大鼠肝癌湿热证、脾虚证与野生型p53 mRNA、N-ras表达相关性研究

目的探讨实验性肝癌湿热证、脾虚证与野生型p53 mRNA、N-ras表达的相关性,揭示中医证型分子水平的客观内涵。方法通过建立实验性大鼠肝癌湿热证和脾虚证模型,并设正常对照组,采用原位杂交和免疫组织化学法分别检测肝癌组织野生型p53 mRNA及N-ras蛋白表达。结果肝癌脾虚证组野生型p53 mRNA阳性表达率显著低于正常对照组(P<0.05),肝癌湿热证组与正常对照组比较,及肝癌脾虚证组与肝癌湿热证组比较差异无显著意义(P>0.05)。肝癌脾虚证组和肝癌湿热证组N-ras蛋白阳性表达水平比正常对照组均显著升高(P<0.05,P<0.01),肝癌脾虚证组与肝癌湿热证组比较差异无显著意义(P>0.05)。结论野生型p53 mRNA、N-ras异常表达与肝癌湿热证、脾虚证具有相关性,野生型p53 mRNA表达率显著降低是肝癌脾虚证的特征之一。

重铬酸钾致N-ras基因DNA损伤作用研究

目的 研究重铬酸钾对N -ras基因的DNA损伤作用,探讨其致癌作用分子机制。方法 制备N -ras基因外显子1单链探针;重铬酸钾染毒细胞提取基因组DNA ,再经RDPCR扩增后与探针杂交显色。结果 重铬酸钾染毒剂量10 0 μmol L可检测到DNA损伤片段杂交条带,其损伤片段长于完整的N ras基因外显子1;更高剂量(10 0 0 μmol L)未能检测出DNA损伤作用。结论 重铬酸钾可能造成N- ras基因外显子1上游序列DNA损伤,且该损伤作用可能正是其致癌作用分子机制的关键所在。

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras基因表达的影响

目的探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras基因表达的影响。方法运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细包中N-rasmRNA量及N-Ras蛋白的表达量。结果树舌多糖组、猪苓多糖组中N-rasmRNA量及Ras蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论初步认为树舌多糖GF可通过降低N-rasmRNA量及Ras蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖。

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc蛋白表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras、c-myc蛋白表达的影响。方法:运用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中N-ras、C-myc蛋白的表达量。结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras、C-myc蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论:树舌多糖GF可通过降低N-ras、C-myc蛋白的表达,抑制He-pA瘤细胞的增殖。

原位杂交法检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras基因mRNA表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤细胞癌基因N-ras mRNA水平的影响。方法:应用地高辛标记探针原位杂交技术,检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞中癌基因N-ras mRNA丰度的作用。结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中mRNA表达量均显著低于模型组(P(0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论:树舌多糖GF可通过调节N-ras基因mRNA的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖。

人肝癌细胞N-ras基因RNA干涉有效靶点的确定

目的寻找人肝癌细胞N-ras基因的RNA干涉有效靶点。方法利用计算机网络资源及Oligo6.0、BlastResearch等生物学软件在N-ras基因编码区寻找RNAi有效靶点,并设计用于体内转录形成以U6启动子的siRNA发夹结构的DNA。结果成功筛选出RNA干涉的有效序列14个,并设计出siRNA发夹结构的DNA。结论这种对人肝癌细胞N-ras基因的RNAi有效靶点的筛选为进一步研究奠定了理论基础。其工作的开展将在RNAi治疗、肝癌N-ras基因功能研究、新药开发等方面发挥重要作用。

VEGF和N-Ras及pERK1/2在急性髓系白血病骨髓中的表达及相关性研究

目的:研究VEGF、NRas和pERK1/2在急性髓系白血病(AML)中的表达及临床意义,探讨白血病发展过程中VEGF的表达与Ras/MAPK信号通路之间的相互关系。方法:应用免疫组织化学染色法检测骨髓单个核细胞VEGF、NRas和pERK1/2蛋白的水平,应用PCR/RFLP、PCRSSCP和DNA测序方法对初诊和完全缓解(CR)AML患者进行Nras基因12位点突变分析。结果:检测AML46例,在初诊组28例AML中,VEGF、Nras和pERK1/2的表达[(52.1±0.31)%、(59.8±0.32)%和(41.9±0.38)%]显著高于20例对照组[(20.5±0.16)%、(20.9±0.12)%和(14.1±0.14)%],P=0.034、P=0.008和P=0.005。CR组18例AML患者中,VEGF、NRas和pERK1/2的表达[(18.6±0.18)%、(28.2±0.27)%和(15.1±0.19)%]与对照组差异无统计学意义,P>0.05、P=0.411和P=0.343。初诊组VEGF、Nras和pERK1/2的表达较CR组显著增高,P=0.029、P=0.018和P=0.008。初诊和CR组中未发现Nras基因12位点突变。VEGF与Nras和pERK1/2表达水平相关性分析结果表明,VEGF的表达与NRas和pERK1/2的表达具有密切相关性(VEGF与NRas:r=0.510,P=0.003;VEGF与pERK1/2:r=0.513,P=0.003;VEGF与pERK1/2:r=0.464,P=0.009)。结论:VEGF和NRas/ERK信号传导通路共同参与了AML的发展过程,NRas/ERK信号传导通路的工作状态与Nras基因突变关系不密切。

N-ras基因DNA损伤检测方法的建立

目的建立应用依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)技术检测N-ras基因DNA损伤的试验方法。方法采用单引物PCR技术制备N-ras基因外显子1单链探针,酶切构建DNA损伤模型,再经RDPCR扩增后与探针杂交显色。结果单引物PCR技术制备单链探针获得成功,目的基因在相应位置出现了清晰的杂交条带。结论RDPCR技术可定位检测到该酶切DNA损伤位点,表明该方法已成功建立,将有利于其在化学致癌作用机制研究及肿瘤预防领域的应用。

RNA干扰肝癌MHCC97-H细胞N-Ras基因对放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）N—Ras基因增强人肝癌MHCC-97细胞的放射敏感性。方法通过构建干扰N-Ras基因siRNA，采用免疫组织化学法、实时荧光定量RT—PCR、Westernblot、MTT法观察RNAi前后肝癌MHCC97-H细胞RNA水平、蛋白水平、生长情况等变化，照射后用细胞克隆计数实验检测放射敏感性变化。结果MHCC97-H细胞株RNAi后mRNA表达抑制率为96．9％±0．159％，RNAi前后差异有统计学意义（t=40．377，P〈0．05），蛋白表达抑制率为89．8％±0．012％，RNAi前后差异有统计学意义（t=31．595，P〈0．05），免疫组织化学显示90％表达被抑制，细胞生长抑制率为21．9％，RNAi前后差异均有统计学意义（F=4．63，P〈0．05）。MHCC97-H细胞RNAi后增敏比（SER）=1．15。结论RNAi肝癌MHCC97一H细胞N—Ras基因可以达到放射增敏的目的。

杞菊合剂防治高血压左室肥厚机制研究

目的:通过观察杞菊合剂对自发性高血压大鼠(SHR)血压、左室重量与体重比(LVW/BW)、心肌组织原癌基因N-ras及c-myc mRNA表达的影响,探讨该方剂对高血压左室肥厚的作用及其机理。方法:SHR 32只,随机分成杞菊合剂组(A组,8只)、苯那普利组(B组,8只)、杞菊合剂加苯那普利组(C组,8只)、模型组(D组,8只),再取8只正常SD大鼠作为正常对照组(E组,8只),共五组。各治疗组给予相应药物剂量灌胃,正常组与模型组同时给予等量的蒸馏水灌胃,每日1次,治疗12周,每周测量血压,实验结束时收集标本,检测左室重量与体重比(LVW/BW)、心肌组织原癌基因N-ras及c-myc mRNA的表达。结果:杞菊合剂可降低SHR的血压、左室重量、心肌组织N-ras c-myc mRNA的表达(P<0.05)。以杞菊合剂加苯那普利疗效最佳,杞菊合剂在降压方面不及苯那普利,二者对左室重量及N-ras、c-myc mRNA表达的影响与苯那普利无显著性差异(P﹥0.05)。结论:杞菊合剂可有效逆转高血压左室肥厚;杞菊合剂逆转高血压左室肥厚的机制可能与其降低血压,抑制原癌基因N-ras、c-myc表达有关;杞菊合剂与苯那普利联合应用其逆转高血压左室肥厚的作用更为显著。