血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原N端肽和Ⅳ型胶原辅助诊断原发性肝癌的临床意义分析

目的 分析血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)和Ⅳ型胶原(CⅣ)辅助诊断原发性肝癌的可行性和临床价值。方法 选取82例原发性肝癌患者、33例肝硬化患者及127例健康对照者作为研究对象,分别作为原发性肝癌组、肝硬化组及健康对照组。检测并比较三组血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ水平;分析血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ的受试者工作特征曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC);分析血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ的诊断界值及诊断效能。结果 原发性肝癌组血清HA 80.32(42.18, 165.50)ng/ml、LN 42.91(31.47, 74.91)ng/ml、PⅢNP 16.15(10.93, 31.33)ng/ml和CⅣ126.00(73.16, 236.60)ng/ml均显著高于健康对照组的26.83(17.25, 40.02)、30.46(25.02, 40.95)、6.38(4.93, 7.86)、48.49(40.24, 57.57)ng/ml(P<0.05);原发性肝癌组血清HA、LN、PⅢNP水平显著低于肝硬化组(P<0.05),原发性肝癌组血清CⅣ水平与肝硬化组比较无统计学差异(P>0.05);肝硬化组血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ水平均显著高于健康对照组(P<0.05)。ROC曲线及AUC分析血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ的诊断效能显示:血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ诊断原发性肝癌的AUC分别为0.8453、0.7195、0.9310和0.8842;血清HA、LN和PⅢNP鉴别原发性肝癌和肝硬化的AUC分别为0.7749、0.6208和0.6384。根据ROC曲线计算原发性肝癌和肝硬化的诊断界值,血清HA+LN+PⅢNP+CⅣ诊断原发性肝癌的灵敏度为92.7%。结论 血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ可用于原发性肝癌的辅助诊断,具有重要的临床价值。

血清透明质酸、Ⅲ型胶原N端肽、层粘蛋白检测在肝硬化诊断中的作用

目的 了解血清透明质酸 (HA)、Ⅲ型胶原N端肽 (PⅢNP)、层粘蛋白 (LN) 3项指标在肝硬化诊断中的作用。方法 采用放射免疫测定法 ,测定 2 38例肝硬化 ,6 4例肝癌伴肝硬化 ,42例肝癌 (不伴肝硬化 )病人血清HA、PⅢNP和LN。结果 肝硬化病人随着病情进展 ,HA和PⅢNP水平明显升高并有显著差异。LN亦呈升高趋势 ,但在不同程度的肝硬化病人中相差不显著。结论 在肝病尤其是肝硬化的实验诊断中 ,以上 3项细胞外间质 (ECM )指标的应用价值不同 ,HA升高最明显、最可靠。PⅢNP与肝硬化间亦有较好的相关性。LN的血清学检测对肝硬化诊断的作用在本研究中未能得到证实 ,有待于进一步探讨。

人成釉蛋白编码区cDNA的克隆和N端肽的融合表达

目的 :克隆人成釉蛋白 (Ameloblastin)编码区基因并原核表达其N端肽。方法 :抽提人牙胚总RNA ,用Oligo(dt)作引物逆转录合成人牙胚cDNAs,然后利用PCR方法 ,从cDNAs中扩增出人成釉蛋白编码区cDNA序列 ,将所得基因片段插入 pGEM -TEasy质粒载体 ,转化入大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,提取重组质粒DNA ,通过限制性酶切和核苷酸序列测定鉴定阳性克隆。将所克隆序列的 5’端 5 5 8bp的片段连入原核表达载体 pGEX - 4T1并在大肠杆菌中诱导表达 ,SDS -PAGE分析。 结果 :克隆片段测序结果与GenBank数据库收录的序列一致 ,经诱导表达见Mr为 4 6× 10 3 的融合蛋白。结论 :克隆到人成釉蛋白编码区cDNA 。

病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ-N端肽联合三氧化二砷对乳腺癌生长和转移的抑制作用

目的利用荷乳腺癌动物模型观察病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ-N端肽(NT21MP)联合三氧化二砷(As2O3)对乳腺癌生长和肺转移的抑制效应,为选择最佳的乳腺癌治疗方案提供依据。方法建立荷乳腺癌BALB/c小鼠模型,测量荷瘤小鼠的肿瘤大小,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤病理组织学变化和肺转移情况;苦味酸浸泡法计数肺结节;利用TUNEL法及免疫组化SP法检测各组原发肿瘤组织中细胞凋亡指数(AI)以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 NT21MP和As2O3均可抑制原发瘤的生长,抑制率分别为30.4%和40.0%,联合用药效果更显著(54.4%)。NT21MP和As2O3均可抑制肺转移,以两者联合用药作用更明显。与生理盐水对照组相比,NT21MP组、As2O3组及NT21MP+As2O3组增殖细胞核抗原指数明显降低(均P<0.05),凋亡指数明显升高(均P<0.05),以联合用药作用更明显(P<0.05)。结论 NT21MP和As2O3可通过抑制增殖、促进凋亡而抑制肿瘤的生长和转移,并具有协同效应。

白念珠菌烯醇化酶N端肽段ENO1-319P的原核表达和鉴定

目的制备白念珠菌烯醇化酶N端基因重组肽段ENO1-319P并检测其抗原性。方法选择与人烯醇化酶蛋白α-ENO同源性低的白念珠菌烯醇化酶肽段ENO1-319P,将其编码DNA序列克隆到表达载体pET28a(+),并在大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导带有His标签的重组肽段的表达。用SDS-PAGE电泳分析,TALON金属亲和层析柱纯化重组蛋白,其抗原性用侵袭性白念珠菌感染(ICAI)患者血清进行western blot评估。结果成功表达并纯化了目的肽段,该蛋白可与ICAI患者血清发生特异性反应。结论获得了白念珠菌烯醇化酶N端肽段ENO1-319P的基因表达工程菌株,为将此重组肽段用于制备特异性更高的抗体打下基础。

血尿Ⅰ型胶原交联C端肽和Ⅰ型胶原交联N端肽在骨关节结核转移的研究

目的探讨骨关节结核患者血尿Ⅰ型胶原交联C端肽(CTX)和Ⅰ型胶原交联N端肽(NTX)变化水平与结核杆菌骨关节转移程度的相关性。方法选取健康体检人群、肺结核患者和骨关节结核患者各60例,测定三组人群血尿CTX、NTX的含量及血清中骨源性碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原C-末端前肽(PICP)、Ⅰ型前胶原N-末端前肽(PINP)变化水平。对比观察三组人群血尿CTX、NTX的含量,血清BALP、PICP、PINP水平,血CTX、NTX和尿CTX、NTX与抗结核治疗效果的相关性。结果骨关节结核组的血CTX、NTX和尿NTX的含量与健康对照组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),而三组间尿CTX含量差异无统计学意义(P>0.05);骨关节结核患者血清中PICP、PINP明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),三组间血清BALP差异无统计学意义(P>0.05);血CTX、NTX和尿NTX、CTX与抗结核治疗效果均呈明显正相关(P<0.05)。结论骨关节结核组患者血CTX、NTX和尿NTX含量明显高于健康对照组,在排除骨质疏松症和骨肿瘤等破坏性骨相关疾病的肺结核患者早期检测血尿CTX、NTX含量可作为预测骨关节结核转移的重要参考指标。

血清转化生长因子-β1、Ⅳ型胶原、透明质酸及Ⅲ型前胶原N端肽对判断肝硬化程度的临床意义

目的探讨血清转化生长因子-β1(TGFβ1)、Ⅳ型胶原(IVC)、透明质酸(HA)及Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)的浓度与肝硬化的关系。方法以ELISA方法检测血清TGFβ1和IVC的浓度,采用放射免疫法检测血清HA和PⅢNP的浓度。结果肝硬化组血清TGFβ1、IVC、HA及PⅢNP的浓度明显高于正常组;在肝硬化组中,血清TGFβ1的浓度与其他分子之间并不存在明确的相关性,而IVC、HA和PⅢNP相互之间却存在着明显的相关性;血清TGFβ1浓度在肝硬化A、B、C级组之间并没有显著性差异;IVC、HA及PⅢNP在C级组肝纤维化患者血清中的浓度明显高于其他组,B级组肝硬化患者血清中的浓度也明显高于A级组。结论TGFβ1、IV型胶原(IVC)、透明质酸(HA)及Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)作为非创伤性肝纤维化标志物,对判断肝硬化及其发展程度具有重要意义。

实验性肝纤维化大鼠血清Ⅲ型前胶原N端肽和脯胺肽酶活力的动态观察

用CCl_4腹腔注射2至11周诱发大鼠肝纤维化,动态观察其血清Ⅲ型前胶原N端肽(sP Ⅲ NP)、脯胺肽酶活力的变化,并以半定量评分估测肝纤维化程度。sP Ⅲ NP 和脯胺肽酶活力在第2周开始增加,第6周达峰值,第9至11周保持较高水平。前6周sPⅢNP和脯胺肽酶均与肝纤维化评分呈正线性相关;在11周内,脯胺肽酶和sPⅢNP 也呈正线性相关。结果表明:sP Ⅱ NP 是反映肝纤维化的主要指标之一;脯胺肽酶活力可能是反映肝内胶原代谢加速的指标。

紫杉醇长循环纳米胶束联合vMIP-ⅡN端肽逆转乳腺癌细胞耐药的研究

目的:探讨紫杉醇长循环纳米载药胶束联合病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ(vMIP-Ⅱ)N端肽(NT21MP)对乳腺癌紫杉醇耐药细胞株(MCF-7/PR)耐药性的影响。方法:采用磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR的存活率;细胞划痕及Transwell实验检测紫杉醇纳米载药胶束联合NT21MP对乳腺癌耐药细胞迁移、侵袭能力的影响;流式细胞术分析细胞凋亡、周期;Western blotting实验检测细胞凋亡、耐药及上皮间充质转化相关蛋白水平表达。结果:相对于紫杉醇组,紫杉醇纳米胶束更有效地抑制细胞增殖、迁移和侵袭,凋亡蛋白Bax、caspase3的蛋白表达水平上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下调,且耐药相关蛋白MRP、P-gp和EMT相关蛋白Vimentin、Slug表达水平下调,E-cadherin表达上调(P<0.01);相对于紫杉醇纳米胶束组,紫杉醇纳米胶束与NT21MP联合组对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期的抑制,以及抗凋亡和逆转耐药作用更明显(P<0.01)。结论:紫杉醇纳米胶束可有效发挥逆转乳腺癌细胞耐药性的作用,且以紫杉醇纳米胶束联合多肽药物NT21MP作用更明显。

产单核细胞李斯特菌p60蛋白N端肽聚糖结合基序在枯草芽孢杆菌中的表达

目的:构建产单核细胞李斯特菌胞外蛋白p60的N端肽聚糖结合基序(p60-N)表达载体,实现其在枯草芽孢杆菌中的分泌表达。方法:将目标基因克隆到表达载体pHT43中获得重组载体pHT43-p60-N,转化枯草芽孢杆菌WB800N获得重组工程菌株WB800N/pHT43-p60-N,在此基础上考察IPTG浓度、培养基、表达时间和温度等条件对目标蛋白表达的影响。结果:p60-N蛋白可在枯草芽孢杆菌中分泌表达,与鼠李糖乳杆菌形成的革兰阳性增强基(GEM)颗粒特异性结合,具有与天然蛋白类似的生物学活性。用GB培养基,在37℃下,加入终浓度为0.2 mmol/L的IPTG诱导12~20 h,表达量提高到28 mg/L。结论:实现了p60蛋白N端基序在枯草芽孢杆菌中的分泌表达,为进一步研究以该蛋白为基础的细菌样颗粒疫苗奠定了基础。

PⅢNP在肝纤维化诊断中的作用

目的通过比较肝纤维化各期患者血清Ⅲ型胶原N端肽(PⅢNP)水平,研究血清PⅢNP在肝脏纤维化诊断中的作用。方法收集454例来该院就诊患者的肝脏穿刺检查结果和血清PⅢNP结果,比较两者相关性,同时利用ROC曲线研究PⅢNP在肝纤维化诊断中的作用。结果血清PⅢNP水平与肝脏纤维化等级相关(r=0.332,P=0.000),当血清PⅢNP取值为8.05ng/mL时具有最大诊断正确度。结论随着纤维化的进行,血清PⅢNP逐渐上升,且对肝纤维化分期有一定的诊断价值。

β-Crosslaps和PINP在绝经后妇女骨质疏松诊断中的效能评价

目的评价β胶原特殊序列(β-Crosslaps)和总骨[型前胶原N端肽(PINP)在老年妇女骨质疏松诊断中的灵敏性、特异性及准确性。方法 69例50～70岁绝经后妇女应用双能X线骨密度仪(DXA)测量腰椎和股骨骨密度(BMD),依据T评分并参照世界卫生组织标准进行诊断。根据有无骨质疏松,将69例妇女分为骨质疏松组(OP组)和健康组。测定所有妇女PINP和β-Crosslaps及雌二醇(E2)水平。采用SPSS13.0软件建立ROC曲线,并计算ROC曲线下面积,评价β-Crosslaps和PINP在老年妇女骨质疏松诊断中的灵敏性、特异性及准确性。结果用β-Crosslaps诊断绝经后老年妇女骨质疏松的最佳分界值为0.995ng/mL,敏感性为78.0%,特异性为82.1%;用PINP诊断绝经后老年妇女骨质疏松的最佳分界值为34.5 ng/mL,敏感性为65.9%,特异性为85.7%。结论β-Crosslaps和PINP在老年妇女骨质疏松诊断中有较好的灵敏性、特异性,是诊断绝经后妇女骨质疏松的较理想指标。ROC曲线下面积比较结果显示,β-Crosslaps比PINP具有更高的诊断准确性。

HA、ColⅣ、LN和PⅢNP-P在结缔组织病合并间质性肺病病情评估中的意义

目的探讨血清透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、层黏连蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP-P)在结缔组织病-间质性肺病(CTD-ILD)中的变化及意义。方法选取经临床确诊的结缔组织病患者157例,其中经肺部高分辨率CT(HRCT)确诊合并ILD的患者(CTD-ILD组)87例,未合并ILD患者(CTD-非ILD组)70例,收集2组患者的临床资料,并完善肺功能、血气分析、肺部HRCT、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、HA、ColⅣ、LN、PⅢNP-P等指标,分析HA、ColⅣ、LN和PⅢNP-P在CTD-ILD病情评估中的临床意义。结果CTD-ILD组患者血清HA、ColⅣ水平较CTD-非ILD组患者明显升高(P<0.05),2组患者ESR、CRP、PⅢNP-P和LN水平比较差异无统计学意义。CTD-ILD组血清HA水平与ESR、CRP、肺泡炎症评分和临床-影像-生理评分呈正相关(r_(s)分别为0.230、0.254、0.497和0.267,P<0.05),与动脉血氧分压[p(O2)]呈负相关(r_(s)=-0.318,P<0.01);CTD-ILD组血清ColⅣ与肺泡炎症评分呈正相关(r_(s)=0.212,P<0.05),与p(O2)呈负相关(r_(s)=-0.327,P<0.01)。结论血清HA、ColⅣ水平与CTD-ILD肺部炎症程度密切相关,对CTD-ILD有一定的预测价值,HA能作为反映CTD-ILD病情活动度的指标。

代谢性骨病患者BMD与TRAP、D-Pyr/Cr、NTX/Cr、HOP/Cr的检测及相关性研究

目的检测代谢性骨病患者跟骨骨密度(bone mineral density,BMD)与四种骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatasey,TRAP)、脱氧吡啶酚(deoxy pyridinoline,D-Pyr)、Ⅰ型胶原N端肽(N-telope tide of typeⅠcollagen,NTX)、尿羟脯氨酸(hydroxyproline,HOP)水平,探讨其相关性。方法采用定量超声法、酶联免疫法、氯氨T化学法测定82例代谢性骨病患者跟骨BMD T值、Z值以及血清TRAP、尿D-Pyr/Cr、尿NTX/Cr、尿HOP/Cr水平,多元回归分析其相关性,并以85例健康人群作对照组。结果代谢性骨病患者跟骨BMD T值、Z值、骨硬度指数下降(P<0.05),男女性T值与年龄负相关,与体质量正相关(P<0.05),而与身高、BMI相关关系不大;患病组血清TRAP、尿D-Pyr/Cr、尿NTX/Cr、尿HOP/Cr水平升高(P<0.05),男性BMD除Z值与TRAP外,T值、Z值均与TRAP、D-Pyr/Cr、NTX/Cr、HOP/Cr负相关(P<0.05),女性T值、Z值与D-Pyr/Cr、NTX/Cr负相关(P<0.05)。结论代谢性骨病患者跟骨BMD下降,骨吸收标志物TRAP、D-PYR、NTX、HOP水平升高,两者存在一定相关性,联合检测可较准确评估患者的骨量变化及病情程度。

血清HA、PⅢNP、LN检测对肺纤维化的诊断价值

目的探讨血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)及层粘连蛋白(LN)在肺纤维化诊断中的意义。方法采用放射免疫分析法(RIA)测定46例肺纤维化患者、30例肺炎患者、30例正常对照组血清中HA、PⅢNP、LN水平。结果肺纤维化患者血清中HA、PⅢNP、LN含量显著高于正常对照组及肺炎组(P<0.01和P<0.05);肺炎组与正常对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论检测血清HA、PⅢNP、LN水平,可作为肺纤维化较好的诊断指标。

老年急性心肌梗死PCI术无复流患者强化阿托伐他汀治疗临床分析

目的观察强化阿托伐他汀治疗老年急性ST段抬高型心肌梗死(STEAMI)急诊行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)并出现无复流患者血管内皮的保护作用及安全性。方法选择2009年12月至2013年1月在河北大学附属医院心内科住院行急诊PCI并发生无复流的老年STEAMI患者48例,随机分为对照组及治疗组,每组各24例。治疗组患者口服阿托伐他汀80 mg 1/日,对照组给予阿托伐他汀20 mg口服。连续治疗10 d。比较两组患者治疗前后血脂、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管性血友病因子(v WF)的水平及不良反应。结果与治疗前比较,对照组和治疗组连续治疗10 d后,总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均下降,差异具有统计学意义(P均<0.05);v WF下降,差异具有显著统计学意义(P均<0.01)。与对照组治疗后比较,治疗组治疗后LDL-C[(3.41±0.43)mmol/L vs.(2.14±0.38)mmol/L]、MMP-9[(150.31±12.18)ng/m L vs.(115.41±13.62)ng/m L]、v WF[(76.9±7.03)%vs.(48.31±6.9)%]水平下降(P均<0.05),PⅢNP[(114.71±13.23)ng/m L vs.(64.26±11.43)ng/m L]下降,差异具有显著统计学意义(P均<0.01)。两组治疗后心肌酶水平较治疗前均下降,差异具有统计学意义(P均<0.05)。治疗组有3例患者出现胃肠功能紊乱症状;对照组没有患者出现腹胀、消化不良等症状。结论急诊PCI治疗出现无复流老年患者强化阿托伐他汀治疗可明显改善患者血脂、PⅢNP、MMP-9、v WF的水平,保护血管内皮并抑制炎症反应。

血清肝纤维化四项检查在肝硬化诊断中的价值

长期以来,肝纤维化的诊断依赖肝活检,既有创伤性又无法准确判断肝纤维化的发展程度。肝纤维化四项检查包括：透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原N端肽（PⅢNP）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）,本文通过对比分析,探讨了其在肝硬化诊断中的价值,报道如下。

长效奥曲肽影响大鼠肝纤维化形成的研究

目的:观察和探讨长效奥曲肽对四氯化碳(CCl4)诱发的大鼠肝纤维化的影响及机制。方法:SD大鼠40只,随机分为正常对照组(n=8)、肝纤维化组(n=16)、长效奥曲肽组(n=16)。通过40%CCl4皮下注射(3ml/kg)诱导建立大鼠肝纤维化模型,长效奥曲肽组同时给与长效奥曲肽(善龙,0.8mg/kg)肌肉注射,每28天给药1次。8周后观察大鼠肝脏大体形态、肝脏重量/体重比和组织学改变;用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)含量。结果:正常对照组大鼠肝脏大体形态和组织学无异常改变。肝纤维化组及长效奥曲肽组大鼠肝脏质地变硬,表面明显结节,组织学见肝细胞脂肪变性、坏死、纤维组织增生,假小叶形成等,但后者组织学损害显著轻于前者(P<0.05)。肝纤维化组及长效奥曲肽组肝脏重量/体重比均明显高于正常对照组(P<0.01),但长效奥曲肽组低于肝纤维化组(P<0.05)。正常对照组大鼠血清HA、PⅢNP含量分别为(18.5±3.8)ng/ml、(8.2±3.4)ng/ml,肝纤维化组大鼠血清HA、PⅢNP含量分别为(179.3±33.5)ng/ml,(59.6±15.6)ng/ml。高于正常对照组(P<0.01)。长效奥曲肽组大鼠血清HA、PⅢNP含量分别为(152.4±36.1)ng/ml,(41.2±13.4)ng/ml,显著高于正常对照组(P<0.01),但低于肝纤维化组(HAP<0.05;PⅢNPP<0.01)。结论:长效奥曲肽能减缓大鼠肝纤维化形成。

血清H-FABP与风湿性心脏病患者心功能的关系分析

目的探讨血清心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)与风湿性心脏病(RHD)患者心功能的相关关系。方法选取2016年1月至2018年1月于阜阳市人民医院收治的81例RHD患者为实验组,同期选取50例常规体检的心功能正常者作为对照组,比较两组受试者及不同美国纽约心脏病协会心功能分级RHD患者的血清H-FABP、B型钠尿肽前体N端肽(NT-proBNP)、肌钙蛋白T(cTnT)水平及左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF),并分析RHD患者血清H-FABP与以上各指标的相关性。结果实验组血清NT-proBNP、cTnT、H-FABP水平及LVEDD均较对照组高,而LVEF比对照组低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。RHD患者中NT-proBNP、cTnT、H-FABP、LVEDD水平随着心功能分级的增加而升高,而LVEF水平则相反,组间比较差异有统计学意义(P均<0.05)。血清H-FABP与NT-proBNP、cTnT、LVEDD及NYHY心功能分级呈正相关(r=0.721,0.672,0.641,0.714,P<0.05),而与LVEF呈负相关(r=-0.613,P<0.05)。结论 RHD患者血清H-FABP水平异常升高,且与患者心功能成负相关,临床可以通过检测H-FABP水平评估患者心功能。