O-羧甲基N-三甲基壳聚糖季铵盐的合成及其结构表征

利用壳聚糖分子中氨基的特性,与过量的碘甲烷进行彻底的甲基化反应合成水溶性的壳聚糖三甲基季铵盐,经纯化后,将壳聚糖三甲基季铵盐与过量的一氯乙酸反应合成一种新型的两亲性化合物O-羧甲基-N-三甲基壳聚糖季铵盐(O-C arboxym ethy l-N-triM ethy lCh itosan Q uaternary amm on ium sa lt,CM TM C),经纯化后进行了结构表征.

N-三甲基壳聚糖透皮吸收促进作用的初步研究

目的考察N-三甲基壳聚糖(-Ntrimethyl chitosan,TMC)作为透皮吸收促进剂的作用,并对其作用机制做初步研究。方法用壳聚糖及碘甲烷为主要原料,合成季铵化程度为60%的TMC,即TMC60,通过1H-NMR确定其季铵化程度。应用衰减全反射傅立叶红外光谱(ATR-FTIR)探讨TMC60对角质层角蛋白的作用。以月桂氮酮为阳性对照,睾酮为模型药物,考察TMC60对离体皮肤的透皮作用。结果经1H-NMR确定合成得到的TMC60季铵化程度为67.2%。鼠角质层经TMC60处理后,角蛋白的酰胺吸收峰Ⅱ带的峰位从1 538.7 cm-1向低波数位移到1 536.8 cm-1。结合用去卷积方法对酰胺吸收峰Ⅱ进行处理,结果表明,TMC60可使部分角蛋白从α-螺旋型结构向β-折叠型结构和无规则卷曲型结构转变。体外透皮实验中,TMC60组的累积透过量、稳态渗透速率显著大于空白组和月桂氮酮组(P均小于0.05)。结论TMC60有较好的透皮吸收作用,其作用机制与影响皮肤角质层角蛋白结构有关。

N-三甲基壳聚糖对胰岛素液体栓剂直肠吸收的促进作用研究

目的研究不同季铵化程度及其不同浓度的N-三甲基壳聚糖(-Ntrimethyl chitosan,TMC)对胰岛素液体栓剂药物直肠吸收的影响。方法以壳聚糖及碘甲烷为主要原料合成两种季铵化程度的TMC,即TMC40和TMC60。以泊洛沙姆407(P407)和泊洛沙姆188(P188)(15%∶20%)为基质,分别以浓度为0,0.1%和0.5%的TMC40或TMC60作为黏膜吸收促进剂制备胰岛素液体栓剂。以2 g.kg-1(相当于胰岛素200 U.kg-1)给药剂量直肠给糖尿病小鼠不同的胰岛素液体栓剂,用血糖试纸测定给药后糖尿病小鼠不同时间点的血糖值,计算出各制剂的AUC0→4,进行比较。结果未加TMC的胰岛素液体栓剂没有降血糖的作用;加入了TMC的液体栓剂均能显著降低糖尿病小鼠的血糖水平,且随着TMC浓度的增加,促进作用增强,而当浓度相同时,TMC60的作用大于TMC40,其中含有0.5%TMC60的胰岛素液体栓剂降血糖的作用最好,在1.5 h时血糖降至最低,为初始水平的(19.6±6.5)%,其AUC0→4为(108.2±4.6)。结论TMC可以促进胰岛素的直肠吸收,且随着其季铵化程度的增加,其促吸收作用增强。

N-三甲基壳聚糖对尼美舒利脂质体的影响及其体外透皮考察

目的:研究浓度为1.0%,不同季铵化程度的N-三甲基壳聚糖盐酸盐(N-trimethyl chitosan chloride,TMC)对尼美舒利(nimesulide,NIM)脂质体体外主要性质的影响,并进一步考察其凝胶体系体外透皮的效果。方法:以壳聚糖为原料,采用四步合成法合成不同季铵化程度的TMC,以1H-NMR测定其季铵化程度;并采用薄膜分散法制备分别用TMC包覆或混合的NIM脂质体,使用改良的Franz扩散池考察其凝胶体外透皮效果。结果:合成得到不同季铵化程度的TMC,即TMC20(25%),TMC40(38%)和TMC60(59%);用TMC包覆或混合NIM脂质体,均导致其包封率降低;随着TMC季铵化程度的增加,两者的Zeta电位和平均粒径均逐渐减小,但是前者均大于后者;同时两者均具有一定的缓、控释作用,但后者更有效。分别用TMC包覆与混合NIM脂质体的经皮渗透速率之间差异均具有显著性(P<0.01),大小依次为普通脂质体>TMC60包覆脂质体>TMC40包覆脂质体>TMC20包覆脂质体>TMC60混合脂质体>TMC40混合脂质体>TMC20混合脂质体。结论:使用TMC包覆或混合NIM脂质体,可以不同程度地改变NIM脂质体的性质,且作用大小与TMC季铵化程度有关。

不同季铵化程度的N-三甲基壳聚糖透皮吸收促进作用的研究

目的研究不同季铵化程度的N-三甲基壳聚糖(N-trimethylchitosan,TMC)对药物透皮吸收的促进作用,以判断季铵化程度对TMC发挥透皮吸收促进作用的影响。方法以壳聚糖及碘甲烷为主要原料,合成不同取代度的TMC,即TMC40和TMC60,通过1H-NMR确定其季铵化程度。以睾酮为模型药物,分别以溶液法和凝胶法考察两种不同季铵化程度TMC的透皮吸收促进作用。结果经1H-NMR确定合成得到的TMC40,TMC60季铵化程度分别为38·8%和67·2%。溶液法及凝胶法两种方法的体外透皮实验结果均表明TMC60组、TMC40组及空白组的累积透过率、稳态透皮速率的作用大小顺序为TMC60组>TMC40组>空白组。结论TMC60的透皮促进作用大于TMC40,表明在一定范围内随着季铵化程度的增加,TMC透皮吸收促进作用增大。

N-三甲基壳聚糖盐酸盐包覆胰岛素脂质体的处方与工艺优化

目的 :研究制剂因素对N 三甲基壳聚糖盐酸盐包覆胰岛素脂质体降血糖作用的影响。方法 :采用逆相蒸发法制备胰岛素脂质体 ,用N 三甲基壳聚糖盐酸盐对胰岛素脂质体进行包覆。以小鼠口服胰岛素脂质体降血糖效果作为实验指标 ,用正交设计优化N 三甲基壳聚糖盐酸盐包覆胰岛素脂质体的处方和工艺。结果 :N 三甲基壳聚糖盐酸盐包覆胰岛素脂质体的最佳处方组成为 10 0IU胰岛素、2 0 0mg磷脂、4mg/mlN 三甲基壳聚糖盐酸盐、1%PVPK 30、2 5mg胆固醇、10mgVitE和pH 5醋酸盐缓冲液。最佳制备工艺因素为以 10ml乙醚为溶媒、旋转蒸发温度 10℃、探头式超声 0 5min后加N 三甲基壳聚糖盐酸盐、包覆温度 10℃、包覆时间 0 5h。结论 :脂质体的组成和制备因素的变化影响N 三甲基壳聚糖盐酸盐包覆胰岛素脂质体的降血糖效果 ,经优化得到的N 三甲基壳聚糖盐酸盐包覆胰岛素脂质体在小鼠和大鼠口服后 ,最佳降血糖百分率分别为 17 17%和6 4 75 %。

N-三甲基壳聚糖对胰岛素液体栓剂体外性质的影响

目的研究不同季铵化程度及其不同浓度的N-三甲基壳聚糖(-Ntrimethyl chitosan,TMC)对胰岛素液体栓剂体外性质的影响。方法用壳聚糖及碘甲烷为主要原料,合成不同季铵化程度的TMC,即TMC40和TMC60,通过1H-NMR确定其季铵化程度。以泊洛沙姆407和188为基质,以TMC作为黏膜吸收促进剂制备胰岛素液体栓剂,用血糖试纸测定给药后小鼠不同时间点的血糖值,TMC季铵化程度及其不同浓度(质量分数为0%,0.1%,0.5%,1%)对液体栓剂的体外胶凝温度、胶凝强度和生物黏附力影响。结果经1H-NMR确定合成得到的TMC40,TMC60季铵化程度分别为38.8%和67.2%。同一种季铵化程度TMC,随着TMC浓度的增加,胰岛素液体栓剂的胶凝温度减小,胶凝强度和生物黏附力均增大。同一浓度的TMC,随着季铵化程度的增加,其胶凝温度升高,胶凝强度和生物黏附力均减小。结论TMC季铵化程度及其不同浓度对液体栓剂的体外性质有着显著的影响,可以通过使用不同季铵化程度的TMC和改变其浓度来改善胰岛素液体栓剂的体外性质,可能更有效的促进胰岛素的直肠吸收。

N-三甲基壳聚糖对睾酮凝胶在兔体内药动学的作用研究

目的研究N-三甲基壳聚糖(N-trimethyl chitosan,TMC)对睾酮凝胶在兔体内药动学的作用,考察TMC的透皮吸收促进作用效果。方法用壳聚糖及碘甲烷为主要原料,合成季铵化程度分别为40%和60%的TMC,即TMC40和TMC60,通过1H-NMR确定其季铵化程度。以泊洛沙姆P407为基质制备4份凝胶,以睾酮为模型药物,以月桂氮酮(2%)为阳性对照,以不加促渗剂为阴性对照,另两份凝胶分别含TMC40和TMC60各5%作为促渗剂。经皮给药后采用RP-HPLC测定兔血浆中的睾酮浓度,计算药动学参数,对4种凝胶进行比较,考察TMC40,TMC60的促渗效果。结果经1H-NMR确定合成得到的TMC40,TMC60季铵化程度分别为38.8%和67.2%。主要药动学参数tmax,ρmax,Ka,AUC经方差分析及双单侧t检验后,TMC60较空白组及月桂氮酮组各参数均具有显著性差异(P<0.05),TMC40较空白组有明显促进作用(P<0.05),较月桂氮酮组除参数Ka外无显著性差异(P>0.05)。结论TMC60具有显著的促进睾酮凝胶透皮吸收作用,TMC40较空白组促进吸收作用明显,但效果与2%月桂氮酮相比无显著性差异。

N-三甲基壳聚糖包衣的盐酸阿霉素脂质体的制备

目的:研制N-三甲基壳聚糖(TMC)包衣的盐酸阿霉素(ADM)脂质体。方法:采用硫酸铵梯度法制备ADM脂质体,以包封率为指标,筛选盐酸阿霉素脂质体最佳处方;合成不同季铵化程度的TMC,并对最佳ADM脂质体进行包衣。结果:未包衣ADM脂质体平均粒径为(378.6±5.2)nm,Zeta电位为(-62.08±2.5)mv,平均包封率为(62.27±1.75)%(n=3)。TMC包衣后,脂质体粒径增大,并随着TMC季铵化程度的增大,Zeta电位显著增大(P<0.05);TMC20、TMC40、TMC60包衣脂质体体外释药曲线符合Higuchi方程,分别为:Q=7.6315+3.7863t_(1/2)(r=0.929 2),Q=6.9647+3.5709t_(1/2)(r=0.9318),Q= 7.3451+2.7665t_(1/2)(r=0.935 7)。结论:TMC包衣ADM脂质体的制备工艺可行,其表面带有较高正电性,为下一步研究其血管靶向性打下基础。

N-三甲基壳聚糖包衣维生素A阳离子脂质体-原位凝胶的兔房水药动学研究

目的:比较N-三甲基壳聚糖(TMC60)包衣的维生素A棕榈酸酯(VAP)阳离子脂质体-原位凝胶(TMC60-VAPL-ISG组)与市售VAP凝胶(诺沛组)在兔眼房水的药物动力学。方法:采用自身对照,两种制剂滴用后,用HPLC法测定不同时间点的兔眼房水中的VAP浓度,用3P97软件拟合求得药动学参数。结果:用药0.25 h后,TMC60-VAPL-ISG组各时间点房水内药物浓度均明显高于诺沛组,房水药物浓度-时间曲线下面积(AUC0-24)也明显高于诺沛组(P<0.05)。结论:TMC60-VAPL-ISG可明显延长药物在眼部的滞留时间,增加房水中药物浓度,显著提高VAP的眼部生物利用度。

N-三甲基壳聚糖对更昔洛韦凝胶体外促渗作用的考察

目的考察N-三甲基壳聚糖(TMC60)对更昔洛韦的体外促渗作用。方法制备含1%TMC60的更昔洛韦凝胶,用Franz扩散池进行体外促渗作用研究,以稳态透皮速率(J)为指标,与同浓度的氮酮、壳聚糖(CS)进行比较。结果空白组、氮酮组、TMC60组及CS组的J值分别为3.822 1,4.098 4,4.205 5及4.356 9μg.(cm2)-1.h-1。与空白组相比,TMC60有显著的促进更昔洛韦体外经皮渗透作用(P<0.05),与同浓度氮酮、CS相比,促渗作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TMC60可显著促进更昔洛韦的体外经皮渗透。

壳聚糖衍生物——N-三甲基壳聚糖的促吸收作用研究进展

目的:探讨壳聚糖衍生物——N-三甲基壳聚糖促吸收作用的研究进展。方法:查阅国内外有关N-三甲基壳聚糖促吸收作用的机制、影响因素及应用的文献,并进行分析、总结。结果:N-三甲基壳聚糖可增加细胞旁路途径的跨膜转运,具有促进药物吸收的作用。结论:N-三甲基壳聚糖有望作为一种有效促吸收剂应用于药物制剂。

眼用N-三甲基壳聚糖包衣胰岛素纳米脂质体原位凝胶的研制及体外释药研究

目的以胰岛素(INS)为模型药物,制备眼用阳离子纳米脂质体-原位凝胶(ISG),并对其相关体外性质及体外释药行为进行考察。方法采用逆向蒸发法制备INS纳米脂质体(INSL),并用N-三甲基壳聚糖(TMC60)进行包衣;根据胶凝温度筛选出泊洛沙姆407的最佳质量浓度;采用无膜溶出模型考察凝胶的体外释药行为。结果 TMC60包衣前的INSL-ISG的平均粒径为(92.36±0.20)nm,Zeta电位为(-19.50±0.30)mV;TMC60包衣后的INSL-ISG的平均粒径为(93.93±0.19)nm,Zeta电位为(13.23±0.15)mV。泊洛沙姆407的最佳质量浓度为25%,经模拟泪液稀释前后的胶凝温度分别为23.9℃和34℃。TMC60-INSL-ISG的药物释放和凝胶溶蚀均呈现良好的零级释放特征。结论 TMC60-INSL-ISG兼有阳离子脂质体和原位凝胶的优势,延缓了药物的释放,为下一步探究提高其角膜滞留性奠定了基础。

不同季铵化程度的N-三甲基壳聚糖对双氯芬酸钠体外经皮吸收的影响研究

目的:考察N-三甲基壳聚糖(TMC)的季铵化程度(DQ)对双氯芬酸钠(DS)透皮吸收促进作用的影响。方法:以壳聚糖及碘甲炕为主要原料,合成DQ分别为20%,40%及60%的TMC,即TMC20,TMC40及TMC60。以2%氮酮为阳性对照,以离体小鼠皮肤为屏障,考察同浓度的各种TMC对DS凝胶的透皮促进作用。结果:TMC20,TMC40及TMC60的DQ分别为20.2%,40.1%及64.4%。体外DS的累积透过量及稳态透皮速率大小顺序为TMC60组>氮酮组>TMC40组>TMC20组>空白组,其中TMC60的促进作用大于同浓度的氮酮(P<0.05),而TMC40及TMC20的促进作用弱于氮酮(P<0.05)。结论:TMC的DQ对其发挥透皮吸收促进作用有较大的影响。

N-三甲基壳聚糖对硝苯地平片在犬体内药物动力学的影响

目的:研究N-三甲基壳聚糖(TMC60)对硝苯地平片药物动力学的影响。方法:以Beagle犬为实验动物,分别口服硝苯地平片Ⅰ(含TMC60)及硝苯地平片Ⅱ(不含TMC60),采用单剂量交叉实验,在预定的时间点取血样,测定硝苯地平的浓度,并用3P97软件包拟合两种片剂的药代动力学参数。结果:硝苯地平片Ⅰ、Ⅱ在犬体内均符合口服吸收二室模型。两种片剂的主要参数T_(max)、C_(max)、Ka、AUC等均有显著性差异(P<0.05)。结论:TMC60可显著改善硝苯地平在犬体内的吸收,提高其生物利用度,是一种较好的促进吸收的辅料。

N-三甲基壳聚糖包衣多柔比星脂质体肿瘤新生血管靶向性的体内评价

目的:考察N-三甲基壳聚糖(TMC)包衣的多柔比星(ADM)阳离子脂质体抗肿瘤活性及对肿瘤新生血管的靶向性。方法:采用动物移植性肿瘤实验法,建立小鼠H_(22)肿瘤模型,比较TMC包衣脂质体组和其他各给药组的肿瘤抑制率并通过小鼠尾静脉注射异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran),分析肿瘤组织中的在体荧光,定性观察肿瘤新生血管的形态排布情况,定量测定肿瘤组织中的血管相对密度。结果:TMC包衣的ADM脂质体组,其小鼠的瘤重抑制率达53.47%,显著高于游离药物组和未包衣脂质体组(8.75%,34.88%)(P<0.05);给予TMC包衣ADM脂质体的小鼠,其肿瘤新生血管形态良好,排布均匀,血管分支少,而其他给药组的肿瘤新生血管多扭曲,粗细不均,一个节点有多个血管分支等;通过比较不同给药组肿瘤组织黏附的FITC-Dextran量,TMC包衣ADM脂质体组的肿瘤血管密度明显低于游离药物组和未包衣脂质体组(P<0.05)。结论:TMC包衣的ADM阳离子脂质体不仅具有较强的抗肿瘤活性,而且具有很好的肿瘤新生血管靶向性。

溴吡斯的明N-三甲基壳聚糖包衣脂质体兔体内药动学研究

目的考察N-三甲基壳聚糖(TMC60)包衣溴吡斯的明脂质体(PB-L)在兔体内的药动学特征。方法 9只新西兰大耳白兔随机分成3组,采用自身交叉对照实验,分别单剂量口服TMC60包衣PB-L、未包衣PB-L及市售PB普通片,采用HPLC法测定血浆中PB的浓度,用DAS2.1.1软件计算药动学参数,并计算包衣PB-L及未包衣PB-L相对于市售PB普通片的相对生物利用度。结果 TMC60包衣PB-L、未包衣PB-L及市售PB普通片在兔体内的药动学特征符合二室模型,主要药动学参数如下:Cmax分别为(15.131±0.244)mg·L-1,(15.430±0.512)mg·L-1和(17.596±0.484)mg·L-1;tmax分别为(4.52±0.24)h,(4.05±0.15)h和(2.33±0.28)h;AUC0-∞分别为(252.928±5.014)mg·h·L-1,(222.644±4.243)mg·h·L-1和(196.553±2.982)mg·h·L-1;TMC60包衣PB-L及未包衣PB-L的相对生物利用度分别为128.682%、101.573%,经方差分析、双单侧t检验和非参数检验,TMC60包衣PB-L比市售普通片生物利用度显著提高(P<0.05),未包衣PB-L与普通片比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TMC60包衣PB-L可显著提高兔体内生物利用度。

N-三甲基壳聚糖对芦荟凝胶透皮吸收促进作用的体外研究

目的:研究季胺化程度为60%的N-三甲基壳聚糖(TMC60)对芦荟凝胶体外透皮吸收的影响。方法:分别制备含2%TMC60的芦荟凝胶(TMC60组),含2%氮酮的芦荟凝胶(阳性组),无促渗剂的芦荟凝胶(阴性组)。通过体外透皮扩散实验得到各组累积透过量Q,并求出稳态透皮速率J。结果:TMC60组和阳性组的Q和J均显著大于阴性组(P<0.05);而TMC60组和阳性组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:2%TMC60与2%氮酮的体外透皮吸收促进效果相似,值得进一步研发。

N-三甲基壳聚糖包衣脂质体的细胞毒性考察

目的：评价不同季铵化程度的N－三甲基壳聚糖（TMC）包衣的空白脂质体对小鼠成纤维细胞L-929的毒性。方法：采用四步合成法合成不同季铵化程度的TMC，并采用IR对其结构进行确证和表征，^1H—NMR确定其季铵化程度。采用MTT比色法评价TMC作为阳离子脂质体包衣材料，在不同浓度和不同季铵化程度时对小鼠成纤维细胞L-929的毒性，计算相对增殖率，并参考《美国药典》的评价标准对其进行毒性分级。结果：IR分析TMC的特征吸收峰已明显发生了改变，表明TMC已经成功合成，^1H-NMR分析所合成的TMC，季铵化程度分别为20．2％、40．1％、64．4％，不同季铵化的TMC在浓度为0．02％，0．05％（w／w），细胞增殖率均大于80％，TMC20在浓度增大到0．2％（w／w）时，细胞增殖率仍高于80％，细胞毒性为1级，即无细胞毒性，但随着浓度和季铵化程度的提高，细胞毒性均相应增大。结论：所合成的TMC在一定的浓度和季铵化范围内，细胞毒性较低，又鉴于其具有良好的生物降解性、亲水性和生物粘附性，可望作为阳离子脂质体理想的包衣材料。

N-三甲基壳聚糖包衣脂质体生物安全性评价

目的:评价N-三甲基壳聚糖(TMC60)包衣脂质体的生物安全性,为其作为肿瘤靶向制剂的载体奠定实验基础。方法:分别采用静脉注射及腹腔注射,对TMC60包衣脂质体的小鼠急性毒性进行了考察,获得LD_(50);同时对其注射刺激性、过敏性及溶血性进行了评价。结果:TMC60包衣脂质体小鼠静脉注射及腹腔注射的LD_(50)和95%置信限(95%CI)分别为224.1(95%CI:178.8～302.6)mg·kg^(-1)和342.3(95%CI:269.7～534.2)mg·kg^(-1),同时在实验剂量时,无注射刺激性、过敏性及溶血性。结论:TMC60包衣脂质体的生物安全性较高,值得进一步研究。