沉默RhoA基因对腺样囊性癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨RhoA基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoidcysticcarcinoma,SACC)细胞的迁移和侵袭能力的影响。方法将液氮冻存的20例SACC及正常癌旁组织研磨匀浆,分别提取总RNA和总蛋白检测RhoA的表达情况。同时构建RhoA⁃siRNA转染2个细胞株SACC⁃LM和SACC⁃83细胞进行细胞学实验,实验分为实验组(转染RhoA⁃siRNA基因),阴性对照组(转染siRNA⁃NC基因)和空白对照组。通过qRT⁃PCR检测各组细胞RhoA的mRNA表达并确定转染效率;Western blot分析各组细胞RhoA及上皮-间充质转换(epithelial⁃mesenchymal transition,EMT)标志分子(E⁃cadherin、N⁃cadherin、Vimentin)的蛋白表达;Transwell实验及划痕实验分析各组细胞侵袭和迁移能力的变化。结果与正常癌旁组织相比,RhoA mRNA和蛋白相对表达量在SACC组织中增高(P<0.01);实验组与对照组相比,RhoA mRNA的相对表达量和蛋白的相对表达量降低,E⁃cadherin蛋白的相对表达量增加,N⁃cadherin、Vimentin蛋白的相对表达量降低(P<0.01);实验组细胞侵袭和迁移能力降低(P<0.01)。结论RhoA在SACC组织中表达增高;体外沉默RhoA基因可有效抑制SACC⁃LM和SACC⁃83细胞迁移和侵袭能力,其可能通过作用EMT影响SACC细胞迁移和侵袭能力。