HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定氢溴酸高乌甲素注射液中2个有关物质的含量

目的:建立HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定氢溴酸高乌甲素注射液中2个有关物质(N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱)的含量。方法:采用Kromasil 300-5-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.04 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液-甲醇-乙腈(68∶17∶15)为流动相,检测波长252 nm,流速0.8 mL·min^(-1),柱温37℃,进样体积10μL。绘制氢溴酸高乌甲素和2个杂质的线性方程,分别以斜率计算各杂质相对于氢溴酸高乌甲素的校正因子,用相对保留时间确定各杂质的位置。测定4家企业共25批氢溴酸高乌甲素注射液中2个杂质含量,并与外标法测得结果进行比较。结果:本方法能较好地分离氢溴酸高乌甲素与2个杂质。N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱的相对保留时间分别为1.20和1.39,校正因子分别为1.23和0.94。氢溴酸高乌甲素、N-去乙酰高乌甲素和冉乌头碱质量浓度分别在0.9517~38.07、1.047~41.87和1.001~40.02μg·mL^(-1)的范围内与峰面积呈良好的线性关系(r均为1.000),平均回收率分别为100.2%、100.5%和100.5%,RSD均小于2.0%,检测限分别为0.095、0.10和0.10μg·mL^(-1),定量限分别为0.32、0.35和0.33μg·mL^(-1)。加校正因子的主成分自身对照法测得25批氢溴酸高乌甲素注射液中N-去乙酰高乌甲素的含量为0.31%~0.82%,冉乌头碱的含量为0~0.09%,与外标法测定结果一致。结论:经方法学验证,所建立的方法简便、快速,可准确测定氢溴酸高乌甲素注射液中有关物质的含量。