不同亚基组成的N型钙离子通道电学特性研究

目的:建立不同辅助亚基与功能亚基重组体瞬时表达的N型钙离子通道细胞模型,观察不同亚基组成的N型钙离子通道的电学特征,揭示不同辅助亚基对功能亚基的调节作用。方法:将N型钙离子通道亚基α1B/α2δ/β1b的cDNA分别体外转录为cRNA后,注射至去除滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞中,表达48h后使用双电极电压钳技术记录其电流。结果:向注射N型钙通道cRNA的细胞以一系列去极化刺激可诱发90%的细胞记录到内向电流。其电流可被N型钙离子通道特异性拮抗剂ω-CTXMVⅡA(1μmol/L)完全阻断。at。B单独表达时可形成功能性N型钙离子通道,通过记录到电流后而得出电流一电压曲线(Ⅰ-Ⅴ曲线),可知产生电流峰值的膜电压约为20mV(21.17±1.44)mV(n=7);α1B/β1b共表达时Ⅰ-Ⅴ曲线方向为超极化,电流达到峰值的电压为(12.35±0.88)mV(n=7,P<0.01);功能亚基与α2δ亚基共表达时,Ⅰ-Ⅴ曲线稍向正电位方向,电流达到峰值的电压为(23.25±1.25)mV(n=7,P<0.01);在α1B/α2δ/β1b共表达时,尽管有α2δ亚基存在时,β1b亚基仍显著地使Ⅰ-Ⅴ曲线向超级化方向(17.08±1.86)mV(n=7)。本实验也观察了不同重组体电流的稳态失活电压,其中α1B表达电流的半数失活电压为-12.0mV,α1B/α2δ表达电流的半数失活电压为-13.5mV,α1B/β1b表达电流的半数失活电压为-51.4mV,而α1B/α2δ/β1b共表达时电流半数失活电压为-54.9mV。结论:成功地建立不同亚基组成的N型钙离子通道在爪蟾卵母细胞的功能性表达,不同的辅助亚基与功能亚基组合体现了通道不同的动力学特性,表明N型钙通道在体内可能具有功能的多样性。这些结果为今后深入研究N型钙通道奠定了基础。

N型钙通道在大鼠福尔马林内脏炎症痛中的作用研究

目的：观察N型钙通道在福尔马林诱导的内脏炎症痛中的作用。方法：选用成年健康Wistar大鼠，随机分5组：正常对照组（N）；单纯福尔马林直肠致炎组（F）；脊髓蛛网膜下腔插管组（IT），插管内注射生理盐水组（NaCl）；插管内注射SNX-111组（SNX-111）。记录实验组大鼠的疼痛行为反应，致痛后以15min为一个时间段，共记录8个时间段，计2h，分别计算疼痛分数；福尔马林致痛后30min用原子吸收光谱分析和La^3＋阻断技术测定L6—S1-2阶段脊髓细胞内Ca^2＋含量。结果：F、IT组与NaCl组8个时间段内疼痛分数无显著性差异（P〉0．05）；IT组与F组相比也无明显差异（P〉0．05）；SNX-111组与NaCl组在致痛后75min内疼痛分数明显减少（P〈0．01或P〈0．05）。F、IT组与NaCl组在福尔马林致痛后30min脊髓细胞内Ca^2＋含量无明显变化（P〉0．05）；IT组与F组相比也无明显差异（P〉0．05）；SNX-111组与NaCl组相比Ca^2＋含量明显减少（P〈0．01）。结论：SNX-111能明显减轻福尔马林内脏炎症痛行为反应，降低脊髓内Ca^2＋含量，提示N型钙通道可能在福尔马林致内脏炎症痛感受中起重要作用。

木丹颗粒对痛性糖尿病周围神经病变大鼠钙通道基因表达的影响

目的研究木丹颗粒对痛性糖尿病周围神经病变(PDPN)大鼠钙离子通道蛋白mRNA表达的影响,探讨木丹颗粒对PDPN的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠90只,随机取30只设为正常组,其余大鼠造模,参照Sally等方法,腹腔注射链脲佐菌素STZ(53mg/kg)制作PDPN模型,4周后,用Vonfrey纤维丝测双后足机械痛阈,痛阈明显下降,与基础值相比下降50%者为PDPN造模成功。再将在成模的54只大鼠随机分为模型组,木丹颗粒组。木丹颗粒组给予10ml/(kg·d)灌胃,分别于药物治疗后第2、4、8周末,各组随机取8只大鼠,用RT-PCR技术法检测大鼠背根神经节N型钙离子通道mRNA表达。结果与正常组比,模型组N型钙离子通道mRNA表达在各时间点呈上升趋势(P<0.05);与模型组比,木丹颗粒组N型钙离子通道mRNA表达在各时间点呈下降趋势,8周时,本组N型钙离子通道mRNA表达显著减少(P<0.05)。结论木丹颗粒可以下调PDPN大鼠N型钙离子通道蛋白mRNA表达,对PDPN有一定的治疗作用。

ccd3-1改善大鼠神经病理性疼痛的作用研究

目的 观察ccd3-1对保留性坐骨神经损伤(SNI)模型所致大鼠神经病理性疼痛的效应,并初步探讨其作用机制。方法 将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和低、中、高剂量实验组,每组11只。分离大鼠坐骨神经分支,结扎并剪断腓总神经和胫神经建立SNI模型。SNI术后第7天,低、中、高剂量实验组分别鞘内给予0.1,0.3和0.9μg·kg^(-1)ccd3-1;假手术组和模型组均给予等量溶剂。用机械刺激法检测各组大鼠机械痛阈值的变化,用蛋白质印迹法检测大鼠背根神经节(DRG)细胞周期素蛋白依赖性激酶5(Cdk5)、脑衰反应调节蛋白2(CRMP2)、p-CRMP2(ser522)、N型电压门控钙离子通道(CaV2.2)总蛋白及膜蛋白的表达水平,用酶联免疫吸附法检测Cdk5激酶活性、降钙素基因相关肽(CGRP)、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化。结果 中剂量实验组、模型组和假手术组给药后2 h的机械痛阈值分别为(9.43±1.33),(2.30±0.84)和(11.37±1.75)g;Cdk5激酶活性表达分别为(217.20±37.29),(317.90±41.77)和(194.90±35.46)mU·g^(-1);p-CRMP2/CRMP2蛋白相对表达水平分别为1.03±0.18,1.82±0.34和1.07±0.12;膜/总CaV2.2蛋白水平分别为0.92±0.16,1.75±0.43和0.94±0.43;IL-6含量分别为(1 040.00±130.70),(1 388.00±116.70)和(960.9±82.06)pg·g^(-1);TNF-α含量分别为(1 812.00±292.40),(2 400.00±209.40)和(1 710.00±82.48)pg·g^(-1);CGRP含量分别为(244.80±35.70),(338.30±33.11)和(241.90±26.38)pg·g^(-1)。模型组的上述指标与假手术组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);中剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 ccd3-1对SNI模型所致的大鼠神经病理性疼痛具有明显的改善效应,其机制可能与抑制Cdk5活性,下调CRMP2磷酸化,进而降低CaV2.2膜转运有关。