家兔肝组织中N-亚硝基降烟碱及其代谢物的HPLC-MS/MS检测

为了研究N–亚硝基降烟碱(NNN)在肝脏中的代谢,通过活组织实验建立肝组织中NNN及其代谢物的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)方法,结果表明:NNN及其代谢物的相对标准偏差(RSD)、回收率和检测限分别为0.71%~7.92%,83.0%~112%和0.033~0.277 ng/m L。该方法简单、快速灵敏,适合于肝脏中NNN及其代谢物的检测。对给药2小时后的肝脏和血液中NNN的代谢物进行浓度比较,结果表明:给药2小时后NNN的浓度在血液中较肝脏中高,而其代谢物的浓度在肝脏中较高。

N-亚硝基降烟碱代谢途径及检测方法的研究进展

介绍N-亚硝基降烟碱(NNN)在动物体内、外的代谢途径,并列举NNN及其代谢物检测方法的相关研究,为寻找降低NNN致癌性的方法提供科学依据。

N-亚硝基新烟碱类化合物的合成

以3-氨甲基吡啶和二苯甲酮为主要原料,对甲苯磺酸作催化剂,甲苯作溶剂,合成N-二苯亚甲基-3-氨甲基吡啶(1),以化合物(1)为原料合成新烟碱。以新烟碱为先导化合物,设计合成了假木贼碱和N-亚硝基新烟碱,再以假木贼碱合成N-亚硝基假木贼碱。考察了催化剂、反应时间和原料比例对化合物(1)产率的影响;二异丙基氨基锂(LDA)用量对新烟碱产率的影响;反应温度和时间对亚硝基新烟碱产率的影响。采用1 H NMR和MS等对所合成的化合物结构进行了证实。实验结果表明:当n(3-氨甲基吡啶)∶n(二苯甲酮)=1∶1.25,选用对甲苯磺酸作催化剂,回流反应3h时,化合物(1)收率高达86.4%;n(3-氨甲基吡啶和二苯甲酮)∶n(LDA)=1∶1.1时,新烟碱的收率为85.5%;当反应温度为0℃,反应时间为6.0h时,N-亚硝基新烟碱的收率为81.0%。

烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮和N′-亚硝基去甲烟碱体外细胞色素P4502A13酶促代谢反应的抑制作用

目的研究烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和N-亚硝基去甲烟碱(NNN)的体外代谢激活是否产生抑制作用。方法分别以NNK和NNN为底物,采用体外重组酶细胞色素P450酶(CYP450)2A13体系进行孵育,以HPLC-MS-MS检测NNK和NNN及其代谢产物,建立体外孵育NNK和NNN的酶促反应动力学曲线,分析烟碱对其酶促动力学参数的影响。结果 CYP4502A13酶催化NNK生成4-羰基-4-(3-吡啶基)-丁醛(OPB),4-羟基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(HPB)和4-羰基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(OPBA),该酶催化NNN生成HPB,OPB和4-羟基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(HA)。烟碱加入NNK反应液中,生成OPB,HPB和OPBA的Km值分别增加到7.4,13.1和11.0μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。烟碱加入NNN反应液中,生成HPB,HA和OPB的Km值分别增加到35.46,16.51和28.19μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。结论烟碱对CYP4502A13酶催化NNK和NNN的代谢反应具有竞争性抑制作用。

微生物发酵对口含烟烟叶烟碱与特有亚硝胺含量的影响研究

为明确微生物发酵对于口含烟烟叶烟碱与特有亚硝胺含量的影响,探究应用微生物发酵对口含烟烟叶进行提质降害的可行性。以云烟B7作为研究对象,选取解淀粉芽孢杆菌GU-HP86、谷草芽孢杆菌B01两种微生物,通过对照试验,测定研究其发酵下,云烟B7下橘二(X2F)、中橘三(C3F)、上橘二(B2F)三部位烟碱与特有亚硝胺N-亚硝基去甲烟碱(NNN)含量的变化情况。经研究表明,GUHP86、B01发酵可以有效降解烟碱、NNN含量,对于各部位烟碱的降解率分别为50.8%/44.37%(GUHP86/B01-B2F)、40.90%/38.44%(C3F)、19.57%/15.10(X2F),对于各部位NNN的降解率分别为64.40%/55.62%(B2F)、59.73%/54.79%(C3F)、28.21%/35.24%(X2F)。

人体N─亚硝基化合物暴露水平、体内水平及天然营养饮料（世上─宝饮料）降低作用研究概况（2）

人体Ｎ─亚硝基化合物暴露水平、体内水平及天然营养饮料（世上─宝饮料）降低作用研究概况（２）张伯龄（北京劳动部劳动保护科学研究所，北京１０００２９）４Ｉ型“世上─宝饮料”对橡胶工人体内Ｎ─亚硝基化合物降低作用广东省江门市罐头食品厂引进了该项配方与技术，...

烟碱向降烟碱转化对烟叶麦斯明和TSNA含量的影响

以白肋烟TN90为材料,研究了非转化株、低转化株及高转化株烟叶样品的烟碱转化程度及降烟碱含量与烟叶麦斯明和烟草特有亚硝胺(TSNA)含量的关系。结果表明,随着烟株烟碱转化能力的提高和烟叶降烟碱含量的增加,叶片和主脉的麦斯明含量呈线性增加。当烟碱转化率超过20％时,麦斯明含量超过了假木贼碱的含量。在4种主要的TSNA中,具有不同烟碱转化能力的样品间4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基新烟草碱(NAT)和N-亚硝基假木贼碱(NAB)含量没有显著差异,N-亚硝基降烟碱(NNN)含量则随着烟碱转化能力的提高和降烟碱含量的增加而大幅度升高,尤其在主脉中表现更为明显。NNN占总TSNA的比例随烟碱转化程度的提高而增加,在高转化烟株中可高达90％,其它3种TSNA占总TSNA的比例相应降低。叶片中NAT含量和比例一般高于NNK,而在主脉中NNK含量高于NAT。

N-亚硝基降烟碱及其代谢物在家兔血液中的HPLC-MS/MS检测分析

N-亚硝基降烟碱(NNN)是一种强致癌物,对NNN进行动物体内的代谢研究有利于对它的致癌机制进行更深层次的了解,为吸烟与健康提供理论参考。但是,复杂基质中的痕量检测则需要一种高灵敏度的检测方法。本实验通过对色谱条件、质谱条件等的优化和选择,建立了一种液相色谱串联质谱的方法。以NNN-d4为内标,通过沉淀蛋白的前处理操作以及Waters-HILIC柱分离和多离子监测模式对大耳朵白兔血浆中的NNN及其代谢物进行了分析检测。结果表明,NNN及其代谢物的相对标准偏差(RSDs)为0.5%～8.62%,回收率为80%～111%,检测限为0.039～0.217 ng/mL。本实验还得出了NNN及其代谢物的代谢曲线以及药代动力学相关参数,从代谢曲线和药代动力学参数可知,NNN在家兔体内的半衰期为30min,主要代谢物是1-(3-吡啶基)-1-丁醇-4-羧酸(醇酸),主要代谢途径是5’位置的羟基化。

HPLC-MS/MS法测定家兔血液中的NNN及其代谢物

为了准确测定家兔血液中的N-亚硝基降烟碱（NNN）及其代谢物,通过对色谱、质谱条件的优化和选择,建立了以NNN-d4为内标,通过沉淀蛋白的前处理操作以及Waters亲水相互作用色谱（HILIC）柱分离和多离子反应监测模式（MRM）测定大耳朵白兔血浆中NNN及其代谢物的HPLC-MS/MS方法。结果表明,NNN及其代谢物的相对标准偏差（RSD）、回收率和检测限分别为0.50%~8.62%,80%~111%和0.039~0.217 ng/mL。该方法简单、快速灵敏,适合于血液中NNN及其代谢物的检测。

UPLC-Q Exactive轨道阱高分辨质谱法测定小鼠血液中的NNN及其7种代谢物

为了准确测定小鼠血液中的Ⅳ一亚硝基降烟碱（NNN）及其代谢物，通过对色谱、质谱条件的优化，建立了以NNN—d4和HPB—d4为内标，用乙腈沉淀蛋白后，直接经超高效液相色谱（UPLC）仪器的亲水相互作用色谱（HILIC）柱进行分离，通过全扫描／数据依赖二级质谱扫描（FS／ddMS。）测定小鼠血浆中NNN及其7种代谢物的UPLC—QExactive轨道阱高分辨质谱法。结果表明：①NNN及其7种代谢物的检出限为0．019～0．067ng／mL，回收率在78．0％～117．5％之间，日内精密度为0．47％～8.38％。②该方法适合于小鼠血浆中NNN及其7种代谢物的同时检测。

液相色谱-串联质谱法测定卷烟主流烟气中的四种致癌物

N-亚硝基降烟碱(NNN)、4-(亚硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基新烟草碱(NAT)和N-亚硝基假木贼碱(NAB)是4种广泛存在于烟草和烟气中的致癌物,准确测定其含量对评估其对人体健康的影响有着重要的作用。采用液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESIMS/MS)技术建立了卷烟主流烟气中NNN、NNK、NAT和NAB的测定方法,并将其用于中国烤烟和混合型卷烟主流烟气的分析。卷烟主流烟气通过剑桥滤片捕集,捕集烟气后的滤片在加入100μL氘代混合内标后用10mL100mmol/L醋酸铵水溶液萃取,萃取液过水相滤膜后直接进行LC-ESIMS/MS检测。选用AgilentZorbaxEclipseXDB-C18色谱柱,以流动相0.1%(v/v)乙酸水溶液和0.1%(v/v)乙酸甲醇溶液梯度洗脱,质谱检测采用正离子扫描,多反应监测模式。NNN、NNK、NAT和NAB的检出限分别为0.019、0.002、0.008和0.007μg/L,回收率为84.9%～104.5%,相对标准偏差(n=8)为2.96%～6.65%。该方法的检出限低,特异性好,适用于卷烟主流烟气中NNN、NNK、NAT和NAB释放量的检测。

烟酒致癌物致口腔细胞恶性转化的研究进展

肿瘤的形成至少包括起始、促进和进展3个阶段,其过程复杂且存在众多影响因素。其中致癌物能与DNA、RNA和蛋白质等多种细胞成分反应,使基因异常现象持续累积,诱发或促进肿瘤形成。环境致癌物比人工合成的化学致癌物更能准确体现人类口腔癌发生发展过程中涉及的细胞和分子的变化。吸烟与饮酒是口腔肿瘤的常见危险因素,烟草中的苯并芘、N-亚硝基降烟碱和酒精源性乙醛是常见的明确环境致癌物,主要通过代谢活化体现致癌性,在科研中被用于构建恶性转化模型,来研究危险因素作用下正常细胞向肿瘤细胞恶性转化发生的机制,有助于发现关键靶点,并提出更有针对性的防治策略。