(S)-(+)3-氨基吡咯烷二盐酸盐的合成研究

以L-天冬氨酸为原料,经缩合得N-甲酰-L-天冬氨酸酐,然后经酰化、酯化、还原、成环得(S)-1-苄基-3-氨基吡咯烷,最后脱苄合成(S)-(+)3-氨基吡咯烷二盐酸盐,总收率62.8%。考察了工艺条件对反应的影响。(S)-1-苄基-3-氨基吡咯烷适宜工艺条件为:n(KBH4)∶n(H2SO4)∶n(混合物4)=3∶1.5∶1,反应温度50～60℃,反应时间6h,收率71.6%。产物结构经MS和1 H NMR进行确证。

二硫代氨基甲酸吡咯烷对重症急性胰腺炎肺损伤中核因子-KB表达及细胞凋亡作用

目的:探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)活化及细胞凋亡的作用.方法:大鼠建立模型后取肺组织行大体及光镜下病理观察,免疫组织化学检测NF-κB、凋亡调控因子(Fas)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡,免疫印迹法观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达情况.结果:SAP组与PDTC预处理组肺组织病理改变明显,细胞凋亡明显,NF-κB、Fas、Bcl-2与TNF-α表达均明显升高,6h达最高峰.PDTC预处理组与SAP组比较,则病理改变明显减轻,凋亡指数、NF-κB、Fas、TNF-α与caspase-3蛋白表达均下降,但仍高于对照组,而Bcl-2表达趋势相反.结论:NF-κB活化参与了SAP时肺组织的细胞凋亡.PDTC能有效缓解SAP肺损伤症状,其机制可能是通过抑制NF-κB激活与细胞凋亡.

二氢杨梅素诱导MDA-MB-231细胞凋亡

为了探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制,利用倒置显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞仪检测DMY对MDA-MB-231细胞的致凋亡能力和细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位(ΔΨm)的改变,用蛋白质印迹(Western blotting)分析检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的变化。结果表明:MDA-MB-231细胞随DMY质量浓度加大而变圆变小,细胞存活数减少;流式细胞仪检测显示随DMY质量浓度的增加,DMY对MDA-MB-231细胞有促凋亡作用,胞内钙离子浓度逐渐增加,而线粒体跨膜电位(ΔΨm)逐渐减少;Western blotting结果显示DMY可诱导MDA-MB-231细胞中caspase-3和caspase-9蛋白质活化,并呈现浓度依赖关系。表明DMY可通过线粒体途径诱导MDA-MB-231细胞凋亡。

侧脑室注射4,4＇-二异硫氰基芪-2，2＇-二磺酸对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的探讨侧脑室注射4，4’-二异硫氰基芪-2，2’-二磺酸（DIDS）对脑缺血再灌注（CIRI）大鼠脑组织损伤的保护作用及其机制。方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，侧脑室注射法给药。脑缺血2h再灌注24h后用Zea—Longa标准进行神经功能评分；红四氮唑溶液（TTC、染色法测定大鼠脑梗死面积；Westernblot法测大鼠脑组织B淋巴细胞瘤．2（B—celllymphoma-2，Bcl-2）和天冬氨酸蛋白酶．3（Caspase-3）两种蛋白的表达水平；试剂盒测定大鼠脑组织内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）的活性。结果100gmol／LDIDS侧脑室给药能改善大脑的神经功能，减少脑缺血面积，增加Bcl-2的表达，减少Caspase-3的表达，降低iNOS的活性。结论DIDS可以通过调节凋亡相关蛋白的表达以及降低iNOS的活性对大鼠神经细胞进行保护，减轻脑缺血再灌注损伤（CIRI）造成的脑组织损伤。

(3S)-3-[(苄氧羰基)-甲基]-吗啉-2,5-二酮的合成研究

以β-苯甲基-L-天冬氨酸酯和溴乙酰溴为原料合成了(3S)-3-[(苄氧羰基)-甲基]-吗啉-2,5-二酮,产物用FTIR图谱、1H-NMR图谱进行结构表征。通过考察酰化反应中体系pH值和环化反应中反应物滴加速度对反应产率的影响,确定了pH=8、滴加速度0.006 mol/h为较佳的合成条件。通过对合成工艺的改进,反应总产率达到了33%以上。

杜仲木脂素对慢性青光眼大鼠视神经保护作用及SOD、MDA、Caspase-3表达的影响

目的:探讨杜仲木脂素对慢性青光眼大鼠视神经保护作用及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:将90只SD大鼠随机分成5组:对照组、模型组、杜仲木脂素低、中、高剂量组(200,400,800 mg·kg^(-1)),每组18只;模型组、杜仲木脂素低、中、高剂量组建立慢性青光眼模型,建模成功后,杜仲木脂素低、中、高剂量组给予相应药物灌胃,1次/d,持续12周,模型组及对照组给予等体积的生理盐水。试验结束后,测定各组大鼠眼压、视网膜细胞凋亡水平、视网膜SOD和MDA水平,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及蛋白质印迹(Western Blot)法测定视网膜Caspase-3 mRNA和蛋白水平。结果:与对照组比较,模型组、杜仲木脂素各剂量组大鼠眼压水平、视神经细胞凋亡率、视网膜MDA、视网膜Caspase-3 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05),视网膜SOD水平降低(P<0.05);与模型组比较,杜仲木脂素低、中、高剂量组眼压水平、视神经细胞凋亡率、视网膜MDA、视网膜Caspase-3 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05),视网膜SOD水平升高(P<0.05);且随着杜仲木脂素剂量的增加,杜仲木脂素各剂量组眼压水平、视神经细胞凋亡率、视网膜MDA、视网膜Caspase-3 mRNA和蛋白水平逐渐降低(P<0.05),视网膜SOD水平逐渐升高(P<0.05)。结论:杜仲木脂素能明显降低慢性青光眼大鼠眼压及视神经细胞凋亡水平,降低视网膜氧化损伤反应;其机制可能与杜仲木脂素可抑制Caspase-3 mRNA和蛋白水平,进而抑制Caspase-3信号通路有关。

二硫代氨基甲酸吡咯烷对人骨肉瘤细胞凋亡及黑色素瘤凋亡抑制蛋白和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响

目的 观察二硫代氨基甲酸吡咯烷对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡及黑色素瘤凋亡抑制蛋白（Livin）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达的影响.方法 采用体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,用50、100、200、400 μmol/L的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）分别作用于骨肉瘤MG-63细胞,在24、48、72 h后,噻唑蓝（MTT）法测各组细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率.作用于骨肉瘤MG-63细胞24h后,用Western blot方法检测各组细胞Livin和Caspase-3蛋白的表达水平.结果 随PDTC浓度增加骨肉瘤MG-63细胞增殖活性呈下降趋势,作用时间越长细胞的增殖活性越低,而细胞的凋亡率呈上升趋势（P＜0.05）.作用24h后,随PDTC浓度增加各组细胞中Livin蛋白的表达为1.384±0.009、0.912±0.007、1.501±0.011、0.751 ±0.008,对照组为1.834±0.006,呈下降趋势,而Caspase-3蛋白表达呈上升趋势（P＜0.05）.结论 PDTC可诱导入骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其机制可能与PDTC抑制核因子（NF）-κB传导通路,下调Livin表达继而上调Caspase-3表达有关.

HK2和VDAC1在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨HK2和VDAC1在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用。方法采用剂量递增方法,建立二乙酰吗啡成瘾大鼠模型。将40只SD大鼠随机分为3组,正常组(Control,n=10)皮下注射等量生理盐水;模型组(Model,n=15)首次皮下注射二乙酰吗啡剂量为5 mg/kg,以后逐日递增剂量2.5 mg/(kg·d),连续注射20 d;模型+10 D组(Model+10D,n=15)在模型组基础上继续递增剂量至第10天。采用ELISA法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,GOT)含量;采用HE染色观察各组心肌组织病理变化;采用TUNEL染色检测各组心肌组织细胞凋亡;采用免疫组化、RT-qPCR和Western blot检测HK2、VDAC1及凋亡相关因子的mRNA和蛋白的表达变化。结果HE染色发现随着二乙酰吗啡干预时间的延长,心肌组织表现出不同程度的损伤。与正常组相比,模型组中血清LDH、GOT含量及心肌凋亡率升高,HK2和抗凋亡因子Bcl-2的mRNA和蛋白水平下降,VDAC1和促凋亡因子Bax、Caspase-3的mRNA和蛋白水平升高,Clevead Caspase-3蛋白水平升高;与正常组相比,模型+10 D组中以上指标,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二乙酰吗啡可导致心肌细胞凋亡,HK2和VDAC1可能参与了二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡的过程。

臭灵丹中HTMF诱导Hep-2细胞凋亡

目的:探讨中药臭灵丹中3,5-二羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮(HTMF)诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的机制。方法:倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst 33258染色,观察对Hep-2细胞的致凋亡能力;流式细胞仪检测HTMF对Hep-2细胞的凋亡率和线粒体跨膜电位(Δφm)的改变;Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的变化。结果:倒置显微镜下Hep-2细胞随HTMF浓度加大而变小变圆,细胞存活数随浓度增加而减少。Hoechst 33258染色后高浓度组Hep-2细胞核固缩并出现呈致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体。流式结果显示HTMF对Hep-2细胞有促凋亡作用并呈明显的量效关系,线粒体跨膜电位(Δφm)随HTMF浓度的增加而下降。Western blotting结果显示HTMF可诱导Hep-2细胞中caspase-3和caspase-9蛋白活化,并呈浓度依赖性关系。结论:HTMF可通过线粒体途径诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡。

尿酸对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响及其机制

目的观察尿酸对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠学习记忆能力的影响,并探讨作用机制。方法 Morris水迷宫实验筛选出90只大鼠,随机分为空白对照组,模型对照组,尿酸处理组(1～4组),每组15只。Aβ1-42海马注射制作AD模型,用Morris水迷宫实验观察干预前后大鼠空间学习记忆能力的变化,丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒测定海马区MDA的含量;免疫组化染色测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠空间学习记忆能力下降(P<0.01),海马区MDA含量和caspase-3明显增高(P<0.01);与模型对照组比较,2种剂量尿酸处理组大鼠的学习记忆能力明显改善(P<0.01),海马区MDA和caspase-3的表达减少(P<0.01)。结论尿酸具有改善AD大鼠空间学习记忆作用,可能与抗氧化应激作用及抑制海马中caspase-3表达有关。

二甲双胍联合塞来昔布对胰腺癌细胞增殖及Caspase-3活性的影响

目的:探讨二甲双胍和塞来昔布单独或联合应用对胰腺癌细胞增殖和Caspase-3活性的影响。方法:体外培养人胰腺癌BxPC-3和As PC-1细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度二甲双胍和塞来细胞对胰腺癌细胞存活率的影响。联合实验分4组:对照组、二甲双胍组(MET,15 mmol/L)、塞来昔布组(CEL,100μmmol/L),二甲双胍和塞来昔布联合组(MET 15 mmol/L+CEL100μmmol/L),孵育48 h,用MTT检测细胞存活率,用Caspase-3比色测定试剂盒测定Caspase-3活性。结果:二甲双胍和塞来昔布单药均可以时间和剂量依赖性方式降低胰腺癌Bx PC-3和As PC-1细胞的生存率。两种细胞系的各加药组细胞存活率与对照组比较差异均存在统计学意义(P<0.01),联合实验组的细胞存活率明显低于单独用药组(P<0.01)。二甲双胍和塞来昔布单药处理的胰腺癌Bx PC-3和As PC-1细胞Caspase-3活性均显著高于对照组(P<0.01),二甲双胍和塞来昔布联合实验组Caspase-3活性均明显高于单药处理组和对照组(P<0.01),但二甲双胍组和塞来昔布组之间的Caspase-3活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:二甲双胍和塞来昔布联合作用可协同抑制胰腺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase-3活性促进胰腺癌细胞的凋亡,其联合应用可能成为胰腺癌药物治疗的有效策略。

糖原合成酶激酶-3β在瑞芬太尼诱发大鼠脊髓背角神经元NMDA受体微小兴奋性突触后膜电流中的作用

目的探讨糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）在瑞芬太尼诱发大鼠脊髓背角神经元NMDA受体微小兴奋性突触后膜电流（mEPSCs）中的作用。方法取出生14～18d的Wistar大鼠24只，体重50～60g，制备腰段脊髓切片，取切片144张，采用随机数字表法，将其分为4组（n=36）：对照组（C组）：置人人工脑脊液中培养；甘氨酸组（G组）：置入含甘氨酸（浓度0．24μmol／L）的人工脑脊液中孵育；瑞芬太尼组（R组）：置人含瑞芬太尼（浓度为4nmol／L）的人工脑脊液中孵育；瑞芬太尼＋GSK-3β抑制剂TDZD-8组（RT组）：置入含瑞芬太尼和TDZD-8（浓度分别为4nmol／L和10gmol／L）的人工脑脊液中孵育。各组孵育60min后应用全细胞膜片钳技术记录脊髓背角神经元NMDA受体mEPSCs的幅值和频率。结果与C组比较，R组mEPSCs的幅值和频率升高（P〈0．01），G组和RT组差异无统计学意义（P〉0．05）；与R组比较，RT组mEPSCs幅值和频率降低（P〈0．01）。结论脊髓背角神经元GSK-30参与了瑞芬太尼增强NMDA受体mEPSCs的作用，提示其可能参与了瑞芬太尼诱发的痛觉过敏。

1,25-二羟维生素D_(3)对β淀粉样蛋白1-42诱导PC12细胞焦亡的保护作用

目的探讨1,25-二羟维生素D_(3)[1,25(OH)_(2)D_(3)]对β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导的PC12细胞焦亡的保护作用。方法 Aβ_(1-42)诱导PC12细胞构建体外阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)细胞模型,设立对照组、模型组(20μmol/L Aβ1-42)及不同浓度1,25(OH)2D3预处理组[1、10、100 nmol/L 1,25(OH)2D3+20μmol/L Aβ_(1-42)]。CCK-8检测1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞活性,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色检测细胞膜通透性,比色法、酶联免疫吸附法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,免疫蛋白印迹法检测NOD样受体家族蛋白(NOD-like receptor family protein 1, NLRP1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1, caspase-1)和消皮素D(gasdermin D, GSDMD)蛋白表达。结果与对照组相比,模型组细胞活性显著降低(P<0.01),细胞膜通透性、LDH、IL-1β、NLRP1、caspase-1和GSDMD蛋白显著升高(P<0.01)。与模型组相比,3个1,25(OH)2D3预处理组的细胞活性均有所提高(P<0.05),细胞膜破损减少。10和100 nmol/L 1,25(OH)2D3预处理组细胞LDH释放、IL-1β水平显著降低(P<0.01)。1 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)组中NLRP1和GSDMD蛋白的表达量明显降低(P<0.05),10和100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)组降低更为显著(P<0.01),10和100 nmol/L 1,25(OH)2D3组的caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论 1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞焦亡具有保护作用。

3’,4’-二羟基黄酮醇通过抑制caspase1的活化减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥厚

目的探讨3’,4’-二羟基黄酮醇(DiOHF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥厚的作用及其机制。方法选取7~8周龄雄性C57小鼠40只随机分为对照组(DMSO+生理盐水,n=10)、DiOHF组(6 mg·kg^(-1)·d^(-1),溶于10%DMSO+90%花生油,n=10)、AngⅡ组(1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1),溶于0.9%生理盐水,n=10)以及AngⅡ+DiOHF组(AngⅡ1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)+DiOHF 6 mg·kg^(-1)·d^(-1),n=10),各组注射不同试剂溶液4周后停止,使用心脏超声评价各组小鼠心功能。麻醉后颈椎脱臼处死小鼠,称量体质量和心肺质量,取心尖组织进行PCR检测各组小鼠心肌纤维化基因结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连接蛋白(Fn1)和炎症基因caspase1和IL-1βmRNA的表达。采用免疫印迹检测各组小鼠心尖组织cleaved caspase1和mature IL-1β蛋白的表达情况。其余组织固定包埋后取短轴最大径平面切片进行HE、Masson染色,评价心肌肥厚及纤维化。选取大鼠心肌细胞系(H9C2)分为DMSO、DiOHF(10μmol/L,溶于DMSO中)、AngⅡ(1μmol/L,溶于培养基中)、DiOHF+AngⅡ(10μmol/L DiOHF预处理2 h后加入1μmol/L AngⅡ共处理24 h)4组。24 h后对细胞骨架进行鬼笔环肽染色,在荧光显微镜下检测细胞形态,测量心肌细胞表面积。同时收获不同组细胞进行裂解后进行PCR检测caspase1和IL-1βmRNA的表达。采用免疫印迹检测各组细胞活化的cleaved caspase1、mature IL-1β和心肌肥厚相关蛋白脑钠肽(BNP)蛋白的表达情况。结果小鼠实验中,DiOHF的注射可减轻AngⅡ诱导的小鼠射血分数(EF)下降,降低心体质量比和心肺质量比(HW/BW、HW/LW)、心肌横截面积(CSA)和心肌胶原的沉积(均P<0.05)。RT-RCR显示与AngⅡ组相比,AngⅡ+DiOHF组Fn1、CTGF和炎症相关性基因caspase1、IL-1βmRNA的表达降低(均P<0.05)。免疫印迹显示AngⅡ+DiOHF组cleaved caspase1和mature IL-1β蛋白较AngⅡ组表达水平明显降低(0.77±0.09比1.18±0.14,0.90±0.13比1.56±0.30,均P<0.05)。H9C2细胞实验中,与AngⅡ组比较,AngⅡ+DiOHF组减少了细胞表面积,降低了caspase1和IL-1βmRNA的表达,减少了BNP和cleaved caspase1、mature IL-1β蛋白的表达(1.15±0.02比1.45±0.03,0.50±0.03比1.38±0.07,1.14±0.07比2.13±0.13,均P<0.05)。结论DiOHF通过抑制caspase1和IL-1β蛋白的激活,改善AngⅡ诱导的小鼠心脏肥厚和纤维化,保护小鼠心功能。

氢气通过Bax/Caspase3凋亡通路减轻大鼠创伤性脑损伤的研究

目的 探讨氢气通过B淋巴细胞瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)凋亡通路对大鼠创伤性脑损伤的改善作用。方法 56只SD大鼠分为对照组、模型组、氢气+通路激活组、氢气组,每组14只,制作创伤性脑损伤大鼠模型,造模结束后,氢气组每天吸入1 h氢气(42% H_(2)-21% O_(2)-37%N),氢气+通路激活组应用氢气+5μg Bax/Caspase3激活剂干预。干预7 d后,比较4组神经损伤严重程度评分(NSS)、脑含水率、脑组织病理形态变化、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及Bax/Caspase3通路蛋白表达量变化。结果 氢气组脑组织病理变化较模型组明显减轻,病灶区和水肿区缩小,变性坏死、出血坏死及炎性浸润减少;氢气+通路激活组对脑组织病理的改善作用较氢气组有所减弱。模型组NSS、脑含水率、TNF-α、IL-1β、MDA及Bax、Caspase3蛋白表达量高于对照组,SOD水平低于对照组(P<0.05);氢气组NSS、脑含水率、TNF-α、IL-1β、MDA及Bax、Caspase3蛋白表达量低于模型组和氢气+通路激活组,SOD水平高于模型组和氢气+通路激活组(P<0.05)。结论 氢气对大鼠创伤性脑损伤具有一定改善作用,能够降低大鼠炎症和氧化应激水平,减轻脑组织病理损伤,其机制可能与氢气抗Bax/Caspase3凋亡通路有关。

水溶性苝系衍生物荧光探针识别金属离子的光物理机制计算研究

随着人们对荧光化合物电子光谱和光物理行为的深入研究,在利用荧光分子作为探针,检测各种不同体系的状态及其变化等方面都有了巨大的进展。其中,N,N′-二天冬氨酸铵盐-3,4,9,10-四羧酸二酰亚胺(PTCDA)是一种水体环境中选择性好灵敏度高的典型荧光分子探针。本文用密度泛函理论对PTCDA的光物理机制进行研究。计算了PTCDA分子在理想状态下的最优构型,电荷布居和激发光谱。根据计算结果,拟合此苝系衍生物激发态与Cu2+结合前后的吸收光谱,与Cu2+结合前后,吸收光谱峰形相似,加铜后整体吸收峰位发生了红移,有猝灭变色现象。通过与实验值的对比,计算所得分子构型合理有效,激发光谱谱峰位置切合实际。分析得出:PTCDA分子对二价铜离子有较好荧光探测活性,其光信号响应机制属于分子内电荷转移(ICT)机制。当分子接收二价铜离子时,吸收光谱谱峰位置红移,分子内电荷转移方向和强度均发生变化,既有猝灭信号,也有光的颜色变化信号,是一种具有猝灭与变色双信号的荧光探针材料,具有很大的开发潜力。所做工作只是用量子化学计算方法在分子荧光探针领域进行光物理响应机制分析的初步探索,可以为该领域提供系统而有价值的理论参考。

瑞芬太尼对过氧化氢处理脐静脉内皮细胞的抗氧化应激作用

目的以人脐静脉内皮细胞为细胞模型,建立过氧化氢处理的氧化应激模型,研究瑞芬太尼的抗氧化应激保护机制,并确定信号转导通路。方法过氧化氢0.1mol/L孵育原代培养的人脐静脉内皮细胞,建立细胞损伤模型,然后进行瑞芬太尼保护及相关通路研究。实验共分为九组:空白对照组(C组)、过氧化氢组(H1组)、过氧化氢+SP600125组(H2组)、过氧化氢+SB203580组(H3组)、过氧化氢+PD98059组(H4组);过氧化氢+瑞芬太尼组(HR1组)、过氧化氢+瑞芬太尼+SP600125组(HR2组)、过氧化氢+瑞芬太尼+SB203580组(HR3组)、过氧化氢+瑞芬太尼+PD98059组(HR4组)。H1组、H2组、H3组和H4组仅进行MAPK通路阻断实验,HR1组、HR2组、HR3组和HR4组分别加入瑞芬太尼10ng/ml保护1h。随后分别检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及Caspase-3活性,观察瑞芬太尼抗氧化应激作用并初步确定转导通路;利用RT-PCR观察瑞芬太尼10ng/ml处理前后c-Jun的表达水平,确定转导通路的信号分子。结果H1、H2、H3、H4组SOD活性明显低于C组,MDA含量明显高于C组(P<0.05);HR1组SOD活性明显高于H1组,MDA含量明显低于H1组(P<0.05);HR2组与H2组SOD活性及MDA含量差异无统计学意义;HR3组SOD活性明显高于H3组,MDA含量明显低于H3组(P<0.05);HR4组SOD活性明显高于H4组,MDA含量明显低于H4组(P<0.05)。H1、H2、H3、H4组Caspase-3活性明显高于C组(P<0.05)。H1组和HR1组c-Jun mRNA表达量明显高于C组,且HR1组明显低于H1组(P<0.05)。结论瑞芬太尼10ng/ml可激活JNK通路及其下游信号分子c-Jun,上调SOD活性,降低MDA含量,进而起到抗氧化应激作用。

消栓肠溶胶囊对慢性脑低灌注大鼠皮层神经元损伤的影响

目的观察消栓肠溶胶囊对慢性脑低灌注大鼠皮层神经元损伤的影响。方法采用随机数字表完全随机化将大鼠分为假手术组12只，模型组17只，消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组各15只。采用双侧颈总动脉永久性结扎（2VO）法制备大鼠慢性脑低灌注模型。造模后2h开始灌胃给药，消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组分别灌胃消栓肠溶胶囊混悬液420、140、47mg／kg，假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。1次／d，连续给药40d后取材。采用免疫荧光染色法检测皮层神经元特异性核蛋白（NeuN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达。采用生化法检测皮层组织GSH．PX、SOD及MDA水平。结果与模型组比较，消栓肠溶胶囊大、中剂量组大鼠皮层神经元NeuN阳性表达[（8716．86±2539．93）、（9549．31±1663．26）比（7297．05±1932．49）]增强（P〈0．05或P〈0．01）、OSH-PX水平[（7．37±1．08）U／mg、（7．77±3．26）U／mg比（3．67±2．52）U／mg]升高（P〈0．05）；消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组大鼠皮层Caspase-3阳性细胞数[（11．65±2．68）个／mm2、（14．05±4．55）个／mm2、（12．60±4．56）个，mm2比（16．80±5．41）个／mm2]减少（P〈0．05或P〈0．01）、皮层组织MDA水平[（1．44±0．40）nmol／mg、（1．96±1．13）nmol／mg、（2．12±1．19）nmol／mg比（3．19±0．98）nmol／mg]降低（P〈0．05或P〈0．01），SOD水平[（555．61±92．45）U／mg、（607．90±228．45）U／mg、（515．98±184．01）U／mg比（348．12±108．84）U／nag]升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论消栓肠溶胶囊减轻慢低脑灌注引起的神经元损伤与改善脑组织自由基代谢关系密切。