黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及JNK3表达的影响

目的:观察黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及c-Jun N末端激酶3(JNK3)表达的影响。方法:四血管阻断法制备脑缺血再灌注大鼠模型。设假手术组、脑缺血再灌注模型组(模型组)、脑缺血再灌注模型+黄芪注射液组(黄芪注射液组)和脑缺血再灌注模型+黄芪注射液溶剂对照组(溶剂对照组)。除假手术组外其余3组根据再灌注时间不同又分为0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h 7个亚组。采用TUNEL法检测海马神经元凋亡,Western blotting法检测海马组织JNK3蛋白变化,real-time PCR法检测海马组织JNK3 mRNA的表达变化。结果:与假手术组比,模型组大鼠各个时点凋亡细胞数均增多(P<0.05);与模型组比,黄芪注射液组各个时点的细胞凋亡数明显减少(P<0.05),而黄芪注射液溶剂对照组各个时点的细胞凋亡数无明显变化(P>0.05)。除120 h外,模型组各时点海马组织JNK3蛋白及mRNA表达均较假手术组增加(P<0.05);与模型组相比,黄芪注射液可减弱除120 h之外的各时点JNK3蛋白及mRNA的表达(P<0.05),而黄芪注射液溶剂对照组则无明显变化(P>0.05)。结论:黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡,其抗凋亡机制可能与下调JNK3 mRNA及蛋白表达有关。

大鼠JNK3超表达细胞模型的建立及特性研究

目的构建大鼠c-JunN末端激酶3（JNK3）在SH-SY5Y细胞的超表达模型，从而研究帕金森病（PD）和阿尔茨海默病（AD）等神经退行性疾病的发生机制与JNK3的相互关系以及建立新的PD和AD治疗药物筛选平台。方法RT-PCR获得大鼠JNK3（rJNK3）基因片段．连人真核表达载体pcDNA3．1／hisC构建真核表达质粒pcDNA3．1／hisC-rJNK3。脂染法把质粒转染到SHSY5Y细胞内，经过G418筛选出稳定表达rJNK3的单克隆细胞系。Western blot检测其蛋白表达量。通过观察细胞形态、测定细胞生长率、MPP诱导的细胞凋亡以及细胞免疫荧光定位等实验对细胞系SHSY5Y-rJNK3进行细胞株特性研究。结果重组质粒pcDNA3．1／hisC-rJNK3转染SHSY5Y细胞构建成稳定表达rJNK3蛋白的细胞系SHSY5Y-rJNK3。SHSY5Y-rJNK3和SHSY5Y细胞形态上差异显著，MTT结果显示生长率也不相同，SHSY5Y-rJNK3比SHSY5Y细胞对MPP的刺激更敏感。结论JNK3蛋白在细胞内的过量表达会导致细胞形态发生一定程度的改变，同时导致细胞对外界因素诱导的凋亡更加敏感，因此在细胞内过表达rJNK3的SHSY5Y-rJNK3更能客观准确的反映JNK3作用下的神经细胞凋亡现象和本质。