一步等位基因特异扩增法检测中国人N-乙酰化酶基因型

目的建立简化的一步等位基因特异扩增法(ASA),研究中国人N-乙酰化酶(NAT2)多态性等位基因的分布。方法用一步法直接检测215名中国健康人NAT2 *5,*6,*7等位基因。结果一步法测定结果与两步法一致。215名健康中国人NAT2 *5,*6,*7 3种突变型等位基因的基因频率分别为3.3％,24.6％和10.0％。基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子分别为85,96和34人,分别占39.5％,44.7％和15.8％。结论一步法测定NAT2基因准确、方便,为临床个体化合理用药提供理论基础。

N-乙酰化酶2基因型对中国肺结核患者异烟肼代谢的影响

目的研究N-乙酰化酶2(NAT2)基因型对中国肺结核患者异烟肼(INH)代谢的影响。方法采用反向点交法(RDB)检测中国肺结核患者NAT2基因型;柱前衍生化高效液相色谱法检测服药2 h后血浆中INH及其代谢物乙酰化INH(Ac- INH)浓度。结果46例患者基因型包括野生型wt/wt(n=17)、杂合子m/wt(n=22)、突变型纯合子m/m(n=7)。血浆INH及AcINH浓度分别为(12.74±10.51)和(12.49±9.61)μmol·L^(-1)。3个基因组INH、AcINH浓度比为1:1.37:1.77和1:0.77:0.75;3组AcINH与INH比值(R_(A/I))为1:0.52:0.40(P<0.01)。结论不同NAT2基因型的结核患者对INH代谢能力差异显著,存在基因剂量现象。NAT2基因分型对结核患者合理用药具有重要意义。

反向点杂交法检测中国人N-乙酰化酶基因型

目的 建立快速方便的反向点杂交法 (RDB)检测中国人N 乙酰化酶 (NAT2 )基因型。方法 采用PCR法扩增生物素标记的DNA片段 ,与固定在尼龙膜上的等位基因特异性寡核苷酸探针进行杂交 ,通过非同位素法显色检测杂交结果 ,分析NAT2 5种主要突变位点。用本法对 4 8名肺结核患者NAT2基因型进行了分析。结果 RDB法与等位基因特异扩增法结果完全一致。 4 8名肺结核患者NAT2 5、 6、 73种突变型等位基因的基因频率分别为 1 0 4 %、2 2 9%和 15 6 %。野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子分别为 33 3%、5 4 2 %和 12 5 %。结论 RDB法检测NAT2基因型准确、方便 ,适用于指导临床合理用药。

人类N-乙酰化酶2蛋白质分子的计算机三维模拟

目的:对人类N-乙酰化酶2(NAT2)蛋白质分子进行计算机三维模拟。方法:将下载的蛋白质序列结合计算机三维模拟技术对NAT2进行三维模拟,并对其进行物理、化学、生物学等特征分析,初步判断蛋白质分子的部分化学和物理学性质,对其某些功能作出预测。结果:利用蛋白质序列分析软件包ANTHEPORT5.0模拟出NAT2可能的结构;预测到NAT2的蛋白等电点(pH i)=5.495,相对分子质量=33 544以及NAT2的滴定曲线和物理化学特征性曲线;对NAT2第282个氨基酸位点附近的片段绘制出HelicalW heel图。结论:能利用计算机模拟出NAT2的可能结构,并可作出一定的分析和预测,此种方法可用于NAT2基因多态性的分析。

等位基因特异PCR检测N-乙酰化转移酶遗传多态性研究

目的与方法 :改良一种适用于流行病学研究的N 乙酰化转移酶 (NAT2 )基因型的等位基因特异PCR(AS PCR)检测方法 ,分析了 3个NAT2基因突变点 :481T、5 90A、85 7A ,并用此法对 76例南京地区健康人群的NAT2基因型多态性进行了研究。从而也检验了该方法。结果 :该人群中各基因频率 :Wt(野生型 )为 0 .5 72 3:481T为 0 .0 395 ;5 90A为 0 .2 36 8;85 7A为 0 .15 13。与白种人比较差异有显著性 ,而与文献报道的亚州人群频率分布特征基本一致。结论 :南京地区健康人群中与快反应相关的NAT2基因型占多数 (82 .9% ) ;本文改良的AS PCR检测方法经验证为NAT2基因多态性研究的有效实验手段。

咖啡因探针法测定正常人肝脏N-乙酰化转移酶活性

目的建立一套测定咖啡因的3种主要代谢物5乙酰氨基6甲酰氨基3甲基尿酸(AFMU)、1甲基黄嘌呤(1X)和1甲基尿酸(1U)的高效液相色谱法,探讨咖啡因代谢物在N乙酰化酶活性评价中的意义。方法采用反相高效液相梯度洗脱法测定尿液内咖啡因代谢产物AFMU、1U和1X的相对含量,计算AFMU/(AFMU+1X+1U)比值,绘制概率分布直方图,确定正常人快、慢乙酰化代谢表型的截点(临界点)。结果受试者可明显划分为快乙酰化者和慢乙酰化者,快、慢乙酰化代谢表型的临界点为0.26,快、慢乙酰化表型之比73∶17。结论本方法简便、准确、快速,适合于尿中咖啡因代谢物的测定及N乙酰化转移酶活性的研究。

N-乙酰化转移酶1基因分型及其与炎症性肠病相关性研究

目的:探讨药物代谢酶N-乙酰化转移酶1(NAT1)基因多态性在中国人群中的分布及其与炎症性肠病(IBD)的相关性。方法:应用PCR-RFLP和AS-PCR技术检测中国湖北地区无血缘关系的IBD患者105例,其中溃疡性结肠炎组(UC组)87例与克罗恩病组(CD组)18例,和正常对照120例的NAT1基因多态性。结果:IBD组中,NAT1*3,NAT1*4,NAT1*10和NAT1*11等位基因频率分别是20.48%,50.00%,21.90%和7.62%,与正常对照组比较无显著差异。CD组NAT1*10等位基因频率略高于UC组(25.00%比21.26%),但差异无显著性(P>0.05);将NAT1基因型分为快代谢和慢代谢乙酰化基因型,与正常对照组比较亦无显著差异。UC组快代谢基因型(NAT1*10纯合子)与CD组相比有增高趋势(16.67%比12.64%),但差异无显著性(P>0.05)。结论:NAT1基因多态性与炎症性肠病不存在关联。

中国人SLE患者N－乙酰化转移酶的研究

本文对３２例系统性红斑狼疮（ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，ＳＬＥ）及２５例类风湿性关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）进行了Ｎ－乙酰化转移酶多态现象和基因频率的研究。结果显示：ＳＬＥ中６例为慢反应型，基因频率Ｒ为０．５６７０，ｒ为０．４３３０；ＲＡ中１８例为慢反应型，基因频率Ｒ为０．１５１５，ｒ为０．８４８５．ＳＬＥ组与正常组无差异，ＲＡ组与ＳＬＥ组及正常组相比皆有显著性差异。实验提示中国人ＳＬＥ组与ＲＡ发病中可能有不同遗传机制参与。

测定咖啡因代谢物评价N-乙酰转移酶、CYP1A2和黄嘌呤氧化酶活性

目的是对中国人Ｎ乙酰化酶（ＮＡＴ２）、ＣＹＰ１Ａ２酶和黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）的活性进行分析。１２０名健康志愿者饮用３杯咖啡后于４～５ｈ留尿，用ＨＰＬＣ方法测定尿中５种咖啡因主要代谢物浓度，即５乙酰胺基６甲酰胺基３甲基尿嘧啶（ＡＦＭＵ）、１甲基黄嘌呤（１Ｘ）、１甲基尿酸（１Ｕ）、１，７二甲基尿酸（１７Ｘ）、１，７二甲基黄嘌呤（１７Ｕ）。其中Ｎ乙酰化酶活性用ＡＦＭＵ／１Ｘ或ＡＦＭＵ／（ＡＦＭＵ＋１Ｘ＋１Ｕ）表示；ＣＹＰ１Ａ２酶活性指标采用（ＡＦＭＵ＋１Ｘ＋１Ｕ）／１７Ｘ或ＡＦＭＵ＋１Ｘ＋１Ｕ）／１７Ｕ；ＸＯ酶活性指标采用１Ｕ／１Ｘ或１Ｕ／（１Ｘ＋１Ｕ）。结果表明，Ｎ乙酰化酶活性呈两态分布，慢代谢者占１６７％，ＣＹＰ１Ａ２和ＸＯ酶活性呈对数正态分布，其代谢比值与国外文献报道一致。提示通过测定咖啡因代谢物比值，可以进行ＮＡＴ２酶、ＣＹＰ１Ａ２酶和黄嘌呤氧化酶活性分析。

N-乙酰化转移酶基因多态与肝癌遗传易感性的研究

为探讨Ｎ－乙酰化转移酶（ＮＡＴ）基因多态与肝癌遗传易感性的关系，应用ＰＣＲ、ＡＳＰＣＲ和ＲＦＬＰ，对６５例肝癌患者和１０６例健康对照进行了研究。结果表明，病例组慢型基因频率为７０．７７％，对照组为５２．８３％，两者差异显著（Ｐ＝０．００１）。ＯＲ值为２．１６，ＥＦ值为０．３８０１。提示携带慢型基因者患肝癌的危险性增加１．１６倍，由慢型基因所致的肝癌病例占人群中全部肝癌病例的３８．０１％。病例组基因型Ｆ１／Ｆ１、Ｆ１／Ｓ和Ｓ／Ｓ的频率分别为９．２３％、４０．００％和５０．７７％，对照组则分别为２２．６４％、４９．０６％和２８．３０％，两者差异显著（Ｐ＝０．００５６）。ＯＲ值分别为１．００、２．００和４．４０，存在剂量反应关系。发现４个新的慢型基因亚型，其点突变组合为３４１／５９０、５９０／８０３、２８２／３４１／５９０、２８２／３４１，将其暂命名为Ｓ９，Ｓ１０，Ｓ１１和Ｓ１２。

N-乙酰化转移酶2基因多态与喉癌遗传易感性的研究

目的 探讨N 乙酰化转移酶 2 (NAT2 )基因多态与喉癌遗传易感性的关系。方法 应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)方法 ,对 6 2例喉癌患者进行研究 ,测定其NAT2基因型 ,按吸烟指数 (SI)不同 ,分层分析患癌风险。并与 5 6例非肿瘤患者进行对照。结果 喉癌组慢乙酰化型基因型频率为 80 .6 % ,对照组为 6 0 .7% ,两者差异有显著性 (χ2 =5 .70 ,P =0 .0 17)。高吸烟剂量组的NAT2慢乙酰化型个体 ,患喉癌风险明显高于低吸烟剂量组 ,比值比 (OR)分别为 5 .6 4和 1.38,95 %可信限 (95 %CI)分别为 1.77～ 17.92和 0 .4 2～ 4 .5 2。结论 NAT2慢乙酰化型个体患喉癌风险增加 ,在喉癌发生过程中 。

N-乙酰化转移酶1基因分型及其与散发性大肠腺癌易感性

目的 分析N 乙酰化转移酶 1 (NAT1 )各等位基因型及其与散发性大肠腺癌 (SCRAC)易感性之间的关联。方法 应用聚合酶链反应 (PCR) 限制性片段长度多态性分析 (RFLP)及多重PCR技术 ,检测中国湖北地区汉族无血缘关系的健康人 1 0 1例、SCRAC患者 1 0 4例的NAT1基因多态性。结果 (1 )NAT1等位基因 1 0 (NATI 1 0 )频率在SCRAC患者与健康人之间及老年SCRAC患者与健康人之间的差异均有显著性 (前者P <0 0 5 ,OR =1 91 ,95 %CI=1 1～ 3 4;后者P <0 0 1 ,OR =2 91 ,95 %CI =1 48～ 5 90 ) ;在近端或远端SCRAC与健康人之间的差异无显著性 (P >0 0 5) ;(2 )DukesⅡ期、Ⅲ和Ⅳ期分别与健康人相比 ,其NAT1 1 0的频率差异均有显著性 (前者P <0 0 5 ,OR =2 48,95 %CI=1 1 8～ 5 2 0 ;后者P <0 0 5 ,OR =3 0 4 ,95 %CI =1 2 8～ 7 2 0 )。结论 NAT1 1 0与SCRAC易感性有关 ,其患者肿瘤浸润、转移早 ,与癌灶部位无关 ;

乙肝病毒相关性肝病毒物代谢酶基因多态性研究

目的：探讨谷胱甘肽硫转移酶(GST)M1、T1及N-乙酰化转移酶1(NAT1)基因多态与肝炎肝硬化、乙肝相关性肝癌的易感性。方法：采用多重PCR和PCR-RFLP技术,检测60例肝细胞肝癌(病例组),66例肝炎肝硬化(肝硬化组)和73例乙肝标志物阴性的健康人(对照组)GSTM1、GSTT1和NAT1基因多态性。结果：GSTM1空白基因型在对照组中的频率显著低于肝癌组(x^2=7.16,P＜0.01),GSTT1空白基因型、NAT1快代谢型在三组研究对象间的频率差异均无显著性；GSTM1空白／GSTT1空白／NAT1快代谢联合基因型在肝癌组中的频率显著高于对照组(x^2=15.98,v=7,P＜0.05),具该联合基因型且HBV阳性的个体患肝癌的危险性升高了2.5倍(OR=2.49,95％CI=1.12-5.53)。结论：GSTM1空白基因型与肝癌的发生有关,GSTM1空白／GSTT1空白／NAT1快代谢联合基因型且HBV阳性的个体患肝癌的危险性显著升高。

N-乙酰化转移酶2基因多态性与抗结核药物致肝损伤的关系研究

目的探讨N-乙酰化转移酶2(NAT2)基因多态性与抗结核药物致肝损伤相关实验室指标的相关性。方法应用焦磷酸测序法检测抗结核治疗3个月内出现肝损伤患者41例和未出现肝损伤患者88例的NAT2基因多态性,并对所有患者肝功能检测指标进行分析。结果抗结核治疗后,不同NAT2乙酰基因型结核病病例的6项肝功能指标较治疗前均有升高(P均<0.01)。抗结核治疗后,不同基因型的ALT检测值之间存在差异(P<0.05),其中快乙酰型的ALT水平明显低于慢乙酰型(P<0.05);但其他5项肝功能指标在不同基因型间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 NAT2基因多态性与患者治疗后ALT水平升高存在一定相关性,应重视该指标的变化。

N-乙酰化转移酶基因多态性与肺癌易感性关系的研究进展

代谢酶在外源性致癌物的体内代谢中起重要的激活与灭活作用。N-乙酰化转移酶（arylamine N-acetyltransferases,NAT）是人体内重要的致癌物灭活酶。编码代谢酶的基因存在着多态性现象,可导致代谢酶活性不同,使外源性致癌物在体内代谢存在个体间差异。个体对肺癌的易感性不仅与致癌物的暴露有关,还与代谢酶基因多态性相关。本文就NAT及其与肺癌易感性关系进行综述。

N-乙酰化转移酶1基因多态性与老年人胃肠腺癌易感性的关系

目的 探讨N 乙酰化转移酶 1(NAT1)基因多态性与老年人胃肠腺癌易感性的关系。 方法 应用PCR 限制性片段长度多态性分析 (RFLP)及多重PCR技术检测NAT1基因多态性 ,14 C尿素呼气试验和外周血ELISA法检测幽门螺杆菌 (HP)感染情况。 结果 老年胃腺癌组与老年对照组含NAT1 10的基因型频率分别为 4 2 0 %、2 8 6 % ,其差异无显著性 ,胃腺癌组不同分化程度、部位及临床分期分别与老年对照组比较 ,含NAT1 10的基因型的频率差异均无显著性。含NAT1 10的基因型在HP阳性胃腺癌组中的频率 (4 5 7% )显著高于HP阳性对照组 (2 6 1% ,P <0 0 5 ) ;在大肠腺癌组、老年人远端大肠腺癌及中分化腺癌中的频率分别为 4 3 2 %、4 6 9%及 4 8 4 % ,均显著高于老年对照组 (P <0 0 5 )。 结论 含NAT1 10的基因型与老年人胃腺癌的易感性无关 ,与肿瘤发生部位、临床分期及分化程度等均无关联 ,与老年大肠腺癌的易感性有关 ,肿瘤多位于大肠远端 ,以中分化腺癌多见。含NAT1 10的基因型可提高HP感染的老年人患胃腺癌的危险性。

N－乙酰化酶多态现象与膀胱癌的关系研究

代谢酶多态性决定着对致癌化学物的易感性，是肿瘤发生的遗传性影响因素之一。国外已明确Ｎ－乙酰化转移酶与膀胱癌、肠癌、乳腺癌的联系，特别是已公认与膀胱癌的关系，慢型者的超额危险度约为２～３。我国尚未见报道。为此，对膀胱癌病人中乙酰化酶多态性作了调研。３９例膀胱癌病人中，２７例为慢型（６９．２％）１１４４名中学生中，２３２名为慢型（２０．２８％）；基因频率分别为０．８３２１及０．４５０３，有显著统计学差异；由此计算出乙酰化酶慢型者的膀胱癌相对危险度为８．９（４．９～１５．９倍）。本调研为我国癌症的病因学研究开辟了一新线索，有助于阐明癌症的遗传性影响，并可检出高危人群，特别是应用于职业性接触致膀胱癌患者的健康监护，以加强预防。

NAT1基因多态性与肝癌的遗传易感性

目的 :探讨N 乙酰化转移酶 1(NAT1)基因多态性与肝癌遗传易感性的关系。方法 :应用PCR RFLP技术检测 96例肝癌患者和 173例对照的NAT1基因型 ,并分析NAT1与环境危险因素的交互作用。结果 :病例组等位基因NAT1 3,NAT1 4 ,NAT1 10和NAT1 14B的频率分别是 2 0 .3%、5 0 .5 %、2 4 .0 %和 5 .2 % ,基因型NAT1 3/ 3、NAT1 3/ 4、NAT1 3/ 10、NAT1 3/ 14B、NAT1 4 / 4、NAT1 4 / 10、NAT1 4 / 14B、NAT1 10 / 10和NAT1 10 / 14B的频率分别是 4 .2 %、2 5 .0 %、3.1%、4 .2 %、31.3%、10 .4 %、3.1%、14 .7和 4 .2 % ,与对照组相比差异均无统计学意义。病例组NAT1快型和慢型的频率分别是 32 .3%和 6 7.7% ,与对照组相比不存在统计学差异。NAT1 10与职业暴露存在交互作用 ,OR值为 3.4 0 (95 %CI:1.0 3～ 11.2 2 ) ,与其它环境因素不存在交互作用。结论 :NAT1基因多态性与肝癌不存在关联 ,NAT1

高效液相色谱法测定尿中咖啡因主要代谢物浓度

本文建立了测定尿中咖啡因5种主要代谢物（AFMU、1X、1U、17X、17U）浓度的高效波相色谱法。尿样用硫酸铵饱和后加氯仿及异丙醇混合液（85：15）提取2次，空气流吹干，蒸馏水溶解进样。以ShimPackC18为固定相，甲醇-动腈-0．05％醋酸（10：1：89）为流动相，扑热息痛为内标，流速为1．2ml／min，在280um处定量检测。本法精确稳定可靠。用此方法测定了120名健康志愿者口服咖啡后的尿样，对人体内N-乙酰化转移酶和CYP1A2酶活性作了初步分析。