检测阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的临床应用评估

目的对化学法检测阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的临床应用进行评估。方法在自动化仪器上用化学法检测200例患者阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶,同时对受检样本进行假丝酵母菌的培养鉴定。结果β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶阳性110例,阴性90例,培养出白色假丝酵母菌阳性69例。以培养法为标准,化学法检测阴道分泌物中白色假丝酵母菌的灵敏度、特异性、阳性预示值、阴性预示值分别为:62.3%、48.9%、39.0%、71.1%。结论化学法还不能作为检测阴道分泌物中白色假丝酵母菌阳性的过筛试验。

利用N-乙酰葡糖胺糖苷酶在乳酸乳球菌表面展示超氧化物歧化酶

分别将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因(acmA)的信号肽序列(ss)、C-末端结构域(cA)及全长基因,与来自大肠杆菌(Escherichiacoli)的超氧化物歧化酶(SOD)基因sod构建成融合基因ss-cA-sod和acmA-sod,并连接于表达载体pMG36K,然后导入乳酸乳球菌ATCC11454菌株,获得了能在细胞表面展示SOD的重组工程菌MB193和MB194。经SDS-PAGE验证,重组菌MB193和MB194可分别表达产生分子量约为46和64kD的融合酶蛋白cA-SOD和AcmA-SOD。通过黄嘌呤氧化酶法测定MB193和MB194菌株的全细胞Mn-SOD酶活力分别为(2.63±0.51)U/mL和(3.51±0.64)U/mL,明显高于仅在细胞内表达产生SOD的对照重组菌MB192的酶活性(1.53±0.38)U/mL,且表达融合酶AcmA-SOD的重组菌MB194具有最大的表面展示效率(56.4%)。

N-乙酰-β-D氨基葡糖苷酶在肾病早查中的临床意义

目的探讨N-乙酰-β-D氨基葡糖苷酶(NAG)检测在肾病早查中的临床意义。方法分析28例IgA肾病患者的临床及病理资料,探讨肾小球及间质病理损害程度与NAG的关系。结果肾小管间质损害情况:肾小管间质损害轻度者占46.43%,中重度者占32.14%,无肾小管间质损害者21.43%。肾小管间质损害与NAG的关系:肾小管间质损害中、重度者尿NAG酶(5.141±1.821)U/(mmol.cr);小管间质损害轻度者尿NAG酶(1.659±1.485)U/(mmol.cr);无肾小管间质损害者尿NAG酶(1.447±1.816)U/(mmol.cr)。小管间质中重度损害者同其他两组比较,其尿NAG酶有显著统计学差异,P<0.05。结论 IgA肾病常合并小管间质损害,肾小管功能中尿NAG酶改变与肾脏小管间质损害程度成对应关系。

血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验在诊断2型糖尿病早期肾损伤中的应用

目的探讨血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验在诊断2型糖尿病早期肾损伤中的应用。方法选择2018年1月~2019年6月我院收治的50例2型糖尿病早期肾损伤患者作为为研究组,另选取同时间段收治的50例单纯2型糖尿病患者作为对照1组,另选取同时间段来我院进行常规体检的50例自愿者作为对照2组。三组均接受血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验诊断,并进行比较分析。结果研究组的糖尿病病程长于对照1组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的空腹血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值水平均高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的糖化血红蛋白、N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶水平均高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的血清C肽水平低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的空腹血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值水平均高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的糖化血红蛋白、N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶水平均高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的血清C肽水平低于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在临床检查诊断糖尿病早期肾损伤过程中,应用血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验方法可以起到有效作用,能够提供准确检查诊断参考依据,具有重要应用价值。

糖尿病患者血尿酸、肌酐及尿N-乙酰-β-D氨基葡糖苷酶的相关性研究

目的探讨糖尿病(DM)患者血尿酸、血肌酐、尿N-乙酰-β-D氨基葡糖苷酶(NAG)测定的相关性。方法检测62例糖尿病患者[尿微量白蛋白正常(尿微量白蛋白<30mg/24h)41例(DM-1组)、升高(30mg/24h<尿微量白蛋白<300mg/24h)21例(DM-2组)]血生化(尿酸、肌酐)指标及尿NAG水平,并对尿NAG与血生化指标(尿酸、肌酐)的相关性进行分析。结果 DM-2组尿NAG均显著高于DM-1组(P<0.01),其升高与血尿酸呈正相关,与血肌酐无明显相关性。结论尿NAG在早期预测与筛选糖尿病肾病(DN)方面灵敏度高,是DN的早期诊断有价值的指标。

链球菌gordonii FSS2 N-乙酰氨基葡糖苷酶基因的克隆和表达

目的 :N -乙酰氨基葡糖苷酶 (N -acetylglucosaminidase)是链球菌gordonii六种胞外糖苷酶之一。为研究该酶 ,克隆和表达该基因片段。方法 :将链球菌gordoniiFSS2染色体DNA分离提纯 ,用限制性内切酶Sau 3AI不完全酶切 ,产生长度不等的随机片段 ,琼脂糖凝胶电泳分离和回收 2 - 8kpb的随机片段 ,然后与BamHI线性化及 5’端脱磷处理的载体pUC 18连接 ,转化大肠杆菌XL1-Blue;β—半乳糖苷酶筛选系统及酶切 ,检测插入片段。根据N -乙酰氨基葡糖苷酶与特异人工底物X -GlucNac反应 ,有色物质X被释放原理 ,筛选表达克隆。结果 :共有 6×10 6个转化子 ,约 5 0 %转化子含有插入片段 ;检测到 8个N—乙酰氨基葡糖苷酶表达克隆。结论 :所构建的基因组文库具有完整性 ,该基因在大肠杆菌XL1-Blue中成功表达。

用中国仓鼠卵巢细胞构建内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶筛选系统

糖苷水解酶85家族的内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶具有糖基转移酶活性,利用该类酶,可以合成特定结构N-糖链修饰的糖基化复合物。为构建糖基转移酶筛选系统,将N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的跨膜定位区域与绿色荧光蛋白融合表达,成功把带有天冬酰胺连接糖基化位点的单体增强绿色荧光蛋白定位到中国仓鼠卵巢细胞的高尔基体中。流式细胞仪分析显示,融合了定位区域后,绿色荧光蛋白仍可以发出荧光,且在引入糖基化位点后,细胞荧光强度约降低10倍。经衣霉素处理,细胞糖基化被抑制,同时荧光强度减弱。此细胞株荧光强度对于糖基化水平的依赖性表明其在糖基转移酶的进化筛选方面的应用潜力。

转化N-乙酰-D-葡糖胺产油真菌的筛选

对21株真菌利用甲壳素解聚产物N-乙酰-D-葡糖胺(NAG)为碳源积累油脂的能力进行了筛选。碳源同化实验得到可同化NAG的真菌7株,进一步筛选出能利用NAG积累油脂的酵母3株。摇瓶实验表明,C.albidus ATCC 56298和T.fermentans CICC 1368利用NAG发酵菌体油脂含量可分别达到67%和48%。气相色谱分析表明菌油富含棕榈酸、硬脂酸和油酸,与常规植物油脂的脂肪酸组成相似。研究结果拓宽了微生物油脂发酵的原料。

简并引物法克隆保加利亚乳杆菌β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因

β-N-乙酰氨基己糖苷酶(β-Hexcase)在细菌、植物和动物中广泛存在,具有典型的外切酶活性并可以催化切除β-N-乙酰氨基己糖的非还原性氨基己糖残基,在细菌细胞分裂中具有重要作用.选取与保加利亚乳杆菌LJJ亲缘关系近的菌种的β-N-乙酰氨基己糖苷酶蛋白序列,利用ICO-DEHOP和CODEHOP在线简并引物设计软件设计β-Hexcase简并引物,选取Hex1-f和Hex1-r引物对,以LJJ基因组DNA为模板经PCR扩增得到614 bp产物.PCR产物连接pGEM-T质粒载体后克隆至大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆提取质粒进行测序.测序结果显示产物长度为614 bp,该DNA序列经blastx比对发现与其他已知β-Hexcase基因具有相似性,表明所克隆的序列即为LJJβ-Hexcase的基因片段.β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因的获得为进一步研究β-N-乙酰氨基己糖苷酶与保加利亚乳杆菌自溶的关系奠定了基础.

2型糖尿病患者尿N-乙酰-β—D一氨基糖苷酶和尿微量白蛋白联合检测在早期肾损伤诊断中的价值

目的探讨尿N-乙酰-β-D-氨基糖苷酶（尿NAG）、尿微量白蛋白（尿MAlb）对2型糖尿病早期肾损伤的诊断价值。方法2型糖尿病组60例，正常X,JN组30名，分别用速率法和免疫透射比浊法检测尿NAG、尿Malb。结果糖尿病组尿NAG20．14±13．3U／L、尿MAlb39．8±33．Img／L，对照组分别为5．34±1．2U／L、4．4±2．3mg／L，糖尿病高组于正常对照组3～9倍，，检验差别有高度统计意义（P〈0．01）；糖尿病组尿NAG阳性率88．3％、尿MA｜b81．6％，X^2检验差异无显著性（P〉0．05）；两两比较尿NAG、尿MAIb各自灵敏度100％、90．7％；特异性87．8％、100％；准确性均为94．4％。结论尿NAG、尿MAIb联合检测可提高糖尿病早期肾损伤诊断的敏感性与特异性。

O-连接的N-乙酰葡糖胺糖蛋白的研究进展

O-连接的N-乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)修饰是普遍存在的翻译后修饰。已有许多的蛋白被发现是O-GlcNAc蛋白。目前,许多分析方法可以检测O-GlcNAc,将其从内膜系统的多种糖基化中区分出来。O-GlcNAc修饰在细胞事件中发挥着重要的功能,O-GlcNAc的调控异常可能会引起某些人类疾病,如癌症、阿尔茨海默病和II型糖尿病。杆状病毒GP41蛋白也是糖蛋白,它介导芽殖型病毒粒子(budded virus,BV)的核衣壳通过胞核。O-GlcNAc的调控研究为探讨GP41蛋白O-Glc-NAc的调控作用提供了参考模式。

壳聚糖及N-乙酰-D-葡糖胺在食品工业中的应用前景广阔

本文叙述了壳聚糖及N-乙酰-D-葡糖胺的性质、用途、国内外生产概况、生产方法及市场前景。

急性脑出血患者N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶:β-D-半化糖苷酶变化及意义

目的：了解急性脑出血对肾脏的损害。方法：检测９４例急性脑出血患者血ＢＵＮ和尿ＮＡＧ、ＧＡＬ。结果：发现ＮＡＧ、ＧＡＬ全部升高。成人组较婴儿组升高明显（Ｐ＜０．０１）。ＢＵＮ升高者２４例，占２５．５３％，ＢＵＮ升高组与ＢＵＮ正常组两种尿酶升高程度相差显著（Ｐ＜０．０１，＜０．０５）。结论：提示在急性脑出血患者有不同程度的肾功能损害，尿酶ＮＡＧ。

窖蛋白-1通过增强氧连接的N-乙酰葡糖胺糖基转移酶表达诱导小鼠肝癌细胞的迁移和侵袭

窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是胞膜窖的主要结构和功能蛋白质,参与调控多种细胞信号转导过程。然而,Cav-1调节蛋白质糖基化修饰和肿瘤转移作用机制尚不明确。本研究在小鼠肝癌细胞中证明,Cav-1能够促进蛋白质的氧连接的N-乙酰葡糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)糖基化及其O-GlcNAc转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)的表达,增强了小鼠肝癌细胞的迁移和侵袭潜能。RT-qPCR、Western印迹和双荧光素酶报告基因结果显示,Cav-1通过下调转录因子RUNX2表达,抑制了miR24的转录(P<0.05)。随后研究结果表明,miR24能够靶向Ogt mRNA 3′-UTR并抑制其表达(P<0.05)。这使得Cav-1通过RUNX2/miR24正向调控OGT的表达和O-GlcNAc糖基化,最终导致小鼠肝癌细胞迁移和侵袭潜能增加。这些结果揭示了Cav-1调控糖基转移酶OGT表达和蛋白质O-GlcNAc糖基化的新机制,为肝癌的发生发展机制研究提供了新的理论和实验依据。

拟南芥甘露糖苷酶Ⅰ和人N-乙酰葡萄糖胺转移酶Ⅰ的原核表达及其多克隆抗体制备

目的:在大肠杆菌中分别重组表达拟南芥甘露糖苷酶Ⅰ(ATMDSI)和人N-乙酰葡萄糖胺转移酶I(HsGnTI),制备其多克隆抗体,为基因表达鉴定提供检测抗体。方法:用PCR方法克隆ATMDSI、HsGnTI基因片段,连接至pBV220表达载体后转化大肠杆菌DH5α,获得表达菌株,通过42℃升温诱导表达,制备纯化ATMDSI和HsGnTI;纯化的蛋白以80μg/kg的剂量免疫大耳白兔,经3次免疫后,采集血清制备其相应的多克隆抗体;采用Western印迹检测多克隆抗体的特异性。结果:获得ATMDSI和HsGnTI基因片段,并构建了其相应的原核表达载体pBV220-ATMDSI、pBV220-HsGnTI,在大肠杆菌中表达了重组ATMDSI和HsGnTI,SDS-PAGE分析显示其相对分子质量分别为45.3×103和46.9×103,与理论值一致;用纯化的蛋白免疫大耳白兔后制备了抗ATMDSI、HsGnTI多克隆抗体,Western印迹结果证明该抗体具有较高的特异性。结论:获得了特异性较高的抗ATMDSI、HsGnTI多克隆抗体血清,为甘露糖苷酶Ⅰ和N-乙酰葡萄糖胺转移酶Ⅰ的研究提供了检测抗体。

O-连接N-乙酰葡糖胺转移酶抑制剂的筛选与活性分析

利用药物发现软件Discovery Studio 4.5(DS),以基于结构的虚拟筛选天然产物化合物库的方法,获得O-连接N-乙酰葡糖胺转移酶(OGT)天然产物抑制剂阿曼托双黄酮(AF).AF能够在体外抑制OGT的酶活.分子动力学(MD)模拟实验结果表明,AF能够稳定结合在OGT蛋白的底物结合口袋中,并与口袋附近多个氨基酸形成氢键.细胞内活性检测结果表明,AF能够有效抑制蛋白质的O-GlcNAc修饰,具有良好的OGT抑制活性.

甲壳胺及N—乙酰葡糖胺抑制人成纤维细胞增殖的研究

本文报道了甲壳胺及N—乙酰葡糖胺对体外培养的人成纤细胞的抑制作用以及甲壳胺在动物体内的生物降解。研究结果表明,N—乙酰葡糖胺和甲壳胺的抑制作用分别为ID_(50)=16.35mg/L,和ID_(50)=69.59mg/L;经过25d和18d兔体内埋植观察,甲壳胺分子量下降分别约为17％和6％。这一现象提示,甲壳胺在长效抑制人纤维增殖方面有潜在的应用价值。

O连接N-乙酰葡萄糖胺糖基化修饰在神经退行性疾病中的研究进展

O连接N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)糖基化是一种由O-键连接的乙酰氨基葡萄糖和胞内蛋白上的丝氨酸/苏氨酸残基形成的蛋白质翻译后修饰。O-GlcNAc糖基化修饰在脑内普遍存在,其与转录、翻译和蛋白稳态等关系密切。O-GlcNAc糖基化修饰参与多种神经系统变性疾病的发生发展,但其调控机制尚不清楚。现就O-GlcNAc糖基化修饰与神经系统退行性病变的关系作一综述。

葡糖酰胺(O-GlcNAc)修饰:细胞内糖基化的前世今生

糖基化是一种古老的蛋白质翻译后修饰,常见于细胞外的糖被结构和细胞内部的内质网和高尔基体内。近年来,一种细胞内的糖基化修饰逐渐被大家所认识,这就是氧连接的N-乙酰葡糖胺(O-linkedβ-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)。它是唯一发生在细胞内的参与信号转导的糖修饰,一般发生于细胞质和细胞核中。自从20世纪80年代发现O-GlcNAc以来,生物学家和化学家一直在研究它修饰的位点和行使的生物学功能。O-GlcNAc修饰发生在丝氨酸和苏氨酸上,因此可以与磷酸化之间形成阴阳关系并参与信号转导过程。但由于其低丰度易水解的特点导致难以鉴定位点,又使研究人员难以见其真容。本文将回顾O-GlcNAc修饰的发现历史,介绍近年来发展的化学生物学手段对其位点的鉴定,并着重阐释该修饰在细胞周期以及表观遗传等生物过程中的功能。随着学科交叉及质谱技术的发展,古老而弥新的糖基化修饰将绽放出新的花蕾。

高原红细胞增多症患者尿白蛋白和N-乙酰-β-D-氨基葡糖苷酶的排泄变化

目的:对海拔高度3 300m(刚察县)高原红细胞增多症(HAPC)患者尿白蛋白(ALB)和N-乙酰-β-D-氨基葡糖苷酶(NAG)的排泄变化进行了观察并探讨了可能的机制变化。方法:对海拔高度3 300m HAPC患者38例和健康人115例分别采用尿蛋白酶标免疫法、邻苯三酚自氧化法、TBA和酶法检测了尿ALB、NAG、红细胞滤过指数(EFl)、红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和血浆丙二醛(MDA)含量。结果:HAPC患者尿ALB、NAG、血浆MDA含量和EFI明显高于同海拔健康组,而红细胞SOD活性明显低于同海拔健康组;相关和多因素逐步回归分析表明,尿ALB和NAG与EFI呈正相关,而与血浆MDA含量、红细胞SOD、血红蛋白、红细胞、红细胞压积水平无明显相关。结论:红细胞变形能力(ED)对尿ALB和NAG存在独立影响,HAPC患者机体脂质过氧化反应增强,可能导致ED降低,造成肾内微循环障碍,可能是尿ALB和NAG含量产生增多的病理生理机制之一。