高效液相色谱法测定生物转化反应液中N,N′-乙二胺二琥珀酸

建立了高效液相色谱测定生物转化反应液中 N,N ′-乙二胺二琥珀酸(EDDS)含量的分析方法。采用InertSustain AQ-C 18 色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μ m),以体积分数25%的甲醇水溶液(含有1.0 g/L 一水乙酸铜、2.0 g/L 四丁基氢氧化铵,以磷酸调节pH至2.80)为流动相,流速为1.0 mL/min ,柱温为30 ℃,进样量为20 μ L,检测波长为254 nm。该方法可在8 min内分离EDDS及其生物合成相关物质(苹果酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)和富马酸),且峰形良好。EDDS在0.06~0.6 g/L 范围内线性线性关系良好(相关系数( r )为 0.999 5 ),平均回收率为100.39%( n =9, RSD=1.15%)。EDDS生物合成反应液中EDDS含量为0.25 g/L ,大部分底物被转化为苹果酸(36.56 g/L );而EDDS的水解反应中富马酸产生较少,形成了3.05 g/L 的苹果酸。该方法简便快速,灵敏可靠,适用于EDDS生物合成的研究。