GC-MS/MS法测定坎地沙坦酯片中的痕量N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺

目的:采用GC-MS/MS法测定坎地沙坦酯片中的2种基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)的含量。方法:在程序升温条件下,于SHIMADZU SH-L-17Sil MS毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm)中进行分离,使用多反应监测(MRM)模式检测,电子轰击电离源(EI)电离,同时对NDMA与NDEA进行定量检测。结果:NDMA、NDEA及相邻色谱峰之间的分离效果良好,在5~500 ng/mL线性关系良好,NDMA的定量限为4.86 ng/mL,检测限为0.97 ng/mL;NDEA的定量限为4.88 ng/mL,检测限为0.98 ng/mL。坎地沙坦酯片中均未检出NDMA、NDEA。结论:建立的方法稳定可行、高效简便,具有高灵敏度和高专属性,能且对仪器的污染少,可用于坎地沙坦酯片中NDMA、NDEA的质量控制及标准研究。

GC-MS/MS法测定复方二甲双胍格列吡嗪胶囊中N-亚硝基二甲胺与N-亚硝基二乙胺

目的建立复方二甲双胍格列吡嗪胶囊中N-亚硝基二甲胺(NDMA)与N-亚硝基二乙胺(NDEA)的检测方法。方法色谱柱为Agilent VF-WAXms,载气为氦气,流速为1.2 mL·min^(-1),进样口温度250℃,柱温为程序升温。电子轰击电离方式,离子源温度:230℃;定量测定采用MRM模式。以8批复方盐酸二甲双胍格列吡嗪胶囊为测定对象,测定其NDMA和NDEA含量。结果NDMA、NDEA及相邻色谱峰之间的分离良好,分别在0.1966~39.32 ng·mL^(-1)(r=0.9990)和0.1870~37.41 ng·mL^(-1)(r=0.9995)内与峰面积线性关系良好,检测限分别为0.0983 ng·mL^(-1)和0.0935 ng·mL^(-1),加样回收率分别为82.3%和85.4%。结论该法分离效果好、操作简便、灵敏度高,可同时检测复方二甲双胍格列吡嗪胶囊中NDMA和NDEA的含量。

N-亚硝基二乙胺(DEN)诱导SD大鼠肝癌模型的研究

目的建立与人类的肝癌发生发展过程相似的动物模型,以便研究肝癌的发生发展过程。方法取体质量120~150 g雄性SD大鼠65只,适应环境1周后随机分为实验组(50只)和对照组(15只),实验组饮用含N-亚硝基二乙(DEN)(浓度为76 ppm)(以下简称DEN)的水连续6周后停药,改自由饮水3周,再继续饮用含DEN(76 ppm)的水至20周。对照组常规自由饮水。结果病理学检查证实DEN可诱发大鼠形成肝癌,14周后成癌率为66.7%(10/15),大鼠肝癌的癌变过程大致可分为肝炎期、肝硬化期和肝癌期三个发展阶段。结论饲以76 ppm剂量DEN可诱发大鼠肝癌模型的建立,可以为我们研究大鼠肝癌的发生发展过程提供可靠的动物模型。

乙醇清除亚硝酸根及抑制N-亚硝基二乙胺形成的体外研究

在模拟人体胃液条件下,研究了乙醇清除亚硝酸根和抑制N-亚硝基二乙胺(NDEA)形成的能力。分别用盐酸萘乙二胺法和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定亚硝酸根和NDEA的量。结果显示:当pH为2.0～4.5时,乙醇既能清除亚硝酸根又能抑制NDEA的形成;pH为5.0时,乙醇对亚硝酸根有清除作用,对NDEA的形成却有促进作用。在pH为3.0,37℃条件下,乙醇的清除及抑制效果与反应时间及乙醇的浓度呈正相关。在模拟胃液条件下,乙醇对亚硝酸根的致癌活性具有较好的抑制作用。

LC-MS/MS法测定三甲基间苯三酚原料药中N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺的含量

目的建立高效液相色谱-串联质谱法检测三甲基间苯三酚原料药中的基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的含量。方法色谱柱为Inertsil ODS-3(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%甲酸溶液(A)-甲醇(B),按程序进行梯度洗脱,在大气压化学电离源下以正离子、多重反应监测模式进行检测。结果NDMA和NDEA的检测限分别为0.8454 ng·mL^(-1)和0.2340 ng·mL^(-1),定量限分别为2.818 ng·mL^(-1)和0.7800 ng·mL^(-1),线性范围分别为2.818~18.79 ng·mL^(-1)和0.7800~5.200 ng·mL^(-1)。结论该方法专属性强,灵敏度高,适用于三甲基间苯三酚原料药中NDMA和NDEA的测定。

绿茶萃取物对N-亚硝基二乙胺体外合成的影响

目的研究绿茶萃取物对N-亚硝基二乙胺体外合成的影响。方法采用分级萃取法获得绿茶二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水提物,利用高效液相色谱法研究各萃取物主要成分,并在模拟胃液条件(37℃,pH 3)下萃取物与20 mmol/L亚硝酸钠、40 mmol/L二乙胺进行反应,分析其体外对N-亚硝基二乙胺(N-nitrosodiethylamine,NDEA)合成和NO_2^-清除的影响。结果二氯甲烷萃取物主要成分为咖啡碱,剩余水相中主要成分为多糖、蛋白质和氨基酸,2种萃取物对NDEA的合成无显著影响;乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物主要成分为茶多酚,能有效阻断NDEA的合成,在4 mg/mL条件下阻断率分别为51.9%和45.7%,其中EGCG含量与其阻断率呈显著正相关,酸性降低和温度升高有利于其阻断作用;乙酸乙酯萃取物在浓度低于1.6 mg/mL时可促进NDEA生成。结论绿茶萃取物的主要有效成分为茶多酚,能有效阻断NDEA合成,在高浓度、强酸性环境和升温条件下阻断作用更强。

艾迪注射液对N-亚硝基二乙胺(DEN)诱导的大鼠肝癌模型的干预作用

目的探讨艾迪注射液对N-亚硝基二乙胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导的Wistar大鼠肝癌模型的干预作用。方法健康Wistar大鼠30只,随机分为对照组、模型组、艾迪注射液处理组,每组10只。对照组按0.1 mL/kg的剂量腹腔注射生理盐水,每周注射1次,共注射20 w。模型组大鼠给予一次性腹腔注射100 mg/kg体重的DEN,后给予0.05%DEN自由饮水。艾迪注射液处理组大鼠开始腹腔注射DEN时即给予艾迪注射液1 mL/kg,后每周注射1次,共注射20周,取血测定大鼠血清中天门冬氨酸转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量,取各组大鼠肝脏组织进行病理学检测。用免疫组织化学染色检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和CD34蛋白的表达。结果(1)与对照组比较,模型组大鼠血清中ALT、AST、ALP均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,艾迪注射液处理组ALT、ALP明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),AST差异无统计学意义。(2)病理结果显示:对照组肝组织结构及细胞形态正常;模型组肝组织结构破坏,肝细胞损伤严重,大量胶原纤维将癌变的肝细胞分隔呈灶状分布,Masson染色显示大量蓝色胶原纤维增生,包裹坏死区;艾迪注射液处理组可见假小叶增多,Masson染色可见大量胶原纤维分隔形成的假小叶,有大量炎细胞浸润,可见干酪样坏死。(3)与对照组比较,模型组、艾迪注射液处理组肝癌组织中α-SMA、CD34表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,艾迪注射液处理组的α-SMA、CD34明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论艾迪注射液对DEN所致肝癌大鼠有一定的疗效,艾迪注射液能缓解肝癌所致的肝组织损伤,艾迪注射液干预的大鼠α-SMA和CD34表达有降低趋势,艾迪注射液可能通过抑制α-SMA和CD34表达,抑制肿瘤的浸润转移,发挥抑癌的作用。

达卡巴嗪原料药中N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺的UHPLC-APCI-MS/MS方法的建立

目的:采用UHPLC-APCI-MS/MS法测定达卡巴嗪原料药中的N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA),建立控制该药品遗传毒性杂质的方法。方法:采用Kinetex F5色谱柱(3 mm×100 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸溶液-甲醇,梯度洗脱,流速0.4 mL·min^(-1),柱温40℃,质谱离子化方式为APCI,正离子模式,多重反应监测,检测离子对为m/z 75.1/58.0(NDMA),103.0/47.0(NDEA)。结果:NDMA和NDEA在一定范围内线性关系良好(r>0.990),检出限溶液浓度分别为0.03030、0.003787 ng·mL(-1),精密度、稳定性试验满足检测要求,回收率为97~115%,RSD均小于5%。结论:本文建立的方法准确、快速灵敏、专属性强,可用于控制达卡巴嗪原料药中遗传毒性杂质NDMA和NDEA的含量。

气相色谱-串联质谱法测定芬地柞酸左旋氯哌斯汀中N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺含量

目的建立同时测定芬地柞酸左旋氯哌斯汀中的遗传毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)含量的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)法。方法气相色谱条件中,色谱柱为安捷伦DB-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.5μm);程序升温,恒流模式;流速为1.0 m L/min;载气为氦气;进样口温度为250℃,脉冲不分流进样,进样压力为15 psi,持续时间为1.5 min,进样量为2μL。质谱条件中,检测器为三重四极杆串联质谱检测器;离子源为电子轰击离子源;采集模式为多反应监测模式。结果 NDMA和NDEA质量浓度分别在0.922 2~46.109 3 ng/m L和0.235 6~11.781 0 ng/m L范围内与峰面积线性关系良好,r分别为0.998 3和0.999 8(n=6);NDMA的检测限为0.139 00 ng/m L,NDEA的检测限为0.045 83 ng/m L;NDMA的精密度、稳定性、重复性试验结果均符合要求(n=6);NDMA与NDEA的加样回收率分别为96.82%和95.93%,RSD分别为4.32%和6.58%(n=9)。结论所建立的方法结果准确灵敏,重复性好,可用于芬地柞酸左旋氯哌斯汀中NDMA和NDEA的含量测定。

GC-MS/MS法测定缬沙坦氢氯噻嗪制剂中N-亚硝基二甲胺与N-亚硝基二乙胺

目的:建立GC-MS/MS法同时测定缬沙坦氢氯噻嗪制剂中基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)与N-亚硝基二乙胺(NDEA)含量的方法。方法:使用Thermo TG-WAMS毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),采用脉冲不分流进样模式,利用程序升温进行分离,通过EI离子源和SRM模式测定NDMA和NDEA。结果:NDMA和NDEA分别在0.54~108.99 ng·ml^(-1)(r=0.9999)与0.20~100.00 ng·ml^(-1)(r=0.9998)浓度范围内线性关系良好,NDMA检出限为0.22 ng·ml^(-1);NDMA和NDEA加样回收率分别为101.6%,102.0%,RSD分别为2.2%,2.7%(n=9)。结论:该方法专属性好、灵敏度高、准确度高和样品制备简单,可用于缬沙坦氢氯噻嗪制剂中NDMA和NDEA检测。

化妆品中N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺的顶空气相色谱-质谱测定法

建立了快速检测化妆品中N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的顶空气相色谱-质谱联用分析方法。选用安捷伦DB-1701(14%-氰丙基-苯基)-甲基聚硅氧烷毛细管柱色谱柱,以N-甲基吡咯烷酮为溶剂,流速为1.5mL/min,分流比为5∶1。结果表明:N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺分别在0.1~10μg/mL、0.05~5μg/mL浓度范围内线性关系良好,r^(2)>0.99,回收率分别为88.9%~106.8%、88.2%~102.9%,相对标准偏差均小于9%。该方法准确、快速、灵敏度高,可用于化妆品中N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺的检测。

气相色谱-串联质谱法测定沙坦类制剂中N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺含量

目的建立检测沙坦类制剂中N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)含量的气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)。方法以二氯甲烷为提取溶剂,经涡旋混匀、低温高速离心、微孔滤膜过滤后进行气相色谱-串联质谱分析。采用Agilent VF-WAX ms(30 m×0.25 mm,0.25μm)毛细管柱进行分离,程序升温,载气流速1 mL·min-1,不分流进样,进样量1μL。质谱分析采用EI源,多反应监测模式,外标法定量。结果N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺的线性范围为0~250 ng·mL^(-1),方法的检出限N-亚硝基二甲胺为0.1 ng·mL^(-1)、N-亚硝基二乙胺为0.08 ng·mL^(-1),定量限为N-亚硝基二甲胺为0.3 ng·mL^(-1)、N-亚硝基二乙胺为0.2 ng·mL^(-1)。N-亚硝基二甲胺平均回收率为86.9%~113.2%,RSD(相对标准偏差)为2.7%~7.4%;N-亚硝基二乙胺平均回收率为91.1%~105.3%,RSD为2.8%~8.4%。结论本方法灵敏度高、专属性好、回收率高、线性范围宽,操作简便、快速,可用于沙坦类制剂的检验。

GC-MS/MS法结合顶空进样测定原料药厄贝沙坦中N-亚硝基二甲胺(NDMA)与N-亚硝基二乙胺(NDEA)含量

本文使用三重四极杆气质联用仪GCMS-TQ8050结合顶空进样建立了一种快速检测原料药厄贝沙坦中N-亚硝基二甲胺(NDMA)与N-亚硝基二乙胺(NDEA)的方法.在浓度范围0.025—100μg两种物质均表现出良好线性,相关系数达到0.999以上,0.025μg标液信噪比(S;N)NDMA为11.7,NDEA为19.7.标准品连续进样6针,0.1μg与5μg峰面积RSD%分别小于3%与2%.0.1、0.2、5μg的加标平均回收率在96.2%—106.4%之间.该方法简单方便,可以较好的应用于厄贝沙坦原料药中NDMA和NDEA的含量的测定.

UPLC-MS/MS联用技术测定厄贝沙坦中N-亚硝基二甲胺与N-亚硝基二乙胺

开发并验证了一种定量分析厄贝沙坦中2种基因毒性杂质的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法。采用Agilent ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱(3.0 mm×100 mm, 1.8μm),0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相梯度洗脱,大气压化学电离、正离子平行反应监测模式(APCI+PRM)进行检测,结果显示N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)在0.225~1.5 ng/mL浓度范围内线性关系良好,检测限(LOD)为0.022 ng/mL、0.044 ng/mL,供试品加标溶液回收率为78%~103%。所建立的方法灵敏、准确,可满足对厄贝沙坦中2种N-亚硝胺类基因毒性杂质的检测。

绿茶萃取物对N-亚硝基二乙胺体外合成的影响

目的:验证分析绿茶萃取物对N-亚硝基二乙胺体外合成的影响。方法:使用分级萃取的方法对绿茶中的二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水提物进行萃取,采取高效液相色谱方法对不同萃取物的成分进行分析,通过将不同萃取物在模拟胃液环境下与20mmol/L亚硝酸钠以及40mmol/L二乙胺进行反应进,分析绿茶萃取物对N-亚硝基二乙胺体外合成的影响。结果:二氯甲烷萃取物和水提物对N-亚硝基二乙胺的合成未造成显著影响,而乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物中的茶多酚成分能够对N-亚硝基二乙胺的合成进行有效的阻断。结论:绿茶萃取物中的茶多酚成分能够有效对N-亚硝基二乙胺体外合成进行阻断。

N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺的小鼠重复给药毒性及遗传毒性研究

目的 连续7 d重复给予C57BL/6J小鼠N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA),观察至首次给药后28 d,评价两者主要毒性靶器官及遗传毒性风险。方法 分设溶媒对照组(0.5%羧甲基纤维素钠),受试物组(分别给予0.75、1.50、3.00 mg·kg^(-1)NDMA或3.25、7.50、15.00 mg·kg^(-1)NDEA)和阳性对照组(200 mg·kg^(-1)甲磺酸乙酯、40 mg·kg^(-1)N-乙基-N-亚硝基脲)。溶媒对照组和受试物组连续7 d每天ig给药1次,阳性对照组连续3 d每天ig给药1次。末次给药后开展小鼠肝、肾和外周血彗星试验,计算每只动物的肝、肾和血细胞尾DNA百分含量(%Tail DNA)和尾距(tail moment)平均值。观察结束后(D28)开展小鼠磷脂酰肌醇聚糖A类(Pig-a)基因突变试验,计算网织红细胞(RETCD24-)和总红细胞(RBCCD24-)的突变率。并在末次给药和恢复期结束后,试剂盒法检测小鼠肝、肾和肺的8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测DNA损伤基因(ATM、gH2AX、Nbn、Prkdc、Trp)和肝药酶基因(CYP2E1、CYP2A6)。结果 NDMA剂量为3 mg·kg^(-1)时,动物全部死亡,自连续给药4 d后,NDEA 15 mg·kg^(-1)组小鼠体质量与溶媒对照组相比显著性降低(P<0.001);且NDMA和NDEA组与溶媒对照组在脏器系数、血液生化指标、组织病理学等方面存在显著差异(P<0.05、0.01、0.001),提示NDMA和NDEA对肝脏和肾脏存在一定毒性;NDMA和NDEA组小鼠肝、肾彗星试验结果均为阳性,Pig-a基因突变试验中NDEA高剂量组RETCD24-结果为阳性;与溶媒对照组比较,NDMA和NDEA组小鼠肝、肾和肺中8-OHdG含量显著升高(P<0.05、0.001),DNA损伤和肝药酶基因表达也存在显著差异(P<0.05、0.001)。结论 NDMA分别在1.5 mg·kg^(-1)剂量条件下产生肝脏毒性,0.75、1.50 mg·kg^(-1)剂量条件下使小鼠肝、肾细胞产生致突变性和肝、肾DNA损伤;NDEA可在15 mg·kg^(-1)剂量条件下产生肝脏毒性,并导致肝、肾细胞产生致突变性和DNA损伤;8-OHdG和DNA损伤基因等指标检测结果与NDMA和NDEA遗传毒性结果具有一定关联性。

液液萃取/GC-MS法测定硫酸软骨素钠原料中的基因毒杂质N-亚硝基二甲胺与N-亚硝基二乙胺

目的:建立一种液液萃取法,采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术,测定硫酸软骨素钠原料中的基因毒杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)与N-亚硝基二乙胺(NDEA)。方法:采用Thermo TG-WAXMS色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm);柱温在40℃保持1 min,以25℃·min^(-1)升至240℃,保持2 min;进样口温度为220℃;载气为高纯氦,流速为1.0 mL·min^(-1)。质谱的离子源为EI源;电子能量为70 eV;离子源温度为280℃;传输线温度为240℃;进样量为1μL。结果:NDMA的检测限为0.64 ng·mL^(-1),在4~16 ng·mL^(-1)范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数r为0.9993。NDEA的检测限为0.176 ng·mL^(-1),在1.1~4.4 ng·mL^(-1)范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数r为0.9996。硫酸软骨素钠中均未检出NDMA与NDEA。结论:该法操作简便,专属性强,可以用于硫酸软骨素钠中的基因毒杂质NDMA与NDEA的测定。

固相萃取-高效液相色谱法同时测定酱腌菜中N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)

目的:建立固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC)测定酱腌菜中N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的方法。方法:样品经纯水浸取,再经Envi-Carb柱和Lichrolut EN柱净化吸附浓缩后,用甲醇洗脱。以甲醇+水(20+80)为流动相,经Capcell PAK C18色谱柱分离,于228 nm处检测。结果:NDMA和NDEA分别在5 ng/ml～3750 ng/ml和10 ng/ml～5000 ng/ml范围内具有良好的线性,其相关系数均大于0.999,检出限分别为2.5 ng/ml和5.0 ng/ml,实际样品加标回收率分别为92%～98%和91%～101%,相对标准偏差<10%。结论:此法简单、灵敏、准确,可用于同时测定样品中NDMA和NDEA。

LC-MS/MS法测定尼扎替丁原料药中的N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺

目的采用液质联用法测定尼扎替丁原料药中的N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)。方法样品用30%甲醇溶解,涡旋1 min后,经液相色谱分离,用质谱法确认化学成分,外标法计算含量。质谱采用大气压化学电离源,正离子模式,多反应监测,NDMA定量离子对为75.0/43.0,定性离子对为75.0/57.9,NDEA定量离子对为103.0/75.0,定性离子对为103.0/47.0。结果NDMA和NDEA的线性范围分别为0.9514~23.7838 ng·m L^(-1)(r=0.9997)、0.09934~7.4582 ng·m L^(-1)(r=0.9999),平均回收率分别为95.5%、97.3%(n=9)。6批原料药均未检出NDEA,NDMA的检出量远小于0.32μg·g^(-1)的限度。结论所用方法可用于测定尼扎替丁原料药中的NDMA和NDEA。

大鼠体内多终点实验评价N-亚硝基二乙胺的遗传毒性研究

目的:采用N-亚硝基二乙胺(DEN)作为阳性化合物建立大鼠肝微核实验方法,同时结合彗星实验及外周血微核实验终点于同一个实验中,综合评价其遗传毒性。方法:实验设置阴性对照组(生理盐水)、DEN低(3. 13 mg·kg-1)、中(6. 25 mg·kg-1)、高(12. 5 mg·kg-1)剂量组、Comet阳性对照组(EMS,100mg·kg-1)共5个给药组,每组5只雄性SD大鼠,连续ig给药,在d 14给药后约21 h进行末次给药,在末次给药后约3 h进行外周血采样,进行微核实验,采用流式细胞术测定网织红细胞微核率,并麻醉动物进行彗星和肝微核实验肝脏的取样、处理,最后分别通过Comet Assay软件和荧光显微镜获得结果。结果:肝微核实验中,中、高剂量DEN染毒组肝脏的微核率与阴性对照组相比均显著增加,且呈剂量反应关系(r=0. 98,P <0. 01);彗星实验中,所有DEN染毒组肝脏的尾DNA百分含量与阴性对照组相比均显著增加,且呈剂量反应关系(r=0. 91,P <0. 05);外周血微核实验中,所有DEN染毒组与阴性对照组相比,外周血网织红细胞微核率均没有明显的升高。结论:本实验初步建立了大鼠肝微核重复剂量实验方法,在同一实验中进行肝微核实验、外周血微核实验以及彗星实验多终点的联合检测,不仅可节省实验动物数量,而且可提高实验效率,大大增加遗传毒性实验结果对致癌性的预测性。