N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对血小板洐生生长因子介导的NIH3T3细胞增殖的抑制调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板洐生生长因子(PDGF)介导的NIH3T3细胞增殖的抑制调节作用。方法:采用MTT法和免疫组化法检测NIH3T3细胞增殖和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:在 10-10～10-8mol／L浓度范围内,AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞增殖均有抑制作用,并在10-9 mol／L浓度时其抑制作用最佳。PDGF对NIH3T3细胞PCNA的表达具有增强作用,而AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞PCNA的表达有显著抑制作用。结论:AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞增殖有明显抑制作用。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1和Smad7表达调节在大鼠硅肺纤维化形成过程中的作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠硅肺纤维化模型肺组织中胶原含量、转化生长因子β1(TGFβ-1)和Smad 7表达的影响。方法:选用非暴露式气管灌注法制作大鼠硅肺模型,并给予AcSDKP。采用H-E染色进行形态学观察,胶原Van Gison染色观察硅肺结节与间质纤维化的形成及改变,羟脯氨酸法检测肺内总胶原含量,免疫组织化学法、免疫印迹法检测肺组织内TGFβ-1、Smad7蛋白的表达。结果:染尘大鼠肺内硅结节形成明显,硅肺模型制作成功。AcSDKP治疗组肺组织胶原含量低于硅肺模型组。与对照组相比,模型组大鼠肺组织内TGF-β1蛋白表达增加,Smad7蛋白表达降低;与模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内TGFβ-1蛋白表达明显降低,Smad7蛋白表达增高。结论:AcSDKP可能通过增加大鼠肺组织中Smad7蛋白的表达来抑制TGFβ-1信号转导,从而发挥抗硅肺纤维化的作用。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成及表达的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用。方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系；采用~3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成。采用Western印迹法检测心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果：PDGF对心脏成纤维细胞胶原蛋白合成的促进作用与浓度相关,并以10 ng/ml时最强。AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有抑制作用,并且在10^(-9)mol/L时作用最强。结论：AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用,可能与其抗心脏纤维化的作用相关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞转化的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）是否通过对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路活化的调节,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转化,即上皮-间质转化（EMT）,进而发挥其抗（矽）肺纤维化的作用.方法：培养人A549肺泡Ⅱ型上皮细胞株,免疫细胞化学显色检测角蛋白、波形蛋白及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达；免疫印迹检测E-钙黏蛋白（E-cad）、波形蛋白及Rho相关卷曲蛋白激酶（ROCK）、血清反应因子（SRF）、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达；Real-Time PCR检测ROCK、SRF、α-SMA的表达情况.结果：在TGF-β1的诱导下,上皮细胞向肌成纤维细胞的形态改变,伴随着上皮标志物角蛋白、E-cad降低,而间质细胞标志物波形蛋白增高,α-SMA表达并增多.与对照组相比,TGF-β1诱导刺激组ROCK、SRF、α-SMA蛋白和基因表达水平上调,Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调.给予ROCK阻滞剂Y-27632、Ac-SDKP干预后,ROCK、SRF、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达显著降低.结论：Ac-SDKP通过阻断TGF-β1介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化及胶原的合成,进而发挥其抗（矽）肺纤维化的作用.

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对P38分裂原活化蛋白酶通路调节在肺成纤维细胞胶原合成中的作用

目的：探讨N乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）是否通过阻断转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的P38分裂原活化蛋白酶（MAPK）途径，进而抑制大鼠肺成纤维细胞增殖与Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。方法：培养新生大鼠肺成纤维细胞，分为对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β受体阻滞剂组、P38MAPK特异性抑制剂组、AcSDKP干预组。采用MTT法检测细胞增殖，免疫细胞化学法检测磷酸化P38蛋白的定位及表达，免疫印迹法检测TGF-β受体、磷酸化P38MAPK、P38MAPK、c-myc及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果：与对照组比较，TGF-β1能够促进细胞增殖，而分别给予LY364947、SB203580和AcSDKP干预后，细胞增殖均受到抑制。与对照组比较，TGF-β1刺激组的TGF-β1受体、磷酸化P38MAPK、c-myc以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调，当分别给予LY364947、SB203580和AcSDKP干预后，肺成纤维细胞TGF-β1受体、磷酸化P38MAPK、c-myc以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达均降低。而各组间比较P38MAPK蛋白表达无明显改变。结论：AcSDKP能够通过阻断TGF-β1介导的P38MAPK信号转导途径，进而抑制肺成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠肺成纤维细胞c—Jun氨基末端激酶通路活化的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导通路活化的调节作用.方法：培养新生大鼠肺成纤维细胞.激光扫描共聚焦显微镜观察phospho-JNK在细胞内定位与分布.免疫印迹法检测JNK/phospho-JNK蛋白的表达.结果：激光扫描共聚焦显微镜显示,与对照组比较,TGF-β1刺激后,胞质中phospho-JNK荧光强度变弱,而核浆比值明显增加.经AcSDKP干预作用后,胞质中phospho-JNK的荧光强度较TGF-β1刺激组增强,核浆比值明显减小.免疫印迹法显示,与对照组比较,TGF-β1刺激组phospho-JNK表达明显增加;而AcSDKP干预作用后,phospho-JNK蛋白表达较TGF-β1刺激组明显减少.结论： AcSDKP能阻断TGF-β1介导的肺成纤维细胞JNK通路的活化作用.

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β_1介导的心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1表达的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β_1(TGF-β_1)介导的大鼠心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1的调节作用。方法:差速贴壁法分离与获取新生大鼠心成纤维细胞。分别采用免疫细胞化学法和Western印迹法检测心成纤维细胞MMP-1、TIMP-1蛋白表达。结果:TGF-β_1可使心成纤维细胞MMP-1蛋白表达水平下降,而促进TIMP-1蛋白表达,MMP-1/TIMP-1比值下降。AcSDKP可以抑制TGF-β_1对心成纤维细胞MMP-1表达的下调作用,使MMP-1蛋白表达增加,而对TGF-β_1介导的TIMP-1蛋白表达无明显影响,MMP-1/ TIMP-1比值增加。结论:AcSDKP可以通过上调TGF-β_1介导的心成纤维细胞MMP-1蛋白表达并增加MMP-1/ TIMP-1比值,以加速细胞外基质降解,这可能与AcSDKP抗心纤维化的作用有关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠矽肺的结缔组织生长因子和ERK1／2表达的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对大鼠矽肺纤维化模型肺组织中胶原含量、结缔组织生长因子（CTGF）和细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）表达的影响。方法：选用非暴露式气管灌注法复制大鼠矽肺模型，并给予AcSDKP，采用羟脯氨酸测量法定量分析肺组织中总胶原蛋白的含量，免疫组织化学法、免疫印迹法检测肺组织内CTGF、phospho-ERK1／2及ERK1／2蛋白的表达。结果：AcSDKP治疗组胶原含量低于相对应的矽肺模型组。与相应的对照组相比，矽肺模型组大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1／2蛋白表达均增加；与相应矽肺模型组相比，给予AcSDKP后，大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1／2蛋白表达均明显降低。而各组间比较ERK1／2蛋白表达无明显改变。结论：AcSDKP可能通过阻断ERK1／2途径抑制了CTGF的表达，从而发挥抗矽肺纤维化的作用。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对肾间质纤维化大鼠MCP-1及NF-κB表达的影响

目的:观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化的的保护作用并初探其机制。方法:雄性Wistar大鼠18只,随机分为假手术组、UUO组、治疗组(AcSDKP+UUO),每组各6只。于造模第14天处死大鼠,取其梗阻侧肾脏组织行HE、Masson染色,光镜下观察肾组织病理改变,评价肾小管变性程度及肾间质纤维化指数,免疫组织化学检测各组肾脏组织MCP-1、ED-1及NF-κB蛋白表达,RT-PCR检测MCP-1 mRNA的表达,Western blot检测NF-κB的蛋白质表达。结果:与假手术组相比,UUO组大鼠肾脏肾小管变性及肾间质纤维化程度严重,AcSDKP治疗后可明显改善UUO组大鼠肾小管变性和间质纤维化(P<0.05);免疫组化染色显示:MCP-1、ED-1及NF-κB的蛋白表达UUO组和治疗组明显多于假手术组,但治疗组较UUO组明显减少(P<0.05);AcSDKP治疗组MCP-1 mRNA及NF-κB蛋白质的表达均显著弱于UUO组,二者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AcSDKP通过抑制NF-κB激活并进一步减少下游炎症细胞因子的表达以达到治疗肾间质纤维化的作用。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1介导的心脏成纤维细胞胶原代谢的调节作用

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的大鼠心脏成纤维细胞增殖与胶原代谢的调节作用。方法采用差速贴壁法获取新生大鼠心脏成纤维细胞；3H—TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖，免疫细胞化学染色法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成，Westernblot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白与MMP-1、TIMP-1蛋白的表达。结果AcSDKP抑制了TGF—β1对心脏成纤维细胞MMP-1蛋白表达的下调作用，使MMP-1蛋白表达增加，而对TGF—β1介导的TIMP-1蛋白表达无明显影响，使MMP-1／TIMP-1比值增加。结论AcSDKP抑制TGF—β1介导的心脏成纤维细胞的增殖、胶原合成，上调MMP-1蛋白表达，使MMP-1／TIMP-1比值增加，这可能与AcSDKP抗心脏纤维化的作用相关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对高糖诱导足细胞损伤的保护作用及机制

目的高糖可诱导足细胞损伤,促进糖尿病蛋白尿的产生及肾脏纤维化的进展。N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)是由血管紧张素转化酶水化的一种生理性四肽,可抑制肾脏纤维化。本文通过体外培养条件永生性小鼠足细胞,探讨AcSDKP对高糖诱导足细胞损伤的保护作用及可能机制。方法体外培养条件永生性小鼠足细胞,采用高糖(30 mmol/L)刺激48 h,同时予AcSDKP干预。分为正常对照组(常规低糖培养基培养)、高糖组、高糖+AcSDKP组。采用免疫荧光法检测各组细胞足细胞特异性标记物nephrin的表达改变,采用免疫印迹法检测各组足细胞纤连蛋白(fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达改变,采用免疫荧光检测各组足细胞骨架,采用流式细胞仪检测各组足细胞凋亡率。结果高糖可减少足细胞nephrin表达,AcSDKP处理后足细胞nephrin表达有所恢复。高糖组可促进足细胞间充质标记物fibronectin、α-SMA的表达升高,AcSDKP可抑制高糖刺激下足细胞fibronectin、α-SMA的表达。高糖可诱导足细胞骨架出现紊乱、重组,促进足细胞黏附性下降,诱导足细胞凋亡,AcSDKP可抑制足细胞骨架紊乱重组、改善足细胞黏附性、抑制足细胞凋亡。结论 AcSDKP可对高糖诱导的足细胞损伤发挥保护作用,其机制可能与逆转足细胞上皮-间充质转化,稳定细胞骨架、恢复足细胞黏附性及抑制足细胞凋亡有关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化的的改善作用并探讨其机制。方法将雄性Wistar大鼠36只随机分为假手术组,UUO组,处理组(AcSDKP+UUO),每组各12只。于造模第3、14d各处死大鼠6只,取其梗阻侧肾脏组织行HE染色,光镜下观察肾组织病理改变,计算肾间质纤维化指数。免疫组织化学方法检测其各组肾脏组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)表达,RT-PCR方法检测TGF-β1及a-SMA mRNA含量。结果与假手术组相比,各时间点UUO组大鼠肾脏病理损害进行性加重,AcSDKP处理后可明显减轻UUO组大鼠肾间质纤维化程度(P<0.05);免疫组化染色及RT-PCR显示:TGF-β1、a-SMA的蛋白及mRNA表达UUO组和处理组明显多于假手术组,但处理组较UUO组明显减轻(P<0.05)。结论 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)可通过抑制TGF-β1及a-SMA表达,进而抑制大鼠肾间质纤维化,减缓肾纤维化的病程进展。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对糖尿病肾病小鼠肾组织的保护作用及机制

目的通过对糖尿病肾病小鼠模型的研究,探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,AcSDKP)对糖尿病肾病小鼠肾组织的保护作用及可能机制。方法将18只小鼠随机分为正常组(n=6)、模型组(n=12)。通过一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptocozin,STZ)建立糖尿病小鼠模型,糖尿病模型建立成功后再分为糖尿病组(n=6)、糖尿病+AcSDKP组(n=6)。糖尿病+AcSDKP组小鼠予AcSDKP口服(1 mg·kg^(-1)·2 d^(-1),溶于饮用水瓶中),糖尿病组予常规饮用水。12周后测量小鼠血压、心率、血糖,收集小鼠血、尿标本用于检测生化指标及尿白蛋白/肌酐比值。处死大鼠后留取肾组织标本,通过普通光镜和电镜观察肾脏形态学及超微结构改变。采用免疫荧光法检测肾组织中足细胞蛋白(nephrin)的表达改变,采用免疫印迹法检测肾组织纤连蛋白(fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达改变。结果(1)与对照组相比,糖尿病小鼠出现血糖明显升高,建模成功后12周出现明显白蛋白尿,足细胞出现足突融合、增宽,肾脏出现纤维化,肾小球表面面积及系膜区面积明显增加,肾小球nephrin表达明显减少,而糖尿病小鼠血压无明显改变。(2)AcSDKP可减少糖尿病小鼠蛋白尿,减轻足细胞足突融合及增宽,缓解肾小球肥大及系膜增殖,改善肾脏纤维化。(3)AcSDKP可减少肾组织fibronectin、α-SMA的表达,部分恢复肾脏nephrin的表达。结论 AcSDKP可减轻糖尿病小鼠肾组织病变,其保护作用与减轻足细胞nephrin表达有关,为糖尿病肾病提供新的治疗手段及理论依据。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对血清诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性表达的调节作用

①目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性表达的调节作用。②方法选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用明胶酶谱法检测心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性的表达。③结果在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清浓度的增加,MMP-2、MMP-9酶活性表达增强。AcS-DKP能够进一步增加由10%血清诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性的表达。④结论AcSDKP上调了由血清介导的心成纤维细胞MMP-2,MMP-9酶活性表达,这可能与AcSDKP抗心脏纤维化的作用相关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对肺成纤维细胞P38分裂原活化蛋白酶蛋白核转位及其通路活化的调节

目的：观察P38分裂原活化蛋白酶和Ⅰ型、Ⅲ型胶原在肺成纤维细胞的分布与表达，探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对P38MAPK信号转导通路活化的调节与其抗矽肺纤维化作用的关系。方法：培养新生大鼠肺成纤维细胞，分为对照组、转化生长因子-β1（TGF-131）刺激组、通路抑制剂组和AcSDKP干预组。采用激光扫描共聚焦显微镜检测磷酸化P38在肺成纤维细胞的分布与核转位的情况；免疫印迹检测P38MAPK蛋白以及I型、Ⅲ型胶原蛋白的表达；MTT法检测细胞增殖情况。结果：与对照组比较，TGF-131诱导刺激了肺成纤维细胞的磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位，使胞核中磷酸化P38MAPK蛋白荧光强度增加，核浆比值升高，同时肺成纤维细胞增殖以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达上调。而AcsDKP减少了由TGF-β1诱导刺激的磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位，使磷酸化P38MAPK蛋白在胞核的表达减少，核浆比值下降。同时也使细胞增殖下降以及I型、Ⅲ型胶原蛋白的表达下调。这些结果与P38MAPK通路抑制剂具有相同的作用。结论：AcSDKP通过抑制P38MAPK蛋白的核转位阻抑了P38信号转导通路的活化，进而抑制了肺成纤维细胞增殖与胶原蛋白的表达，这可能与AcSDKP抗矽肺纤维化的作用密切相关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β_1介导的心肌成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰一脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β_1(TGF-β_1)介导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的调节作用。方法:采用差速贴壁法获取新生大鼠心肌成纤维细胞;采用MTT法(以OD值反映细胞活性)和~3H-TdR掺入法(以CPM值反映DNA合成)检测心肌成纤维细胞的增殖,采用免疫细胞化学染色法检测心肌成纤维细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:TGF-β_1在1～10ng/ml浓度范围内刺激心肌成纤维细胞增殖较0.4%胎牛血清培养的心肌成纤维细胞有显著性差异(P<0.05)。当加入AcSDKP时,AcSDKP(在10^(-10)～10^(-8)mol/L浓度范围内)随着其浓度的增加,OD值(MTT法)、CPM值(~3H-TdR掺入法)逐渐下降,其相应抑制率逐渐增高,差异均有显著性(P<0.05)。并在10^(-9)mol/L浓度时其抑制作用最佳。结论:AcSDKP对TGF-β_1介导的心肌成纤维细胞增殖有明显抑制作用,这可能与其抗心肌纤维化的作用相关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠肝纤维化模型跨膜信号转导的影响

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对胆总管结扎(BDL)所致大鼠肝纤维化的作用,探讨该作用与TGF-β1-Smad2/3及BMP-7-Smad1/5/8信号通路的关系。方法选取30只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、治疗组(AcSDKP),构建胆总管结扎肝纤维化模型,治疗组在造模的同时植入皮下微泵,给予AcSDKP治疗;第14天处死大鼠,采用ELISA酶联免疫法检测透明质酸(HA)和Ⅲ型胶原(PCⅢ)水平,采用羟脯氨酸(Hyp)测量法定量分析肝组织中总胶原蛋白的含量,采用Western印迹法检测肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形成发生蛋白-7(BMP-7)、磷酸化Smad2/3、磷酸化Smad1/5/8蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组的血清HA、PCⅢ水平以及肝组织Hyp含量均明显升高(P<0.05)。治疗组的血清HA、PCⅢ水平以及肝组织Hyp含量均较模型组显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组的肝组织内TGF-β1、磷酸化Smad2/3表达均高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组的TGF-β1、磷酸化Smad2/3表达低于模型组,BMP-7、磷酸化Smad1/5/8表达高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AcSDKP具有抑制大鼠BDL肝纤维化的作用,该作用可能与抑制TGF-β1通路,并激活BMP-7通路有关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对肌成纤维细胞分化的作用

目的矽肺是我国最严重的职业病之一。文中研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP)对血管紧张素(angiotensin,Ang)Ⅱ诱导的细胞外信号调节激酶信号(extracelluler signal-regulated kinase,ERK1/2)信号和Jun氨基末端激酶信号(Jun N-terminal kinase,JNK)的调控,抑制人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。观察AngⅡ是否经由ERK1/2和JNK信号诱导人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞分化以及Ac-SDKP对此过程的调节作用。方法实验分为5组:对照组(无血清培养基培养)、AngⅡ诱导组(采用100 nmol/L AngⅡ诱导MRC-5细胞)、SP600125干预组(予以JNK信号阻断剂SP600125预处理)、PD98059干预组(ERK1/2信号阻断剂PD98059预处理)和Ac-SDKP干预组(Ac-SDKP预处理)。MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及其上游转录因子血清反应因子(serum response factor,SRF)、p-ERK1/2和p-JNK的定位及表达;Western blot法检测Ⅰ型胶原、α-SMA、SRF和p-ERK1/2、p-JNK的表达水平。结果 AngⅡ诱导组A值(0.56±0.08)为对照组(0.27±0.05)的2.07倍;SP600125干预组、PD98059干预组和Ac-SDKP干预组A值分别为(0.39±0.02)、(0.40±0.03)、(0.36±0.05)与AngⅡ诱导组(0.56±0.08)比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);AngⅡ诱导组的Ⅰ型胶原、α-SMA、SRF蛋白水平明显上调,分别是对照组的4.50、3.50和3.00倍;AngⅡ诱导组能够上调p-JNK和p-ERK1/2的表达,分别是对照组的6.71和7.90倍;而Ac-SDKP干预组能够抑制p-JNK和p-ERK1/2的表达,分别是AngⅡ诱导组的29.79%和46.84%。结论Ac-SDKP能够通过对AngⅡ介导的ERK1/2信号、JNK信号的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞c-Jun氨基末端激酶通路活化的影响

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成以及c-Jun氨基末端激酶表达的影响。方法选用新生Wistar大鼠心脏成纤维细胞作为实验研究材料,MTT法检测心脏成纤维细胞代谢活性的改变,免疫细胞化学法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的改变,Western Blotting检测大鼠心脏成纤维细胞中磷酸化JNK(p-JNK)和JNK蛋白及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果 10μg/L血小板源生长因子刺激下,代表大鼠心脏成纤维细胞代谢活性的OD值增加,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达增强,表明血小板源生长因子刺激了心脏成纤维细胞增殖,促进了胶原的合成。同时p-JNK蛋白表达增高,而JNK蛋白表达无明显改变。10-9mol/LAcSDKP能够抑制血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞代谢活性,同时抑制了Ⅰ型、Ⅲ型胶原及p-JNK蛋白的表达,而JNK蛋白表达无明显改变。结论 AcSDKP能够通过阻断血小板源生长因子介导的JNK通路激活进而抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸调节α-微管蛋白乙酰转移酶1抑制矽肺纤维化

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)能否通过对α-微管蛋白乙酰转移酶1(α-TAT1)调节而发挥抗矽肺纤维化作用。方法Wistar大鼠随机分为3组:对照组、矽肺模型组、Ac-SDKP处理组,每组6只。原代培养大鼠的肺成纤维细胞分为5组:对照组、转化生长因子(TGF-β1)诱导组、Ac-SDKP预处理组(TGF-β1+Ac-SDKP)、α-TAT1沉默组(α-TAT1-siRNA+TGF-β1+Ac-SDKP)、α-TAT1过表达组(α-TAT1-cpDNA+TGF-β1+Ac-SDKP)。免疫组化检测大鼠肺组织中α-TAT1的表达与分布,Western blot检测大鼠肺组织及大鼠肺成纤维细胞中I型胶原(Col I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、乙酰化微管蛋白-α(Ac-Tubα)、α-TAT1蛋白的表达水平。结果矽肺模型组大鼠的肺组织中出现矽结节,α-TAT1在矽结节中表达缺失,Western blot结果显示,矽肺模型组和TGF-β1诱导的肺成纤维细胞中Col I和α-SMA蛋白表达上调,Ac-Tubα和α-TAT1蛋白表达下调。Ac-SDKP治疗可抑制该变化。Ac-SDKP对Col I、α-SMA表达抑制效应可被α-TAT1-siRNA阻断,而α-TAT1过表达可加强Ac-SDKP对Col I、α-SMA表达的抑制作用。结论Ac-SDKP通过调节α-TAT1的表达抑制肌成纤维细胞分化,发挥抑制矽肺大鼠肺纤维化的作用。