N-(3,4-二甲氧基肉桂酰)邻氨基苯甲酸介导小鼠皮肤移植免疫负向调节的作用及机制研究

目的研究N-(3,4-二甲氧基肉桂酰)邻氨基苯甲酸[N-(3,4-dimethoxycinnamonyl)anthranilic acid,3,4-DAA]在小鼠皮肤移植中的免疫负调节作用,并探索其发挥作用的机制。方法 体外实验中,取同种异基因小鼠皮肤移植7d后的BALB/C小鼠脾脏制得淋巴细胞单细胞悬液,一半用四甲基偶氮唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测小鼠脾脏淋巴细胞生长抑制率;另一半分为3组,分别加入RPMI1640培养液10μl(c1组)、3,4-DAA100μmol/L(c2组)、加入3,4-DAA200μmol/L(c3组),培养72h,进行病理学检查。同时用蛋白免疫印迹法检测吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)表达水平、用反相高压液相质谱法测定IDO活性。体内实验中,应用不同浓度3,4-DAA或合并使用西罗莫司进行药物干预,皮肤移植后10d取移植皮片行病理检查,用蛋白免疫印迹法检测脾脏淋巴细胞单细胞悬液中IDO的表达水平,用反相高压液相质谱法测定移植小鼠血清的IDO活性。结果 体外实验中,MTT检测结果示3,4-DAA对小鼠脾脏淋巴细胞增殖有抑制作用,呈现明显的剂量效应关系(P<0.05～P<0.01);在倒置显微镜下观察,与c1组比较,c3组、c2组皮肤移植小鼠的脾脏淋巴细胞悬液中的淋巴细胞生长明显受抑制,且c3组的淋巴细胞生长抑制较之c2组更显著,显示3,4-DAA有抑制脾脏淋巴细胞生长的作用。体内实验中,给予3,4-DAA处理组小鼠移植皮肤免疫损伤程度明显减轻。体外实验与体内实验结果示3,4-DAA处理组IDO表达水平、IDO活性较空白对照组均明显提高(P<0.05～P<0.01)。结论 3,4-DAA能够抑制小鼠皮肤移植排斥反应,显著减轻移植物排斥损伤,其作用机制是通过增强IDO活性实现的。

丙烯酸(4-N,N-二甲氨基肉桂酰氧乙基)酯及其水溶性聚合物的合成及其光化学性质研究

合成了一种新型感光性单体丙烯酸(4 N,N 二甲氨基肉桂酰氧乙基)酯(DMACEA)及其与丙烯酸的共聚物P(DMACEA co AA).用紫外吸收和荧光光谱研究了聚合物溶液的光敏感性,用傅立叶红外光谱研究了聚合物成膜后的光交联性及其过程.结果表明:DMACEA具有较好的光敏性,P(DMACEA co AA)具有较好光交联性,交联膜水溶胀和透光性也较好.

甲基丙烯酸N,N-二甲氨基乙酯与丙烯酰β-环糊精共聚水凝胶的合成及其性能研究

用不同的方法合成了两种结构不同的丙烯酰 β 环糊精酯 (β CD 3 A和 β CD 6 A) ,以此为单体与甲基丙烯酸N ,N 二甲氨基乙酯 (DMAEMA)通过氧化还原自由基引发聚合 ,合成出两类含 β 环糊精结构单元的新型水凝胶 .用核磁共振 ,红外光谱及元素分析对两种单体及共聚物的结构和组成进行了表征 .溶胀实验结果表明 ,两类水凝胶均具有较好的pH、温度及离子强度敏感性 ,且因其交联网络结构不同 。

N-（3，4-二甲氧基肉桂酰）邻氨基苯甲酸在肝移植术后抑制急性排斥反应的作用

【摘要】目的观察N（3，4-二甲氧基肉桂酰）邻氨基苯甲酸（3，4-DAA）对大鼠肝移植急性排斥反应的预防作用。方法以Wistar大鼠为供体，sD大鼠为受体，建立大鼠肝移植模型，随机分为4组。A组：对照组（n=22），B组：3，4-DAA400mg／（kg·d）组（n=22），C组：环孢素A（CsA）5mg／（kg·d）组（n=22）。D组：3，4-DAA400mg／（kg·d）＋CsA5mg／（kg·d）组（n=22）。各组于手术当天起连续口服给药，分别于术后第3、5、7天处死受体，收集血液行肝功能检测并观察肝组织病理学变化。各组另随机选4只受体观察生存时间。结果（1）4组受体平均生存时间分别为（11．3±1．7）、（16．0±0．8）、（21．5±1．7）、（26．5±1．3）d，B组与A组比较生存时间延长，差异有统计学意义（P〈0．01）；D组受体存活时间最长，与A、B、C3组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）B组大鼠术后各时间外周血谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总红胆素（T—BIL）值均低于A组（P〈0．05）。D组各时间点AIJT、AST、T-BIL值低于A、B、C组（P〈0．05）。（3）术后第7天肝脏排斥活动指数B组明显低于A组（P〈0．05），D组得分最低，与A、B、C组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论3，4-DAA能抑制大鼠肝移植术后急性排斥反应，与CsA合用具有协同作用。

人尿中对乙酰氨基苯甲酸和N,N-二甲氨基-2-丙醇的液质联用法测定及尿药排泄特征研究

目的:建立分别测定人尿中对乙酰氨基苯甲酸和N,N-二甲氨基-2-丙醇的液质联用法,考察二者在中国健康受试者尿液中的排泄特征。方法:以LC-MS法测定尿样中对乙酰氨基苯甲酸,色谱采用Amethyst C18柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(25∶75),流速为0.4 mL.min-1;质谱采用气动辅助电喷雾离子化和正离子选择性离子检测。以LC-MS/MS法测定尿样中N,N-二甲氨基-2-丙醇,色谱采用Hedera CN柱(150 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-5 mmol.L-1醋酸铵水溶液(含0.03%甲酸)(55∶45),流速为0.35 mL.min-1;质谱采用气动辅助电喷雾离子化和正离子多反应检测。10名受试者单次口服异丙肌苷片(1.0 g),测定对乙酰氨基苯甲酸和N,N-二甲氨基-2-丙醇的尿药排泄参数。结果:对乙酰氨基苯甲酸的尿药浓度在0.202 0～202.0 mg.L-1范围内线性关系良好,平均回收率大于97.7%;N,N-二甲氨基-2-丙醇尿药浓度在0.797 8～398.9 mg.L-1范围内线性关系良好,平均回收率大于99.1%。受试者服药后,对乙酰氨基苯甲酸和N,N-二甲氨基-2-丙醇分别在6和12 h后基本随尿排泄完全,36 h内其平均尿药累积排泄百分率分别为(30.7±5.7)%和(49.0±8.6)%。结论:本法适用于人尿中对乙酰氨基苯甲酸和N,N-二甲氨基-2-丙醇的测定及其尿药排泄特征研究。

二甲亚砜对黄粉虫NAGase活力的影响

研究二甲亚砜(DMSO)对黄粉虫(Tenebrio molitorLinnaeus)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力(NAGase)的影响.结果表明:该酶的剩余活力随着二甲亚砜浓度增大而呈指数下降,导致酶活力丧失50%的二甲亚砜的浓度(抑制半衰期,IC50)为5%,说明二甲亚砜对黄粉虫NA-Gase有明显的失活作用.该酶的失活过程属于可逆过程,抑制机理表现为混合型抑制类型,进一步测定游离酶(E)和底物络合物(ES)与二甲亚砜的结合常数(KI和KIS),分别为6.12%和26.2%,KI<KIS,说明底物存在对酶被二甲亚砜的失活作用有一定的保护作用.

二甲亚砜对中国鲎NAGase的抑制作用

节肢动物的周期性蜕皮与N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase)密切相关。从中国鲎内脏分离提取N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶,利用酶抑制作用动力学方法研究二甲亚砜对中国鲎N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响。试验结果显示:二甲亚砜对中国鲎N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶有较强的抑制作用,0.1 mol/L二甲亚砜可使酶活性下降38.0%,该抑制作用为可逆过程;动力学研究显示,二甲亚砜对N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制作用是属于竞争性-非竞争性混合型抑制,二甲亚砜对游离酶(E)的抑制常数(K_(I))和对酶-底物络合物(ES)的抑制常数(K_(I)S)分别为0.200 mol/L和1.063 mol/L,K_(I)<K_(I)S,表明底物对N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶在二甲亚砜溶剂中的失活具有保护作用,随着底物浓度增大,二甲亚砜对酶的失活作用降低;酶蛋白的紫外吸收光谱和内源荧光发射光谱显示,随着二甲亚砜溶剂浓度升高,N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶酶蛋白紫外吸收值亦在升高,但其内源荧光发射强度减弱,两者峰值均无位移,在0.65 mol/L二甲亚砜溶剂中酶蛋白荧光强度接近于0,表明N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶在二甲亚砜溶剂中蛋白空间构象发生了变化导致了酶失活现象。试验结果表明,二甲亚砜对中国鲎N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶发挥明显的抑制作用,这可能会进一步影响中国鲎的蜕皮。

原子转移自由基聚合制备聚甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯及其嵌段共聚物

以CuCl/N-苄基-2-吡啶基甲亚胺(NBPM)/2-溴异丁酸乙酯(EBrIB)作为引发催化体系,使甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯(MASI)进行ATRP聚合,得到的聚甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯(PMASI)具有较高的单体转化率(90%)、较窄PDI(~1.10)和较高的分子量。在整个聚合过程中,较强的C—Cl键仍使聚合物的端基保持活性,有利于与第二单体甲基丙烯酸(N,N-二甲氨基)乙酯(DMAEMA)嵌段共聚形成结构明确的嵌段共聚物P(MASI-b-DMAEMA)。当MASI的链长较短时,P(DMAEMA40-b-MASI16)具有水溶性并可自组装成直径均匀的核-壳型微胶束,间接证明了聚合过程的可控特征。

水杨酸甲酯的合成新方法

以水杨酸和甲醇为原料催化合成水杨酸甲酯的实验中,考察了对甲苯磺酸、浓硫酸和N,N-二环己基碳酰亚胺(DCC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)等在反应中的催化活性。结果表明,DCC/DMAP的催化活性高,是较好的酯化反应催化剂,适用于催化合成水杨酸甲酯。还考察了醇酸摩尔比、反应时间和反应温度等条件对合成水杨酸甲酯产率的影响。以DCC/DMAP为催化剂,甲醇与水杨酸摩尔比为1.2∶1,在20℃下反应4h,水杨酸甲酯的收率可达到80.2%。

苯磺酰脲类除草剂合成

以N-正丁基-2-甲酯基-5-甲基苯磺酰胺和N-(4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)苯基氨基甲酸酯为主要原料合成了N-(4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)-N-(5-乙酰胺甲基-2-甲酯基苯磺酰基)脲。N-正丁基-2-甲酯基-5-甲基苯磺酰胺与N-溴琥珀酰亚胺反应,得到N-正丁基-5-溴甲基-2-甲酯基苯磺酰胺,产率60％;N-正丁基-5-溴甲基-2-甲酯基苯磺酰胺和叠氮化钠反应得N-正丁基-5-叠氮甲基-2-甲酯基苯磺酰胺,产率73％;N-正丁基-5-叠氮甲基-2-甲酯基苯磺酰胺经催化加氢得N-正丁基-5-氨甲基-2-甲酯基苯磺酰胺,产率75％;N-正丁基-5-氨甲基-2-甲酯基苯磺酰胺用乙酰氯酰化得N-正丁基-5-乙酰胺甲基-2-甲酯基苯磺酰胺,产率90％;N-正丁基-5-乙酰胺甲基-2-甲酯基苯磺酰胺经取代得5-乙酰胺甲基-2-甲酯基苯磺酰胺,产率77％;5-乙酰胺甲基-2-甲酯基苯磺酰胺和N-(4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)苯基氨基甲酸酯缩合,得到N-(4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)-N-(5-乙酰胺甲基-2-甲酯基苯磺酰基)脲,产率63％。

烯酰基-辅酶A水合酶催化机理的理论研究

采用DFT方法研究了烯酰基-辅酶A(ECH)催化的4-(N,N-二甲氨基)-肉桂酰-辅酶A(DAC-CoA)和巴豆酰基-辅酶A(Crotonyl-CoA)水合反应.计算表明:水合反应以分步机理进行,经历一个烯醇负离子中间体.Glu164残基作为唯一的催化碱/酸参与水合反应,而Glu144虽然没有直接参与反应,但是它能通过氢键作用诱使水分子以合适的朝向活化底物.Crotonyl-CoA底物的水加成活性高于DAC-CoA.Ala98和Gly141与底物羰基之间的氢键作用既有利于底物的准确结合,也能有效稳定反应中形成的过渡态和中间体.另外,Glu144和Glu164周围的氢键网络对于合理维持活性位点排布进而有效促进底物活化也很重要.

锯缘青蟹NAGase在DMSO溶液中的失活动力学

以二甲亚砜(DMSO)为效应物,研究其对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明,酶的剩余活力随着DMSO浓度增高而迅速下降,当DMSO浓度达4.0 mol/dm3时,酶活力几乎完全丧失.该酶在低于2 mol/dm3的DM-SO溶液中的失活作用表现为可逆过程.导致酶活力丧失50%的DMSO浓度(IC50)为0.75 mol/dm3.应用酶失活过程的底物反应动力学方法测定了游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)在不同浓度DMSO溶液中的微观失活速度常数k+0和k+′0,k+0明显大于k+′0,说明游离酶较酶-底物络合物对DMSO更为敏感,底物对酶被DMSO失活有保护作用.随着DMSO浓度增加,逆向微观复活速度常数k-0不断下降,这说明NAGase在高浓度DMSO中失活的可逆性减弱.

多肽在金纳米粒子表面偶联反应效率研究

通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化反应将多肽偶联到金纳米粒子表面,采用荧光光谱研究其形成的酰胺键的反应偶联效率。考察了实验条件,包括缓冲液的种类(HEPES、Tris-HCl、硼酸、PBS缓冲液)、pH值(pH 6.5~9.0)、缓冲液浓度(10,25,40和50 mmol/L)、NHS和EDC的浓度(NHS 0.2~1.0 mol/L,EDC 0.01~0.5 mol/L)及二者比例(0,0.5,1.0,2.0和2.5)、偶联反应时间(4,8,12,24和36 h)等对偶联效率的影响,筛选出最佳实验条件。实验结果表明,25 mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液(pH 7.0),NHS/EDC浓度为0.4 mol/L/0.2 mol/L和24 h的反应时间为EDC-NHS活化反应将多肽偶联到金纳米粒子上的最佳实验条件。本研究结果可为相关研究提供技术参考。

枸橼酸托瑞米芬的中间体合成工艺改进

目的:研究了抗肿瘤药物枸橼酸托瑞米芬的中间体1,2-二苯基-1-[4-[2-(N,N-二甲胺基)乙氧苯基]]-1,4-丁二醇的合成工艺改进。方法:以4-羟基二苯甲酮为原料经过取代与加成两步反应合成了目标物,并进行工艺的优化实验。结果:中间体合成工艺得到改进和优化,两步收率合计55.4%。结论:研究出了一条生产成本低,反应温和,操作简单的枸橼酸托瑞米芬的中间体合成工艺。

丙烯酸接枝对酶法制备丝素基吸水材料的影响

为提高丝素表面接枝共聚乙烯基单体的效率从而通过酶法制备丝素蛋白基吸水复合材料,首先借助EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)/NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)交联体系进行丙烯酸(AA)与丝素蛋白(SF)的接枝,通过丙烯酸上的羧基与丝素蛋白上的氨基反应使丝素蛋白上引入双键,提高丝素蛋白表面的接枝聚合反应位点。之后再进行辣根过氧化物酶(HRP)体系催化丝素蛋白与丙烯酸、丙烯酰胺(AM)以及交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)的共聚反应,最终生成再生丝素吸水复合材料。通过多种方法测定丝素溶液中游离氨基含量的变化、接枝前后溶液中丙烯酸含量的变化,分析不同条件下制得的丝素膜材料的形态,评价复合材料的吸水、保水、重复吸水和缓释性能。实验结果表明,丝素蛋白能通过EDC/NHS接枝引入丙烯酸单体;丙烯酸接枝后的和未接枝的丝素蛋白与丙烯酸和丙烯酰胺共聚制得的吸水复合材料相比,具有更好的吸水、保水性和重复吸水性能,较快的包载能力和较好的热稳定性能。

两种两性高分子絮凝剂处理印染废水的研究

采用水溶液聚合方法制备两种两性高分子絮凝剂p(DMDAAC-co-FA)和p(DMC-co-DMAEMA-coAMPS)。对两种共聚合产物进行了傅里叶红外光谱(FT-IR)结构表征。用两种絮凝剂对印染废水进行絮凝试验的结果显示,絮凝剂p(DMDAAC-co-FA)在pH^7、投加量120 mg·L^(-1)时,CODCr去除率79.2%,色度去除率95.0%;絮凝剂p(DMC-co-DMAEMA-co-AMPS)在pH^7、投加量140 mg·L^(-1)时,CODCr去除率75.3%,色度去除率92.0%。通过对絮凝试验的絮体进行电镜扫描分析,采用非线性数学分形理论盒子法计算絮体形貌的空隙分维数Df,结果表明,絮体形貌的空隙分维数理论计算值与试验结果相符。

健康受试者口服异丙肌苷片的药动学

目的研究健康受试者口服异丙肌苷片(1.0 g)的药动学特征,并考察高蛋白高脂肪食物对其药动学的影响。方法采用随机双周期交叉设计,12名健康受试者(男女各半),随机分为2组,I组空腹、II组进食后均分别口服异丙肌苷片(1.0 g),服药后0～24 h内间隔采集血样,停药1 wk后进行交叉试验。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)和高效液相色谱法(HPLC)分别测定血浆中N,N-二甲氨基-2-丙醇(Dip)和4-乙酰氨基苯甲酸(PACBA)的浓度。结果空腹和进食后单剂量口服异丙肌苷片,Dip的ρmax分别为(1.6±s 0.4)和(1.7±0.6)mg.L-1;tmax分别为(1.4±0.8)和(1.8±1.2)h;t1/2分别为(3.7±0.7)和(3.6±0.7)h;MRT分别为(5.6±1.0)和(5.8±1.1)h;AUC0～24分别为(7.9±1.8)和(8.0±1.9)mg.h.L-1。PACBA的ρmax分别为(9±4)和(3.4±1.7)mg.L-1;tmax分别为(0.59±0.20)和(1.5±1.1)h;t1/2分别为(1.02±0.24)和(1.2±0.4)h;MRT分别为(1.46±0.29)和(2.4±0.7)h;AUC0～24分别为(10±4)和(7.6±1.8)mg.h.L-1。结论异丙肌苷血浆样品LC-MS/MS、HPLC测定法专属、灵敏、准确,适用于异丙肌苷的临床药动学研究。进食高脂肪、高蛋白食物对Dip的药动学没有显著影响,但对PACBA的吸收影响明显。