N-myc下游调节基因-2在大鼠肠缺血再灌注肺损伤中的表达及其与NF-κBp65的相关研究

目的通过建立大鼠肠缺血再灌注肺损伤(IIRI)模型,观察大鼠肠缺血再灌注肺损伤,肺组织中N-myc下游调节基因-2(NDRG2)表达水平的变化。方法 50只健康成年雄性SD大鼠随机分成对照组(control)、缺血再灌注组(I/R)(其中根据缺血再灌注时间又分4个亚组),每组10只。缺血再灌注4个亚组选择缺血60min后分别再灌注30、60、120和180min,获取样本肺组织。术后样本行病理(HE)、湿干重比例(W/D)检测,免疫组化、Western-blot对NDRG2、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)检测,RT-PCR方法对NDRG2在mRNA水平含量进行检测,TUNEL法对凋亡细胞进行检测。结果缺血再灌注组与对照组比较,缺血再灌注组肺泡壁增宽,肺泡腔内可见出血等炎症表现,W/D比值显著性升高(P<0.05),免疫组化显示NF-κBp65发生核转位现象,NF-κBp65蛋白水平表达明显升高(P<0.05),肺组织NDRG2在mRNA水平和蛋白水平的表达明显降低(P<0.05)。结论缺血再灌注损伤可下调肺组织中NDRG2的表达,NDRG2可能通过对NF-κB通路进行调控,是导致缺血再灌注后肺损伤的靶向调控位点,对肠缺血再灌注肺损伤的大鼠起保护作用。

增殖细胞核抗原、人类N-myc下游调节基因1在肝细胞性肝癌中的表达及临床意义

目的：研究增殖细胞核抗原（PCNA）及人类N-myc下游调节基因1（NDRG1）在人肝细胞性肝癌中的表达情况,探讨其与肝癌生物学行为的关系及临床意义。方法：选择有存档的原发性肝癌标本58例,肝硬化34例,正常肝组织标本15例,用H-E染色观察组织形态,用免疫组织化学SABC检测PCNA和NDRG1的表达。结果：肝癌组织中PCNA表达明显高于肝硬化组织和正常组织;在肝硬化组织和正常肝组织中,PCNA的表达没有差异;肝癌中PCNA的表达与患者的性别、年龄、HbsAg阳性、AFP水平、部位和肿瘤的直径无关。NDRG1在正常肝组织、肝硬化组织、肝癌组织中表达逐渐减弱;肝硬化组与正常肝组织组相比,差异无统计学意义,在肝癌组织中NDRG1与患者的性别、年龄、HbsAg阳性、AFP水平、部位和肿瘤的直径无关。PCNA及NDRG1在肝癌组织中的表达呈负相关。结论：PCNA、 NDRG1在肝癌发生、发展过程中起着重要的作用,联合检测可以为肿瘤的早发现、早诊断、早治疗提供判断依据。

转染NDRG1基因对宫颈癌细胞COX-2、VEGF表达及增殖的影响

目的:通过研究人类N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)对人宫颈癌SiHa细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及细胞增殖的影响,深入探讨NDRG1抑制宫颈癌侵袭转移的作用机制。方法:经脂质体介导将含有NDRG1真核表达质粒转染人宫颈癌SiHa细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及RT-PCR、蛋白质印迹鉴定;蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞COX-2及VEGF表达的改变;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果:成功建立高表达NDRG1的阳性SiHa细胞克隆(N-12),并证实其COX-2和VEGF蛋白表达及细胞增殖活性均显著降低。结论:NDRG1可能通过下调宫颈癌细胞COX-2、VEGF的表达及抑制细胞增殖而起到抑制宫颈癌进展的作用。

慢病毒介导NDRG2基因过表达抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭和迁移

目的:观察N-Myc下游调节基因-2(N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2)过表达对人膀胱癌T24细胞体外侵袭和迁移的影响。方法:采用携带NDRG2基因的慢病毒Lenti-NDRG2感染T24细胞,构建稳定过表达NDRG2的细胞株。Western blotting检测T24细胞中NDRG2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的表达,Transwell体外迁移和侵袭实验观察过表达NDRG2对T24细胞体外迁移和侵袭的影响。结果:建立了稳定过表达NDRG2的T24细胞株。与Lenti-Lacz组和空白对照组相比,Lenti-NDRG2组NDRG2蛋白的表达[(30.1±1.27)vs(9.9±1.24)、(8.2±1.28),P<0.01]明显提高;Lenti-NDRG2组MMP-2[(13.5±1.32)vs(30.7±1.29)、(28.8±1.30),均P<0.01]和MMP-9[(11.7±1.27)vs(25.2±1.28)、(26.4±1.31),均P<0.01]的表达明显降低;Lenti-NDRG2组T24细胞的侵袭细胞数[(18.1±3.4)vs(88.5±4.2)、(90.2±4.1)个,均P<0.01]和迁移细胞数[(20.1±3.5)vs(109.4±5.6)、(113.0±4.9)个,均P<0.01]明显减少。结论:慢病毒介导的NDRG2基因过表达可能通过降低MMP-2和MMP-9的表达而抑制人膀胱癌T24细胞的转移与侵袭。

NDRG2通过抑制β-catenin表达和入核调控乳腺癌细胞增殖

背景与目的:乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一,肿瘤细胞的恶性增殖是造成患者死亡的重要原因。本研究利用具有相同遗传背景但不同增殖能力的乳腺癌细胞模型,研究N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)调控乳腺癌细胞增殖的作用及分子机制。方法:通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测MCF-7/LM-MCF-7细胞中NDRG2蛋白表达水平;构建NDRG2真核表达载体及si RNA干扰片段,通过转染上调或沉默NDRG2表达,流式细胞实验检测细胞增殖能力,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)表达,免疫荧光染色检测β-catenin细胞定位;共转染MCF-7细胞NDRG2 si RNA和pCMV-Tcfδ,流式细胞实验检测细胞增殖能力。结果:NDRG2的蛋白表达水平同乳腺癌细胞增殖能力负相关;在增殖的LMMCF-7细胞中上调NDRG2表达,细胞增殖指数(proliferation index,PI)由47.18%下降至31.78%(P<0.001);在低增殖的MCF-7细胞中沉默NDRG2表达,PI由32.00%上升至52.59%(P<0.001);Western blot及免疫荧光结果显示,NDRG2可抑制β-catenin表达,并抑制其聚集入核;流式细胞检测结果显示,共转染si RNA和pCMV-Tcfδ的MCF-7细胞增殖能力未增强,进一步说明NDRG2是通过抑制β-catenin的转录调节作用抑制肿瘤细胞增殖。结论:在乳腺癌细胞中,NDRG2的表达水平下调,导致β-catenin聚集入核,并激活下游靶基因,促进乳腺癌细胞增殖。此分子机制对阐明乳腺癌细胞增殖调控机制具有重要意义。

宫颈鳞状细胞癌组织中NDRG-1、COX-2、VEGF的表达及其临床意义

目的:观察N-myc下游调节基因-1(N-myc downstream regulated gene-1,NDRG-1)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达,分析其在宫颈鳞状细胞癌发生发展中的作用及意义。方法:采用免疫组织化学法检测80例宫颈鳞状细胞癌患者癌组织和15例正常宫颈组织中NDRG-1、COX-2及VEGF蛋白表达情况;分析宫颈鳞状细胞癌组织中3种蛋白表达的相关性,并分析其表达与临床病理因素及患者预后的关系。结果:与正常宫颈组织比较,宫颈鳞状细胞癌组织中NDRG-1阳性表达率明显降低(P<0.01);COX-2与VEGF阳性表达率明显升高(P<0.01)。NDRG-1、COX-2及VEGF蛋白的阳性表达与宫颈鳞状细胞癌患者的年龄及肿瘤大小无关(P>0.05),而与肿瘤组织病理学分级、FIGO分期及淋巴结转移密切相关(P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析显示,宫颈鳞状细胞癌组织中NDRG-1表达阳性者生存期较长,COX-2及VEGF表达阳性者生存期较短。结论:宫颈鳞状细胞癌组织中NDRG-1表达降低,而COX-2及VEGF表达增加,三者表达的联合检测可能对判断宫颈鳞状细胞癌的预后具有重要价值。

慢病毒介导的N-myc下游调节基因-2对肾癌细胞株786-0增殖及细胞周期素D1、p21表达的影响

目的观察N—myc下游调节基因-2（NDRG2）对肾癌细胞株786—0增殖及细胞周期素（Cyclin）D1、p21表达的影响。方法以携带人NDRG2基因的慢病毒载体感染体外培养的肾癌细胞株786-O。采用间接免疫荧光实验检测慢病毒感染后细胞中NDRG2的过表达。Westernblot检测CyclinD1、p21的表达变化，通过细胞生长实验、平板克隆实验检测NDRG2对786一O细胞增殖能力的影响。流式细胞仪检测感染前后细胞的凋亡。结果786一O细胞经慢病毒感染后NDRG2蛋白表达水平明显增加。Westernblot实验显示慢病毒感染后细胞中CyclinD1表达明显降低；而p21表达明显增加。噻唑蓝（MTT）比色（抑制率12h为3．96％，24h为4．78％，36h为9．32％，48h为20．27％，60h为22．85％，72h为30．86％）显示NDRG2对786—0细胞的生长有明显抑制作用。平板克隆实验（3组分别为67．1％、65．5％和41．7％）显示lenti—NDRG2组786—0细胞的克隆形成能力明显降低。流式细胞术显示lenti-NDRG2组细胞凋亡率为（17．20±1．44）％，明显高于对照组[（6．30±0．46）％，t=12．49，P〈0．01]和lenti—mCherry组[（6．00±0．31）％，t=13．17，P〈0．01]。结论通过慢病毒载体使786-O细胞表达NDRG2基因，可以明显抑制细胞的增殖，并可降低CyelinD1表达，同时增加p2l的表达。

胃癌组织中HIF-1α、NDRG2表达与EMT的相关性

目的观察正常胃组织、胃癌组织和淋巴结转移癌组织中的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、N-myc下游调节基因2(NDRG2)和上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达差异。方法采用免疫组化法检测正常胃组织、胃癌组织和淋巴结转移癌组织中的HIF-1α、NDRG2、E-Cadherin、Snail和Twist的表达。结果正常胃组织内HIF-1α无表达,而NDRG2高表达,NDRG2与E-Cadherin表达无差异,而与Snail和Twist的表达有显著差异。胃癌组织中HIF-1α与NDRG2表达无显著差异,HIF-1α和NDRG2表达均与E-Cadherin表达无显著差异,但均与Snail和Twist表达有显著差异。淋巴结转移癌组织中HIF-1α高表达,而NDRG2无表达,HIF-1α表达与E-Cadherin、Snail和Twist的表达均无显著差异。NDRG2与E-Cadherin、Snail和Twist的表达密切相关,而HIF-1α与E-Cadherin、Snail和Twist的表达无关。结论在胃癌淋巴结转移组织中HIF-1α高表达,而NDRG2无表达。NDRG2与E-Cadherin、Snail和Twist的关系最密切,而HIF-1α与E-Cadherin、Snail和Twist的表达无关,故HIF-1α影响EMT可能是通过抑制NDRG2表达而实现的。

N-myc下游调节基因-2过表达对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响

目的:研究N-myc下游调节基因-2(NDRG2)过表达对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法:以肺缺血再灌注损伤为模型,将已转染的过表达NDRG2重组腺病毒经气管滴注的方法使大鼠肺泡上皮细胞NDRG2过表达。用Western-blot法检测大鼠肺组织内目的蛋白过表达情况。用ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的水平,肺组织湿干重比值(W/D)检测肺组织的水肿,双荧光素酶报告系统检测核转录因子kappa B(NF-κB)的活性,HE染色检测肺组织病理变化。结果:在肺缺血再灌注损伤中,过表达NDRG2可抑制炎症因子l L-1β、TNF-α以及IL-6的表达,明显减轻肺水肿,抑制NF-κB的活性和病理组织的炎性改变。结论:NDRG2过表达可减轻缺血再灌注所致急性肺损伤,这可能与其抑制炎症反应有关。

转化生长因子-β1抑制人肾小管上皮细胞株HK-2中N-Myc下游调节基因2表达及意义

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对人肾小管上皮细胞株HK-2中N-myc下游调节基因2（NDRG2）表达的影响。方法按照是否孵育TGF-β1分别设置对照组和实验组，取两组细胞分别提取蛋白及RNA行Western blot及实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR），检验两组上皮细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）和Snail蛋白的表达差异。然后根据孵育TGF-β1的不同浓度梯度设置不同组别，分别取各组细胞提取蛋白及RNA行Western blot及RT-qPCR以检验NDRG2在TGF-β1作用后的人肾小管上皮细胞（HK-2）中的表达。结果结果表明对照组和实验组在蛋白水平相关表达量分别为E-cadherin（1.0±0.2比0.3±0.2）（t＝4.850, P＝0.008），α-SMA（1.0±0.1比2.6±0.4）（t＝6.721, P＝0.003），Vimentin（1.0±0.1比2.6±0.4）（t＝6.721, P＝0.003），Snail（1.0±0.1比2.5±0.2）（t＝11.620, P＝0.000），以上标志物两组之间差异均有统计学意义。对照组和实验组在mRNA水平相关表达量分别为E-cadherin（1.0±0.2比0.2±0.1）（t＝7.686, P＝0.002），α-SMA（1.0±0.3比2.4±0.3）（t＝5.715, P＝0.005），Vimentin（1.1±0.2比2.6±0.5）（t＝4.977, P＝0.008），Snail（0.9±0.2比1.9±0.2）（t＝6.124, P＝0.004），以上标志物两组之间差异均有统计学意义。同时在TGF-β1孵育后，HK-2细胞中NDRG2在蛋白和RNA水平都明显下调，各组在蛋白水平相关表达量分别为1.00±0.04比0.80±0.03比0.50±0.05比0.30±0.03比0.20±0.02（P＝0.019），在mRNA水平相关表达量分别为1.00±0.05比0.70±0.03比0.50±0.04比0.30±0.02比0.20±0.05（P＝0.021）。尤其当孵育TGF-β1浓度大于10 ng/ml时这种作用最为显著，各组表达水平之间差异有统计学意义。结论TGF-β1可以促进HK-2细胞中上皮-间充质转化（EMT）过程，同时TGF-β1可以下调HK-2细胞中NDRG2在蛋白和RNA水平的表达量。

肿瘤抑制基因N-myc下游调节基因2调节结肠癌细胞糖代谢

目的 观察肿瘤抑制因子N-myc下游调节基因2（NDRG2）于结肠癌细胞葡萄糖代谢调节作用.方法 稳定转染NDRG2于结肠癌细胞HCT116,乳酸检测试剂盒检测细胞（1×10^6个）乳酸代谢的水平;葡萄糖试剂盒检测通过细胞（1 ×10^6个）消耗培养基葡萄糖的水平;Western blot检测HCT116细胞（1×10^6个）糖酵解中丙酮酸激（PKM）、乳酸脱氢酶（LDHA）、己糖激酶（HK）表达水平.结果 转染NDRG2后,NDRG2可有效抑制HCT116细胞乳酸[（38.2 ±3.4） mol/L比（62.1±4.8）mol/L,P＜0.05]的生成,培养基剩余葡萄糖量则明显增多[（137.0±3.6） mol/L比（88.2±2.2）mol/L,P＜0.05].Western blot检测NDRG2转染的HCT116细胞显示PKM、LDHA、HK表达显著低于对照组HCT116细胞.结论 NDRG2作为肿瘤抑制基因,能够 调控结肠癌细胞糖代谢,抑制糖酵解关键酶生成,从而抑制肿瘤细胞糖酵解.

N-myc下游调节基因-2在输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及意义

目的 观察N-myc下游调节基因-2(N-myc downstream regulated gene-2,NDRG2)在大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型上的表达,探讨肾脏纤维化发病的机制.方法 雄性Wistar大鼠48只,数字法随机分为假手术组(24只,行左侧输尿管分离术)和手术组(24只,行左侧输尿管结扎离断术),各组大鼠分别在术后3d、7d、14 d、21 d各6只取材,留取左肾标本.用HE、Masson染色观察肾小管损伤的病理变化,采用Western blot、免疫组化方法检测E-cadherin和α-SMA的表达情况,从而验证造模成功.用实时定量PCR、Western blot、免疫组化验证NDRG2的表达.结果 假手术组各时间点无差异.与假手术组相比,UUO组大鼠随着梗阻时间延长,肾小管损伤程度逐渐加重,E-cadherin蛋白表达减少(P＜0.05),α-SMA蛋白表达增加(P＜0.05).NDRG2蛋白表达在UUO组明显低于假手术组(P＜0.05),随梗阻时间延长递减.用ImagePro Plus 6.0分析NDRG2免疫组织化学OD值,在21 d时最低(14.33 ±2.45)×10-3;Westem blot结果采用目的蛋白与内参OD值之比,21 d时最低为0.03 ±0.01;实时PCR显示NDRG2 mRNA在UUO组显著降低(P＜0.05).结论 在UUO模型中,NDRG2表达下调,其有可能参与了肾脏纤维化的病理过程.

前列腺癌中N—myc下游调节基因-1启动子区甲基化状态的初步研究

目的检测前列腺癌中N-myc下游调节基因-1（N—mycdownstreamregu1atedgene-1，NDRG1）启动子区的甲基化状态，探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷对NDRG1基因在前列腺癌细胞mRNA的表达及对细胞增殖的影响。方法2013年1月至2014年4月采用亚硫酸盐测序PCR法分别检测前列腺癌组织、良性前列腺增生（BPH）组织、前列腺癌细胞系（PC3、22RV1、LNCaP、DU145）和人正常前列腺细胞系RWPE-1中的NDRG1基因启动子区甲基化状态。用10~mo1／L5-氮杂胞苷分别作用于LNCaP和DU145细胞72h后，噻唑盐法分析5-氮杂胞苷对LNCaP和DU145细胞增殖的影响；RT．PCR法检测两种细胞系中NDRG1mRNA的表达。结果NDRG1基因在前列腺癌细胞系PC．3、22RV1、LNCaP和DU145中甲基化率分别为（24．8±3．3）％、（36．2±2．5）％、（48．6±2．8）％、（69．5±1．7）％，人正常前列腺细胞系RWPE-1甲基化率为（4．8±4．5）％；前列腺癌组织中为（48．6±5．3）％，BPH组织中为（4．3±2．1）％，组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。10μmo1／L5-氮杂胞苷处理LNCaP和DU145细胞72h后，两种细胞中NDRG1基因发生了去甲基化，mRNA表达水平较处理前增强8～9倍，细胞生长受到抑制（P〈0．05）。结论NDRG1基因启动子区的高甲基化是其在前列腺癌中异常表达的原因之-，5-氮杂胞苷能逆转NDRG1基因的甲基化状态，调控该基因mRNA表达，并能抑制前列腺癌细胞的增殖。

EDS诱导小鼠睾丸间质细胞TM3凋亡中NDRG2的表达及意义

目的探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是否参与睾丸间质细胞的凋亡。方法选用小鼠睾丸间质细胞系TM3作为实验对象,建立体外的1,2-二甲磺酸乙烷(EDS)诱导睾丸间质细胞凋亡模型。用含有500、750μg/mL EDS的培养基刺激TM3细胞,以Western blot、Real-time PCR、流式细胞术等方法检测TM3细胞凋亡及NDRG2的表达变化。结果随EDS浓度增高,诱导小鼠睾丸间质细胞发生凋亡的比率升高,并且在EDS诱导的小鼠睾丸间质细胞中,NDRG2的表达较对照组呈现剂量依赖性增高。结论 NDRG2可能参与到睾丸间质细胞的凋亡。

N-myc下游调节基因-2的研究进展

NDRG2基因全称为N-myc下游调节基因-2,是NDRG家族成员之一,该基因有高度的同源性,主要参与细胞增殖及分化.目前主要作为抑癌基因被大量研究,除此之外,其还参与组织胚胎的发育、神经系统的发育及其疾病,参与醛固酮对肾远曲小管和集合管的水钠代谢调节作用,参与应激反应.该文就NDRG2的转录调控机制、分子间相互作用机制作一综述.

胰腺疾病组织N—myc下游调节基因2的表达与分布

分离胰岛细胞增生症患者、胰岛素瘤患者、胰尾高中分化腺癌患者和正常人胰腺组织，制成石蜡切片，用抗N-myc下游调节基因2（Ndrg2）单克隆抗体进行免疫组织化学染色（ABC法），用Western印迹法检测Ndrg2的表达与分布情况。结果显示，Ndrg2阳性反应物主要分布在胰岛细胞的胞浆，与胰岛素的阳性反应物分布与定位相似；胰岛细胞增生症患者胰岛数量增加，体积增大，且该疾病患者胰腺中Ndrg2表达增加；Western印迹实验结果显示胰岛细胞增生症患者胰腺组织中Ndrg2蛋白的表达量较正常组增高。提示Ndrg2基因可能在胰岛细胞中发挥重要的生理功能。

N—Myc下游调节基因3在胃癌组织的表达及临床意义

目的观察N—Mye下游调节基因3（NDRG3）在胃癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测120例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁组织中NDRG3的表达，分析其与患者临床病理特征和预后的关系。结果癌组织中NDRG3的高表达率为43．3％（52／120），显著高于正常胃组织。癌组织中NDRG3高表达与患者幽门螺杆菌（Hp）感染状态（x^2=21．08，P〈0．01）、肿瘤分化程度（x^2=6．96，P〈0．05）、浸润深度（x^2=4．81，P〈0．05）、淋巴结转移状态（x^2=13．64，P〈0．01）、TNM分期（x^2=22．51，P〈0．01）具有显著相关性，而与患者性别、年龄、肿瘤部位和大小无明显相关（P〉0．05）。此外，Kaplan—Meier生存分析显示，NDRG3高表达的胃癌患者与正常／低表达患者中位生存时间分别为28个月和68个月，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。Cox多因素回归分析表明NDRG3高表达是胃癌患者独立预后因素[风险比（HR）=2．49，P〈0．05]。结论NDRG3在胃癌组织中表达上调，与胃癌发生进展及预后明显相关。

α-硫辛酸对白细胞介素1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的探讨α-硫辛酸(ALA)调控微小RNA-877(miR-877)/N-myc下游调节基因2(NDRG2)分子轴对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其机制。方法本研究于2019年1月至2019年7月在南充市中心医院风湿免疫科实验室完成。分离培养SD大鼠膝关节软骨细胞,按照随机数字表法分为对照(Con)组、IL-1β组、IL-1β+ALA-低剂量(L)组、IL-1β+ALA-中剂量(M)组、IL-1β+ALA-高剂量(H)组、IL-1β+miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、IL-1β+miR-877抑制物(antimiR-877)组、IL-1β+空载体质粒(pcDNA)组和IL-1β+NDRG2过表达质粒(pcDNA-NDRG2)组、IL-1β+ALA+miRNA模拟物阴性对照(miR-NC)组和IL-1β+ALA+miR-877组。流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)的分泌量,蛋白质印记(western blot)法检测NDRG2蛋白的表达水平,实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-877和NDRG2 mRNA的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和western blot检测miR-877和NDRG2的靶向调控关系。结果与Con组比较,IL-1β组软骨细胞IL-6[(3.27±0.31)比(1.06±0.09)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌增加,miR-877[(2.65±0.24)比(1.02±0.09)]表达升高,NDRG2[(0.21±0.03)比(0.69±0.06)]表达降低,细胞凋亡率[(0.69±0.06)比(6.24±0.63)%]升高(均P<0.05);与IL-1β组比较,IL-1β+ALA-L组、IL-1β+ALA-M组、IL-1β+ALA-H组软骨细胞IL-6[(2.91±0.25),(2.33±0.23),(1.65±0.16)比(3.27±0.31)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,miR-877[(2.21±0.19),(1.96±0.17),(1.43±0.14)比(2.65±0.24)]的表达降低,NDRG2[(0.34±0.03),(0.46±0.04),(0.58±0.05)比(0.21±0.03)]表达升高,细胞凋亡率[(20.13±2.12),(16.32±1.63),(11.04±1.15)比(27.62±2.43)]%降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+anti-miR-NC组比较,IL-1β+anti-miR-877组软骨细胞IL-6[(1.38±0.14)比(3.34±0.33)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,细胞凋亡率[(12.54±1.25)比(27.14±2.73)]%降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+pcDNA组比较,IL-1β+pcDNA-NDRG2组软骨细胞IL-6[(1.43±0.15)比(3.47±0.34)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,细胞凋亡率[(13.55±1.35)比(28.14±2.83)]%降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+ALA+miR-NC组相比,IL-1β+ALA+miR-877组软骨细胞IL-6[(3.01±0.29)比(1.42±0.13)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌升高,细胞凋亡率[(25.47±2.53)比(11.68±1.87)]%增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论α-硫辛酸能够减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制与调控miR-877/NDRG2通路有关。

天麻素通过调控miR-150-5p/NDRG2通路对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的保护作用研究

目的研究天麻素(Gas)是否通过调控miR-150-5p/N-myc下游调节基因2(NDRG2)通路进而对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤发挥保护作用。方法将肺泡上皮细胞(A549)分为对照组、感染组、感染+Gas-低组、感染+Gas-中组、感染+Gas-高组、感染+anti-miR-NC组、感染+anti-miR-150-5p组、感染+Gas+miR-NC组和感染+Gas+miR-150-5p组。酶联免疫吸附试验试(ELISA)检测细胞培养液中白细胞介素10(IL-10)和IL-6的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-150-5p和NDRG2 mRNA的表达水平;蛋白质印记(Western blot)检测NDRG2蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-Caspase-3)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-150-5p和NDRG2的靶向调控关系。结果与对照组比较,感染组A549细胞培养液中IL-6含量明显升高,IL-10含量明显降低,细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与感染组比较,感染+Gas组A549细胞IL-6含量、Bax、cleaved-Caspase-3和miR-150-5p的表达降低,IL-10含量、Bcl-2和NDRG2的表达升高,细胞凋亡率降低,并呈剂量反应关系,有统计学意义(P<0.05)。NDRG2与感染+anti-miR-NC组比较,感染组+anti-miR-150-5p组A549细胞IL-6含量、Bax和miR-150-5p的表达降低,IL-10含量、Bcl-2和NDRG2的表达升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);与感染+Gas+miR-NC组比较,感染+Gas+miR-150-5p组A549细胞IL-6含量、Bax和miR-150-5p的表达升高,IL-10含量、Bcl-2和NDRG2的表达降低,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Gas可能通过下调miR-150-5p/NDRG2通路表达对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤具有一定的保护作用。

结直肠癌中缺氧诱导因子-1α与NDRG1表达的关系

目的探讨结肠癌LS174T细胞及结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及与NDRG1的相关性。方法构建靶向HIF-1α的质粒pSilence-2.1-U6-siRNA并鉴定,采用阳离子脂质体转染法将其转染LS174T细胞,低氧培养24h,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α、NDRG1 mRNA表达。Western blots检测NDRG1蛋白表达。采用原位杂交技术检测人结直肠腺瘤和腺癌组织中HIF-1αmRNA,应用免疫组织化学方法检测NDRG1蛋白的表达。结果siRNA从转录水平抑制了HIF-1α基因表达。同时,NDRG1 mRNA、蛋白表达也显著受抑制。结直肠腺癌组织中HIF-1αmRNA阳性表达率为67.7%(42/62),腺瘤为44.4%(8/18)。从Dukes A期到Dukes C+D期演变过程中HIF-1αmRNA表达阳性率不断增加(P<0.05)。腺癌组NDRG1阳性表达率显著高于腺瘤组。结直肠腺癌中NDRG1阳性表达与Dukes分期显著相关。HIF-1α与NDRG1均呈正相关(P<0.05)。结论HIF-1α可能通过上调NDRG1表达参与了结直肠腺的进展。