c-junN端蛋白激酶1磷酸化与糖尿病大鼠早期心肌损伤关系研究

目的探讨c-jun N端蛋白激酶1(JNK1)磷酸化与糖尿病(DM)大鼠早期心肌损伤的关系。方法2013年10月—2014年7月,80只SPF级雌性SD大鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法选取60只作为DM模型组,给予高糖高脂饮食饲养4周,一次性左下腹腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)溶液(35 mg/kg);另外20只作为对照组(A组),给予普通饮食饲养4周,一次性左下腹腹腔注射等量枸橼酸缓冲液。最终共48只大鼠造模成功,采用随机数字表法分为B组、C组、D组,各16只。C组大鼠腹腔注射SP600125,D组大鼠皮下埋置含有血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)+0.9%氯化钠溶液的植入式胶囊渗透压泵,A组、B组大鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液。饲养6周后,采用随机数字表法从4组大鼠中分别选取10只,检测大鼠心体比(H/B)、左心室质量指数(LVMI),HE染色观察心肌组织形态学改变,免疫组化SABC法检测JNK1、磷酸化JNK1(p-JNK1)、瞬时受体电位通道C亚族(TRPC)6、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)表达水平。结果 B组、C组、D组大鼠H/B大于A组,B组、D组大鼠LVMI大于A组(P<0.05);C组大鼠H/B、LVMI小于B组、D组(P<0.05)。A组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞间连接紧密,心肌纹理清晰;B组、C组、D组大鼠心肌细胞均有不同程度的肥大性改变,细胞间隙增宽,心肌细胞排列紊乱,心肌纹理欠清晰。B组、C组、D组大鼠JNK1、p-JNK1、TRPC6、collagenⅠ表达水平高于A组(P<0.05);C组大鼠JNK1、p-JNK1、TRPC6、collagenⅠ表达水平低于B组(P<0.05);D组大鼠p-JNK1、TRPC6、collagenⅠ表达水平高于B组、C组,JNK1表达水平高于C组(P<0.05)。结论高糖环境可诱导JNK1磷酸化,进而影响下游TRPC6信号表达,造成胶原蛋白沉积过多,导致心肌细胞肥大和纤维化,从而引起糖尿病心肌病的发生发展。

加味当归补血汤对TGFβ_1诱导的肾小管上皮细胞JNK_1信号转导通路的调控作用

目的：观察加味当归补血汤对转化生长因子β_1(TGFβ_1)刺激的小鼠肾小管上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶信号C-Jun N端激酶1(JNK_1)的影响,探讨该方防治肾间质纤雏化的部分细胞生物学机制。方法：取原代培养的BALB/C小鼠肾小管上皮细胞,用TGβ_1刺激24小时,不同剂量组加味当归补血汤(中药)及洛汀新含药血清干预。观察各组细胞形态学变化,PT-PCR、Westem-Blotting技术检测细胞JNK_1 mRNA的和蛋白质表达情况。结果：①TGFβ_1刺激后,肾小管上皮细胞部分形态发生变大,伸长,呈梭形,经中药和洛汀新血清干预后,细胞形态又恢复为正常的鹅卵石样形态特征,②模型组肾小管上皮细胞JNK_1 mRNA和蛋白表达水平显著上调,各浓度中药能显著下调细胞JNK_1基因和蛋白表述(P＜0．01～0．05),洛汀新仅能显著下调JNK_1蛋白水平,对JNK_1 mRNA下调不显著。结论：加味当归补血汤防治肾间质纤维化可能与调控肾小管上皮细胞TGFβ1—JNK_1信号转导途径相关。