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题名筛选高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株
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作者
孙静
张桂荣
王虹月
申慧
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机构
辽宁省肿瘤医院生物治疗研究中心
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出处
《中国肺癌杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期340-344,共5页
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基金
国家自然科学基金面上项目(No.81372287)
辽宁省科技攻关项目(No.2012225016)
沈阳市科技攻关项目(No.F12-193-9-15)资助~~
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文摘
背景与目的 N端截短的羧肽酶E(N-terminal truncated carboxypeptidase E,CPEΔN)是一个新的肿瘤转移相关蛋白。本研究旨在筛选高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株,为完成小鼠活体成像实验创造条件。方法构建CPEΔN的慢病毒表达载体。分别用CPEΔN慢病毒表达载体或对照慢病毒空载体转染H1299细胞,2μg/m L的嘌呤霉素加压筛选。Western blot分析CPEΔN蛋白的表达,荧光素酶报告基因实验分析荧光素酶对底物的分解作用。结果当感染倍数(multiple of infection,MOI)是20时,慢病毒对H1299细胞的转染效率可以达到80%。CPEΔN高表达H1299细胞株(H1299-CPEΔN)和对照慢病毒载体表达H1299细胞株(H1299-control)中CPEΔN蛋白的表达量为4:1。H1299-CPEΔN和H1299-control均能够有效分解荧光素酶底物,可以满足活体成像实验的需求。结论筛选出高表达CPEΔN的H1299肺癌细胞株,为活体成像实验的开展创造了条件,也为进一步解释CPEΔN促进肿瘤转移的分子机制奠定了基础。
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关键词
肺肿瘤
羧肽酶E
n端截短体
慢病毒载体
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Keywords
Lung neoplsms
n-terminal truncated carboxypeptidase E
Lentiviral vector
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分类号
R734.2
[医药卫生—肿瘤]
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