应用巢式PCR法克隆N端部分缺失的IκBα基因

目的 克隆中国人N端部分缺失的IκBα基因 ,为进一步应用其进行抗肿瘤基因治疗研究打下基础。方法 从中国人外周血中分离单核细胞 ,采用多聚赖氨酸贴壁刺激 0 .5h后提取总RNA。应用逆转录PCR法 ,以自行设计的引物扩增全序IκBα基因 ,应用巢式PCR法扩增N端部分缺失的IκBα基因 ,用TA克隆技术将目的基因连接到pGEM T质粒载体中 ,进行测序并与已知IκBα序列进行同源性分析。结果 测序结果表明我们所克隆的目的基因 ,其基因序列与GenBank中人IκBα基因序列仅有 5个碱基不同但所编码氨基酸仅 1个发生改变。结论 已成功克隆了中国人N端部分缺失的IκBα基因 ,为进一步应用N端部分缺失的IκBα基因进行抗肿瘤基因治疗研究打下了基础。