miR-485-5p靶向氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关键。多项研究表明,微RNA(microRNAs,miRNAs)的异常表达与肿瘤的发生相关。已有报道显示,miRNA-485-5p(miR-485-5p)在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但其在前列腺癌中的作用在较大程度上仍未可知。本研究旨在探究miR-485-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用与机制。生物信息学预测和qRT-PCR检测发现,miR-485-5p在前列腺癌中表达下调。平板克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验证明,转染miR-485-5p模拟物显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。生物信息学预测、双荧光素酶报告法、Western印迹和qRT-PCR检测证实,氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase,OGT)是miR-485-5p的一个下游直接靶标。进一步的分析和检测显示,OGT在前列腺癌中呈高表达,转染OGT的siRNA能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,同时有效逆转转染miR-485-5p抑制物所发挥的促癌作用。综上所述,miR-485-5p可以通过负向调控OGT进而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释miR-485-5p在前列腺癌中发生发展的作用和机制,可为寻找前列腺癌的治疗靶点提供实验依据。

结核病患者N-乙酰基转移酶2基因型与异烟肼血药浓度关系的研究

目的探讨结核病患者N-乙酰基转移酶2(NAT2)基因型与异烟肼(INH)血药浓度的关联性,为临床根据NAT2基因分型指导合理INH用药提供依据。方法应用PCR结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对121例住院结核病患者NAT2基因型分布进行检测,同时应用液相色谱-串联质谱分析仪(LC/MS-MS)检测结核病患者服药2h后血浆INH浓度。所获数据采用单因素方差分析检测组间差异,进而采用Tamhane’s T2法进行两两比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 121例结核病患者NAT2基因型中快速乙酰化型(RA,野生型)有55例,INH血药浓度为(1.86±1.28)μg/ml;慢乙酰化型(SA,纯合突变型)有17例,INH血药浓度为(5.86±2.10)μg/ml;中间乙酰化型(IA,杂合突变型)有49例,INH血药浓度(3.49±2.60)μg/ml。住院结核病患者整体INH血药浓度均值为(3.08±2.42)μg/ml。三型INH血药浓度比较,差异均具有显著统计学意义(RA与IA,P=0.001;RA与SA,P=0.002;IA与SA,P=0.000)。结论不同NAT2基因型人群对INH的代谢能力差异存在显著统计学意义,NAT2基因型分析对结核病患者INH用药具有重要指导意义。

新型高抗草甘膦N-乙酰转移酶基因的分离及其在大肠杆菌中的表达

利用草甘膦极端污染土壤总DNA,构建了元基因组文库,筛选到一个高抗草甘膦的N-乙酰转移酶（N-acetyltransferase,GAT）基因,并利用原核表达系统对该基因进行了功能鉴定,发现其在大肠杆菌BL21中能耐受高达300 mM的草甘膦.研究结果为进行N-乙酰化途径高抗草甘膦机理研究和新型高抗草甘膦转基因作物的开发提供了理论基础.

南方红豆杉10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶基因的克隆与生物信息学分析

对中国重要药用植物南方红豆杉中的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因进行分离、测序以及生物信息学分析。根据GenBank中已登录的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从南方红豆杉叶片中克隆了1个DBAT基因Tc-DBAT的全长cDNA。结果显示,Tc-DBAT cDNA含有1个1 323 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码440个氨基酸,对应基因组序列含有1个内含子。Tc-DBAT蛋白N端含有5个N-酰基化作用位点和2个保守的N-糖基化作用位点,具有1个保守的B ig-1结构域,多个重要的磷酸化位点以及1个类似钙结合蛋白重复结构。序列同源性比较、系统发生分析以及蛋白质高级结构预测均表明,Tc-DBAT属于转移酶超家族(transferase superfamily),是一个具有乙酰转移酶活性的功能蛋白,能够催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)10位的乙酰化,从而生成抗癌新药紫杉醇生物合成途径中的最后一个双萜中间体——巴卡亭Ⅲ。有望通过成功克隆和鉴定紫杉醇生物合成途径中的关键酶基因达到提高其半合成前体巴卡亭Ⅲ产量的目的,并且为进一步利用组合表达系统商业化生产紫杉醇奠定基础。

N-乙酰转移酶基因多态性与胃癌易感性

目的探讨N-乙酰转移酶2（NAT2）基因多态性与胃癌易感性的关系.方法采用1：1配对病例-对照研究方法和PCR技术,检测121例原发性胃癌患者和相应对照的NAT2基因型,分析其NAT2基因突变位点及表型与胃癌遗传易感性的关系.结果 NAT2 M1位点的突变增加胃癌的发病危险,OR=11.111（95%CI=4.510～27.377）.NAT2 M2、NAT2 M3、NAT2表型在胃癌发生中的作用差异均无统计学意义.结论 NAT2 M位点的突变与胃癌易感性增加有关.

人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.

荧光探针熔解曲线法检测结核患者N-乙酰基转移酶2基因型分布的应用评价

目的 评价荧光探针熔解曲线法检测结核病患者芳基胺N-乙酰基转移酶2（arylamine N-acetyltransferases 2,NAT2）基因多态性的性能。方法 选取于2015—2016年到福州肺科医院和北京胸科医院确诊的初治结核病患者作为研究对象,分别为371例和355例。收集研究对象外周血标本。应用荧光探针熔解曲线法[分析NAT2基因rs1801280（341T→G）、rs1799929（481C→T）、rs1799930（590G→A）和rs1799931（857G→A）等4个单核苷酸多态性（SNP）]和DNA测序分析法[分析NAT2基因的rs1801279 （191G→A）、rs1041983 （282C→T）、rs1801280（341T→C）、rs1799929 （481C→T）、rs1799930 （590G→A）、rs1208 （803A→G）和1799931 （857G→A）的7个SNP位点]对研究对象进行NAT2基因型分析,并根据NAT2基因型进行NAT2代谢类型的推断分析。结果 荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点与DNA测序分析法分析7个SNP位点推断NAT2代谢类型的结果完全一致。荧光探针熔解曲线法从DNA制备、PCR扩增和熔解曲线分析的整个检测过程需要2.5 h。共检测到NAT2 ＊4/＊4、NAT2 ＊5/＊4、NAT2 ＊6/＊4、NAT2 ＊7/＊4、NAT2 ＊5/＊11、NAT2 ＊6/＊11、NAT2 ＊7/＊11、NAT2 ＊5/＊6、NAT2 ＊6/＊7、NAT2 ＊5/＊5、NAT2 ＊6/＊6、NAT2 ＊7/＊7、NAT2 ＊5/＊7等13种NAT2基因型。福州肺科医院的结核病患者NAT2基因快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占37.20%（138/371）、42.32%（157/371）和20.49%（76/371）;北京胸科医院的结核病患者中,快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占27.89%（99/355）、54.65%（194/355）、17.46%（62/355）;两组人群的乙酰化类型分布差异有统计学意义（χ2=11.37,P=0.003）。所有的快乙酰化代谢人群均携带NAT2 ＊4/＊4基因型[100.00%（237/237）],而慢乙酰化代谢人群主要携带NAT2 ＊6和NAT2 ＊7的单倍型[90.22% （249/276）]。结论 荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点检测NAT2基因型具有结果判读简便、准确、快速的优点,适用于中国地区人群的NAT2基因型的检测。

采用TOPO-TA克隆法建立多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA文库

目的:通过实验方法建立多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA文库,欲以此为基础对人体不同肿瘤细胞中的该基因家族进行表达谱分析。方法:主要为PCR和TOPO-TA克隆技术。结果:通过电泳图谱初步证实了这一家族的不同成员均已得到有效的扩增,并获得了相应的片段库。结论:多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA被成功扩增,并建立了该基因家族的cDNA文库。

大鼠松果体N-乙酰转移酶基因的昼夜节律性表达

探讨12 h光照、12 h黑暗交替(LD)光制下松果体N-乙酰转移酶(NAT)基因的昼夜节律性表达。SD大鼠在LD光制下饲养4周后,在一昼夜内每隔4h采集一组松果体组织,提取总RNA,进行竞争性定量RT-PCR,测定不同昼夜时点(ZT)样品中NAT基因mRNA的相对表达量。用余弦函数获取节律参数,并经振幅检验分析是否存在昼夜节律。结果表明松果体NAT基因mRNA表达呈现昼夜节律性振荡(P<0.05),峰值(mRNA水平为1.07±0.23)和谷值(mRNA水平为0.61±0.15)分别位于ZT16和ZT4,峰值相位-241.80±14.94,振幅0.23±0.13,中值0.84±0.11。证实LD光制下松果体NAT基因存在明显的昼低夜高节律性表达。

荧光探针熔解曲线法检测结核患者N-乙酰基转移酶2基因型分布的应用评价

目的评价荧光探针熔解曲线法检测结核病患者芳基胺N-乙酰基转移酶2（arylamine N-acetyltransfcrases 2，NAT2）基因多态性的性能。方法选取于2015—2016年到福州肺科医院和北京胸科医院确诊的初治结核病患者作为研究对象，分别为371例和355例。收集研究对象外周血标本。应用荧光探针熔解曲线法[分析NAT2基因rs1801280（341T→G）、rs1799929（481C→T）、rs1799930（590G→A）和rs1799931（857G→A）等4个单核苷酸多态性（sNP）]和DNA测序分析法[分析NAT2基因的rs1801279（191G→A）、rs1041983（282C→T）、rs1801280（341T→C）、rs1799929（481C→T）、rs1799930（590G→A）、rs1208（803A→G）和1799931（857G→A）的7个SNP位点]对研究对象进行NAT2基因型分析，并根据NAT2基因型进行NAT2代谢类型的推断分析。结果荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点与DNA测序分析法分析7个SNP位点推断NAT2代谢类型的结果完全一致。荧光探针熔解曲线法从DNA制备、PCR扩增和熔解曲线分析的整个检测过程需要2．5h。共检测到NAT2＊4／＊4、NAT2＊5／＊4、NAT2＊6／＊4、NAT2＊7／＊4、NAT2＊5／＊11、NAT2＊6／＊11、NAT2＊7／＊11、NAT2＊5／＊6、NAT2＊6／＊7、NAT2＊5／＊5、NAT2＊6／＊6、NAT2＊7／＊7、NAT2＊5／＊7等13种NAT2基因型。福州肺科医院的结核病患者NAT2基因快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占37．20％（138／371）、42．32％（157／371）和20．49％（76／371）；北京胸科医院的结核病患者中，快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占27．89％（99／355）、54．65％（194／355）、17．46％（62／355）；两组人群的乙酰化类型分布差异有统计学意义（χ^2=11．37，P=0．003o所有的快乙酰化代谢人群均携带NAT2＊4／＊4基因型[100．00％（237／237）]，而慢乙酰化代谢人群主要携带NAT2＊6和NAT2＊7的单倍型[90．22％（249／276）]。结论荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点检测NAT2基因型具有结果判读简便、准确、快速的优点，适用于中国地区人群的NAT2基因型的检测。

关于N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA扩增的初步研究

目的 通过实验方法扩增N 乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA。方法 主要通过PCR技术 ,用各种N 乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA的特异性引物进行扩增并结合电泳技术 ,用不同的限制性内切酶进行酶切鉴定。结果 通过电泳图谱和酶切图谱初步证实了这一家族的不同成员均已得到有效的扩增。结论 成功扩增了N 乙酰氨基半乳糖转移酶基因家族cDNA ,并为其文库的建立打下良好的基础。

X连锁基因O连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)在胎儿性别偏倚的妊娠期相关疾病中的研究进展

男性和女性胎儿对多种疾病(包括认知障碍、代谢性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病等)的敏感性不同。男性胎儿对产前应激更为敏感,如妊娠期压力、母体感染和药物暴露,这些应激会给男性胎儿带来代谢、认知和行为缺陷,并且通常表现出比女性胎儿更严重的疾病结果,也会增加疾病表现的终生风险。X连锁基因O连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)被鉴定为性别特异性胎盘生物标记物,可能是疾病中性别差异的驱动因素。本文就胎盘OGT在胎儿性别差异而造成的妊娠相关疾病发展差异相关的研究进展综述。

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2在不同肿瘤组织中mRNA的表达差异

目的 :观察三种不同肿瘤组织中ppGalNAc T2的表达差异 ;方法 :本文采用RT PCR方法从mRNA水平上研究其表达 ,同时在同一反应管中进行内对照 β 微球蛋白的扩增以进行半定量分析 ;结果 :ppGalNAc T2在不同肿瘤组织中 ,其在肿瘤部分、癌旁部分与正常部分的表达水平不具有一致性 ;结论 :ppGalNAc T2具有组织特异性 ;不同肿瘤组织的糖基转移酶作为肿瘤标志基因有待进一步的研究。

N-乙酰转移酶2基因多态性与骨肉瘤易感性的关系

目的:研究N-乙酰转移酶2(NAT2)基因多态性与骨肉瘤易感性的关系。方法:取骨肉瘤患者血清标本,采用PCR-RFLP检测NAT2基因的多态性,只观察M1、M2、M3 3个突变基因,观察NAT2基因型和等位基因的分布、慢乙酰化和快速乙酰化基因型在群体之间的分布,分析NAT2基因多态性和骨肉瘤临床特征之间的关系。结果:2010年1月至2015年9月期间共纳入126例骨肉瘤患者作为实验组,同时期的健康体检者119例作为对照组。在对照组中,NAT2基因型出现的频率(纯合野生型WT/WT,杂合突变体WT/MX,纯合突变体Mx/MX)分别为30.95%、50.79%、18.25%;在实验组分别为47.06%、46.22%、6.72%。两组的频率差异有统计学意义(P<0.05)。NAT2快速乙酰化基因型者患骨肉瘤的风险是慢乙酰化基因型者的1.782倍(P<0.05)。与快速乙酰化基因型骨肉瘤患者相比,慢速乙酰化基因型患者的肿瘤体积较小(P=0.008),肿瘤分化程度较低(P=0.011),更不易发生远处转移(P=0.001)。结论 :NAT2基因多态性的快速乙酰化基因型可能是骨肉瘤的一个危险因素。

全反式维甲酸抑制反义N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V转染的SMMC7721肝癌细胞蛋白激酶B的表达

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导反义N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V转染的SMMC 7721肝癌细胞(简称AS—GnT—V/7721)凋亡机制。方法用Hoechst染色检测ATRA诱导细胞凋亡情况,并应用Northern Blot和Western Blot检测ATRA诱导AS—GnT-V/ 7721细胞凋亡过程中bcl-2及蛋白激酶B(PKB)的表达。结果Hoechst 33258染色结果显示ATRA处理AS—GnT—V/7721细胞24h后,细胞发生凋亡。Western Blot检测发现,ATRA处理AS-GnT—V/7721细胞不改变bcl-2的表达,但抑制PKB蛋白表达。ATRA处理AS-GnT—V/7721细胞24h后PKB蛋白即明显降低(约为原来的32％),处理48h后PKB蛋白几乎检测不到。Northern blot检测发现,ATRA处理AS-GnT-V/7721细胞12h,PKB mRNA即有所下降,24h时PKB mRNA约为原来的48％,处理48h,PKB mRNA减少至原来的15％。而ATRA处理对照细胞,bcl-2及PKB表达均不变。结论ATRA诱导AS-GnT-V/7721细胞凋亡过程中PKB的表达下降,而bcl-2表达不变。提示,ATRA诱导AS—GnT-V/7721细胞凋亡可能是由于抑制PKB表达,而与bcl-2无关。

不同白血病细胞N-乙酰氨基半乳糖转移酶Ⅰ-Ⅶ mRNA的表达

目的 从mRNA水平观察不同白血病细胞中ppGalNAcT1 T7的表达情况。方法 采用RT PCR技术 ,检测ppGalN AcT1 T7在NB4和K5 6 2细胞株中mRNA水平的表达。结果 K5 6 2细胞中ppGalNAcT2、T4、T5、T7和NB4细胞中ppGalNAcT1、T2、T3、T4、T7有不同程度表达。结论 不同白血病细胞中ppGaINAcT1 T7的表达情况不一样 ,两者之间的相关性有待进一步的研究。

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的原核表达、纯化及酶活检测

目的:以人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)为研究对象,利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌(E.Coli)BL21中原核表达其编码序列,并对表达产物进行纯化、复性及酶活检测。方法:首先利用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3,形成重组表达质粒pGEX-5X-3/T2。重组质粒转化大肠杆菌DH5α,测序鉴定后转化BL21,异丙基硫代半乳糖(IPTG)诱导后,表达产物为主要以包涵体形式存在的融合蛋白。对其复性后用谷胱甘肽-琼脂糖(G lutath ione-Sepharose)4B亲和层析柱进行纯化。然后根据ppGalNAc-T2的催化功能,设计底物,建立酶促反应体系,利用高效液相色谱(HPLC)进行酶活分析。结果:成功构建了原核表达重组载体pGEX-5X-3/T2,通过蛋白质电泳检测到分子量约为90 kD的融合蛋白的表达,利用亲和层析得到纯化的酶蛋白,并经W estern印迹得以验证。反应后体系上柱洗脱后出现酶促反应的产物洗脱峰。结论:成功构建了重组表达载体pGEX-5X-3/T2,ppGalNAc-T2全长编码序列被成功表达、纯化及复性,检测到具有酶活性。

N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因的克隆与表达

目的:为了获得N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因表达的两重组菌。方法:以大肠杆菌C600染色体DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),然后将nanA基因片段组入到pDR540载体的Ptac启动子下游,所得重组菌E.coliDH5α/pRY3的nanA基因在tac启动子控制下呈组成型表达。结果:DNA序列测定证明,该基因的开放阅读框(open read ing frame,ORF)大小为894 bp,编码298个氨基酸组成的酶蛋白;SDS-PAGE显示,纯化的目的蛋白为33 kD的单一条带。以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),在得到的转化子E.coliBL21(DE3)/pRY1中,nanA基因受lac启动子控制,无需IPTG或乳糖所诱导。在N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶固定化酶的催化下合成N-乙酰-D-神经氨酸的合成效率为78.3%,结晶回收率为90.2%,总回收率为70.6%。全波长扫描分析表明:本实验室结晶品与Sigma公司商品的全波长扫描图谱有相同的特征。结论:所构建的诱导型产酶菌株E.coliBL21(DE3)/pRY1和组成型表达菌株E.coliDH5α/pRY3都可较多量的产酶。合成的结晶品具有N-乙酰-D-神经氨酸的特征。

乙酰转移酶基因NAA10的生物学功能及其在肿瘤中的作用

N端乙酰转移酶A(N-acetyltransferase A,NatA)复合体是真核生物最主要的N端氨基酸α位乙酰转移酶,N端α位乙酰转移酶10基因(N-α-acetyltransferase 10,NAA10)编码的N端α位乙酰转移酶10蛋白(N-α-acetyltransferase 10 protein,Naa10p)是NatA的催化亚基.Naa10p具备新生蛋白质N端氨基酸α位乙酰化活性、成熟蛋白质Lys残基ε位乙酰化活性以及对部分转录因子的协同调节作用.Naa10p能够通过调节细胞周期促进细胞增殖,通过调节雷帕霉素靶蛋白(mechanistic target of rapamycin,mTOR)通路促进细胞自噬,并通过多种不同的分子信号通路抑制细胞运动能力.根据乙酰化底物的不同,Naa10p还在细胞凋亡的调控中起双重作用.Naa10p参与的生物学过程还涉及血管生成和神经发育等.Naa10p在多种癌症组织中呈过表达,但其预后意义随肿瘤不同而有较大差别.对Naa10p的生理生化研究必将使我们对细胞的生理病理学过程及其机制的了解更加深入全面.本文将从蛋白质结构、机制功能及临床意义等不同角度系统地阐述NAA10的研究现状与进展.

N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶基因的克隆及表达

N-乙酰-D-葡萄糖胺-2-差向异构酶(AGE)是合成N-乙酰-D-神经氨酸(Neu5Ac)的关键酶。该酶的高效表达是提高全细胞细胞催化法合成Neu5Ac的有效途径。根据集胞藻(Synechocystis sp. PCC 6803)AGE编码基因slr1975序列信息和大肠杆菌密码子偏好性,优化密码子并人工合成目的基因序列slr975-co。将该基因克隆到表达载体pET28a中,构建了重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28-slr并实现了目的基因的诱导表达。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白质的相对分子质量在43 000左右,与预期大小一致,纯化产物蛋白质质量浓度约为1.7 g/L。重组AGE的最适反应温度为42℃,最适反应pH为6.0。AGE对GlcNAc、ManNAc的Km值分别为39.0、46.5 mmol/L。以分别表达AGE和N-乙酰神经氨酸裂合酶(NanA)的重组大肠杆菌作为催化剂,以N-乙酰-D-葡萄糖胺为底物,实现了N-乙酰-D-神经氨酸的全细胞催化合成。结果表明,对AGE密码子进行优化实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达,为全细胞催化法高效合成N-乙酰-D-神经氨酸奠定了坚实的基础。