肿瘤预防领域的应用。

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc蛋白表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras、c-myc蛋白表达的影响。方法:运用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中N-ras、C-myc蛋白的表达量。结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras、C-myc蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论:树舌多糖GF可通过降低N-ras、C-myc蛋白的表达,抑制He-pA瘤细胞的增殖。

RNA干扰肝癌MHCC97-H细胞N-Ras基因对放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）N—Ras基因增强人肝癌MHCC-97细胞的放射敏感性。方法通过构建干扰N-Ras基因siRNA，采用免疫组织化学法、实时荧光定量RT—PCR、Westernblot、MTT法观察RNAi前后肝癌MHCC97-H细胞RNA水平、蛋白水平、生长情况等变化，照射后用细胞克隆计数实验检测放射敏感性变化。结果MHCC97-H细胞株RNAi后mRNA表达抑制率为96．9％±0．159％，RNAi前后差异有统计学意义（t=40．377，P〈0．05），蛋白表达抑制率为89．8％±0．012％，RNAi前后差异有统计学意义（t=31．595，P〈0．05），免疫组织化学显示90％表达被抑制，细胞生长抑制率为21．9％，RNAi前后差异均有统计学意义（F=4．63，P〈0．05）。MHCC97-H细胞RNAi后增敏比（SER）=1．15。结论RNAi肝癌MHCC97一H细胞N—Ras基因可以达到放射增敏的目的。