猪流行性腹泻病毒N蛋白的原核表达与鉴定

为了制备猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白,通过PCR扩增获得PEDV的N基因片段与载体pET-32a(+)相连构建原核表达载体pET-32a(+)-PEDV-N。将构建成功的质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG(1 mmol/mL)37℃诱导表达后,采用SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况,对影响重组蛋白表达的诱导时间进行分析。利用Western blot方法分别检测重组蛋白的免疫原性。结果表明:PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳检测发现条带位置正确,重组质粒pET-32a(+)-PEDV-N测序正确,含有重组质粒pET-32a(+)-PEDV-N的表达菌株BL21(DE3)在诱导表达后,经SDS-PAGE检测证明有重组蛋白表达,利用Western blot结果表明该重组蛋白与PEDV多克隆抗体发生特异性反应,说明成功制备了PEDV-N重组蛋白。