增殖细胞核抗原、人类N-myc下游调节基因1在肝细胞性肝癌中的表达及临床意义

目的：研究增殖细胞核抗原（PCNA）及人类N-myc下游调节基因1（NDRG1）在人肝细胞性肝癌中的表达情况,探讨其与肝癌生物学行为的关系及临床意义。方法：选择有存档的原发性肝癌标本58例,肝硬化34例,正常肝组织标本15例,用H-E染色观察组织形态,用免疫组织化学SABC检测PCNA和NDRG1的表达。结果：肝癌组织中PCNA表达明显高于肝硬化组织和正常组织;在肝硬化组织和正常肝组织中,PCNA的表达没有差异;肝癌中PCNA的表达与患者的性别、年龄、HbsAg阳性、AFP水平、部位和肿瘤的直径无关。NDRG1在正常肝组织、肝硬化组织、肝癌组织中表达逐渐减弱;肝硬化组与正常肝组织组相比,差异无统计学意义,在肝癌组织中NDRG1与患者的性别、年龄、HbsAg阳性、AFP水平、部位和肿瘤的直径无关。PCNA及NDRG1在肝癌组织中的表达呈负相关。结论：PCNA、 NDRG1在肝癌发生、发展过程中起着重要的作用,联合检测可以为肿瘤的早发现、早诊断、早治疗提供判断依据。

NB4细胞株分化中NDRG1表达的研究

目的:应用多种分化诱导剂处理急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4细胞株,探讨NDRG1表达在白血病细胞诱导分化中的作用。方法:采用1×10^(-7)mol/L全反式维甲酸(ATRA)、1%二甲基亚砜(DMSO)和20 nmol/L佛波酯(TPA)分别处理NB4细胞48h,并通过细胞染色、流式细胞检测、蛋白印迹(Western blot)和实时PCR分别检测分化细胞的核型、CD11b、CD11c、CD14表达,观察ndrgl mRNA与蛋白的变化。结果:3种分化诱导剂分别处理细胞株后,细胞核缩小且呈分叶状改变,细胞内NDRGl蛋白表达均呈时间依赖性上调;经ATRA和DMSO处理的细胞,其ndrgl mRNA发生上调,而经TPA处理的细胞却未发生ndrgl mRNA表达上调。结论:细胞信号调控分子NDRG1与细胞分化密切相关。

前列腺癌中N—myc下游调节基因-1启动子区甲基化状态的初步研究

目的检测前列腺癌中N-myc下游调节基因-1（N—mycdownstreamregu1atedgene-1，NDRG1）启动子区的甲基化状态，探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷对NDRG1基因在前列腺癌细胞mRNA的表达及对细胞增殖的影响。方法2013年1月至2014年4月采用亚硫酸盐测序PCR法分别检测前列腺癌组织、良性前列腺增生（BPH）组织、前列腺癌细胞系（PC3、22RV1、LNCaP、DU145）和人正常前列腺细胞系RWPE-1中的NDRG1基因启动子区甲基化状态。用10~mo1／L5-氮杂胞苷分别作用于LNCaP和DU145细胞72h后，噻唑盐法分析5-氮杂胞苷对LNCaP和DU145细胞增殖的影响；RT．PCR法检测两种细胞系中NDRG1mRNA的表达。结果NDRG1基因在前列腺癌细胞系PC．3、22RV1、LNCaP和DU145中甲基化率分别为（24．8±3．3）％、（36．2±2．5）％、（48．6±2．8）％、（69．5±1．7）％，人正常前列腺细胞系RWPE-1甲基化率为（4．8±4．5）％；前列腺癌组织中为（48．6±5．3）％，BPH组织中为（4．3±2．1）％，组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。10μmo1／L5-氮杂胞苷处理LNCaP和DU145细胞72h后，两种细胞中NDRG1基因发生了去甲基化，mRNA表达水平较处理前增强8～9倍，细胞生长受到抑制（P〈0．05）。结论NDRG1基因启动子区的高甲基化是其在前列腺癌中异常表达的原因之-，5-氮杂胞苷能逆转NDRG1基因的甲基化状态，调控该基因mRNA表达，并能抑制前列腺癌细胞的增殖。

转化生长因子-β1抑制人肾小管上皮细胞株HK-2中N-Myc下游调节基因2表达及意义

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对人肾小管上皮细胞株HK-2中N-myc下游调节基因2（NDRG2）表达的影响。方法按照是否孵育TGF-β1分别设置对照组和实验组，取两组细胞分别提取蛋白及RNA行Western blot及实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR），检验两组上皮细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）和Snail蛋白的表达差异。然后根据孵育TGF-β1的不同浓度梯度设置不同组别，分别取各组细胞提取蛋白及RNA行Western blot及RT-qPCR以检验NDRG2在TGF-β1作用后的人肾小管上皮细胞（HK-2）中的表达。结果结果表明对照组和实验组在蛋白水平相关表达量分别为E-cadherin（1.0±0.2比0.3±0.2）（t＝4.850, P＝0.008），α-SMA（1.0±0.1比2.6±0.4）（t＝6.721, P＝0.003），Vimentin（1.0±0.1比2.6±0.4）（t＝6.721, P＝0.003），Snail（1.0±0.1比2.5±0.2）（t＝11.620, P＝0.000），以上标志物两组之间差异均有统计学意义。对照组和实验组在mRNA水平相关表达量分别为E-cadherin（1.0±0.2比0.2±0.1）（t＝7.686, P＝0.002），α-SMA（1.0±0.3比2.4±0.3）（t＝5.715, P＝0.005），Vimentin（1.1±0.2比2.6±0.5）（t＝4.977, P＝0.008），Snail（0.9±0.2比1.9±0.2）（t＝6.124, P＝0.004），以上标志物两组之间差异均有统计学意义。同时在TGF-β1孵育后，HK-2细胞中NDRG2在蛋白和RNA水平都明显下调，各组在蛋白水平相关表达量分别为1.00±0.04比0.80±0.03比0.50±0.05比0.30±0.03比0.20±0.02（P＝0.019），在mRNA水平相关表达量分别为1.00±0.05比0.70±0.03比0.50±0.04比0.30±0.02比0.20±0.05（P＝0.021）。尤其当孵育TGF-β1浓度大于10 ng/ml时这种作用最为显著，各组表达水平之间差异有统计学意义。结论TGF-β1可以促进HK-2细胞中上皮-间充质转化（EMT）过程，同时TGF-β1可以下调HK-2细胞中NDRG2在蛋白和RNA水平的表达量。

结直肠癌中缺氧诱导因子-1α与NDRG1表达的关系

目的探讨结肠癌LS174T细胞及结直肠腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及与NDRG1的相关性。方法构建靶向HIF-1α的质粒pSilence-2.1-U6-siRNA并鉴定,采用阳离子脂质体转染法将其转染LS174T细胞,低氧培养24h,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α、NDRG1 mRNA表达。Western blots检测NDRG1蛋白表达。采用原位杂交技术检测人结直肠腺瘤和腺癌组织中HIF-1αmRNA,应用免疫组织化学方法检测NDRG1蛋白的表达。结果siRNA从转录水平抑制了HIF-1α基因表达。同时,NDRG1 mRNA、蛋白表达也显著受抑制。结直肠腺癌组织中HIF-1αmRNA阳性表达率为67.7%(42/62),腺瘤为44.4%(8/18)。从Dukes A期到Dukes C+D期演变过程中HIF-1αmRNA表达阳性率不断增加(P<0.05)。腺癌组NDRG1阳性表达率显著高于腺瘤组。结直肠腺癌中NDRG1阳性表达与Dukes分期显著相关。HIF-1α与NDRG1均呈正相关(P<0.05)。结论HIF-1α可能通过上调NDRG1表达参与了结直肠腺的进展。