N-去硫酸肝素对肾缺血再灌注损伤防治作用的研究

目的 :研究 N去硫酸肝素对大鼠肾缺血再灌注损伤的防治作用。方法 :建立肾缺血再灌注损伤大鼠模型 ,实验动物随机分为正常对照组和 N 去硫酸肝素治疗及非治疗组。观察大鼠治疗前后肾组织中 P 选择素表达、组织病理学与肾功能的改变 ,以及凝血指标〔包括凝血酶原时间 (PT)和部分激活凝血时间 (KPTT)〕的变化。结果 :缺血再灌注后大鼠肾脏 P 选择素表达增高 ,出现明显组织病理学改变 ,血清尿素氮 (BUN)、肌酐(Cr)水平明显升高〔分别为 (14.5 4± 0 .6 7) mm ol/ L 和 (10 2 .12± 4.76 ) μmol/ L〕;N 去硫酸肝素治疗组肾脏组织中 P选择素表达受抑 (未出现棕黄色颗粒 ) ,病理学改变与肾功能损害减轻 ,且对 PT和 KPTT无明显影响。结论 :N去硫酸肝素对肾缺血再灌注损伤具有防治作用 ,且对凝血指标 PT和 KPTT无明显影响。

N-去硫酸肝素对胃癌转移的抑制作用

目的探讨N-去硫酸肝素对人胃癌转移和P-选择素表达的影响。方法用SGC-7901人胃癌组织原位移值SCID小鼠30只,分试验组20只和正常对照组10只。其中试验组建立胃癌转移模型。术后d 3开始,试验组动物分别静脉注射NS(NS组,10只),每次100μL,每周2次,共3 wk;或N-去硫酸肝素(肝素组,10只),剂量为10 mg.kg-1.d-1,每周2次,共3 wk。术后wk 6末,所有动物处死。取部分胃癌组织作荧光定量PCR检测。结果NS组肿瘤转移率为80%(8/10),肝素组转移率为20%(2/10)。荧光定量PCR测定显示,SCID小鼠伴有癌转移者其胃癌中P-选择素mRNA表达较不伴癌转移者明显增强;肝素组10只中7只P-选择素mRNA表达较低。此外,正常胃组织中P-选择素表达水平较低。NS组P-选择素mRNA表达较正常小鼠明显增强,肝素组P-选择素mRNA表达较NS组低,P<0.05。N-去硫酸肝素无明显出血等不良反应。结论P-选择素表达与胃癌转移密切相关,N-去硫酸肝素对胃癌具有抗转移作用。

N-去硫酸肝素对SCID小鼠胃癌血管生成和VEGF表达的影响

目的:研究N-去硫酸肝素对人胃癌重度联合免疫缺陷(SCID) 小鼠转移模型肿瘤转移抑制、血管生成和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响．方法:建立人胃癌组织原位移植SCID小鼠转移模型,随机分成两组．移植1 wk,分别从静脉内注射生理盐水(生理盐水组) 与N-去硫酸肝素[10 mg／(kg·d)](N-去硫酸肝素组),2次／wk, 共3 wk．第6 wk处死动物,观察肿瘤转移情况,免疫组化方法检测肿瘤组织微血管密度(MVD)、VEGF的表达．结果:生理盐水组肿瘤转移率为80%,N-去硫酸肝素组转移率为20%,两组之间差异有统计学意义(P<0．05)．未发现出血等副作用．生理盐水组平均微血管密度为8．0±3．1,N-去硫酸肝素治疗组平均微血管密度为4.3±1．8．经统计学处理,两组之间差别有显著意义(P<0．05)．生理盐水组VEGF阳性表达率明显高于N-去硫酸肝素治疗组,分别为90％与20％(P<0．05)．结论:N-去硫酸肝素通过抑制肿瘤组织VEGF表达和血管生成,从而抑制肿瘤的转移,并且无明显出血等不良反应．

N-去硫酸肝素对肝缺血再灌注损伤的作用

目的研究N-去硫酸肝素对大鼠肝缺血再灌注损伤的防治作用。方法 建立肝缺血再灌注损伤大鼠模型,用N-去硫酸肝素对其进行阻断治疗。免疫组化LSAB法检测肝组织P选择素表达。结果 缺血再灌注后大鼠肝细胞显著水肿、空泡变性、炎性细胞浸润,出现大片状坏死灶,血清丙氨酸转移酶和天冬氨酸转移酶水平明显升高（P< 0.01）,且P选择素在肝组织中表达。而再灌注前5min静脉注射N-去硫酸肝素,则仅见部分肝细胞轻度水肿、变性及少量的散在点状坏死或局灶性坏死灶伴少量的炎性细胞浸润,未见片状坏死灶,血清酶水平明显减低,肝组织未见P选择素表达。且发现N-去硫酸肝素对凝血指标（PT和KPTT）无明显影响。结论 N-去硫酸肝素对肝缺血再灌注损伤具有防治作用,但对PT和KPTT无明显影响。

N-去硫酸肝素对胃癌血管生成及抑制作用的研究

目的：研究N-去硫酸肝素对人胃癌裸鼠模型肿瘤生长抑制、血管生成和细胞凋亡的影响。方法：建立人胃癌皮下移植裸鼠模 型，随机分成4组。移植1周后，分别从腹腔注射生理盐水(对照组)，卡铂(5 mg·kg^(-1) ·d^(-1) )，N-去硫酸肝素(10 mg·kg^(-1) ·d^(-1) )， 及卡铂(5 mg·kg^(-1) ·d^(-1) )与 N-去硫酸肝素(10 mg·kg^(-1) ·d^(-1) )，每周3次，共3周。第7周处死动物，测量肿瘤大小与重量、抑瘤 率、微血管密度(MVD)、胃癌细胞凋亡指数(AI)。结果：对照组、卡铂组、N-去硫酸肝素组、卡铂与 N-去硫酸肝素联合组的肿瘤重量 (mg)分别为1750． 4±144． 2、 1655． 0±157． 4、 1118． 0±116． 2与725． 6±130． 0，抑瘤率分别为5． 6%、36． 1%和58． 5%。MVD 分别为 14． 8±4． 5、 13． 2±4． 1、 3． 8±1． 7与3． 4±1． 8。凋亡指数分别为1． 37±0． 19、 3． 85±0． 22、 11． 81±2． 9与18． 85±3． 24。与对照组、卡铂 组相比，N-去硫酸肝素组、卡铂与 N-去硫酸肝素联合组的胃癌生长、微血管密度明显抑制，细胞凋亡明显增高。结论：N-去硫酸肝 素通过抑制肿瘤血管生成，诱导肿瘤细胞凋亡，从而抑制肿瘤的生长。N-去硫酸肝素无明显出血等不良反应。

N-去硫酸肝素对体外培养人胃癌SGC-7901细胞bFGF表达的影响

目的:探讨N-去硫酸肝素对体外培养人胃癌SGC-7901细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响.方法:体外培养人胃癌SGC-7901细胞,加入含不同浓度N-去硫酸肝素(0.1、1.0g/L,N-去硫酸肝素组)的RPMI 1640培养液,并设对照(为培养液),每组平行3个样本.培养12、24h,应用双抗体夹心ABC-ELISA法及实时荧光定量PCR法检测胃癌细胞bFGF的表达.结果:与对照组相比,0.1、1.0g/LN-去硫酸肝素组培养12、24h,bFGF的表达下降均有统计学意义(t=7.502,P=0.002;t=55.416,P=0.000;t=52.221,P=0.000;t=48.080,P=0.000);相同时间下各浓度的N-去硫酸肝素组中bFGFmRNA的表达(CT值)较对照组高.N-去硫酸肝素对胃癌细胞bFGF蛋白及mRNA表达的抑制作用具有剂量及时间依赖性.结论:N-去硫酸肝素可以显著抑制体外培养人胃癌细胞bFGF的表达,且具有时间、剂量依赖性.

N-去硫酸肝素对胃癌碱性成纤维细胞生长因子基因表达和血管形成的影响

目的研究N-去硫酸肝素对人胃癌组织原位移植NOD-SCID小鼠转移模型的碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）基因表达、血管形成和肿瘤转移影响。方法建立人胃癌组织原位移植NODSCID小鼠胃癌转移模型。移植后一周，20只小鼠随机分成两组，分别静脉注射生理盐水（0．9％氯化钠组）与10mg／kgN．去硫酸肝素（N-去硫酸肝素组），每周两次，共3周。第6周处死动物，观察肿瘤转移情况，免疫组织化学检测肿瘤组织微血管密度表达，荧光定量PCR检测肿瘤组织bFGF基因mRNA表达。结果0．9％氯化钠溶液组10只小鼠9只有肿瘤转移，N-去硫酸肝素组10只小鼠只有2只转移，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。未发现出血等不良反应。0．9％氯化钠溶液组平均微血管密度为9．1±3．4，N-去硫酸肝素组为4．7±1．8，两组间差异有统计学意义（t=3．617，P〈0．05）。荧光定量PCR测定显示，N-去硫酸肝素组bFGF mRNA（2．60±0．56％）相对表达量较0．9％氯化钠溶液组（30．65±6．84％）低，两组差异有统计学意义（t=4．08，P〈0．01）。结论 N-去硫酸肝素通过抑制肿瘤组织bFGF基因表达和血管生成，抑制肿瘤转移。N-去硫酸肝素无明显出血等不良反应。

N-去硫酸肝素对肝和肾缺血-再灌流损伤防治作用的研究

目的 探讨N -去硫酸肝素对肝和肾缺血 再灌流损伤的防治作用。方法 分别建立大鼠肝及肾缺血 再灌流损伤模型 ,观察和比较经N 去硫酸肝素处理前后大鼠肝、肾组织P 选择素表达 ,组织病理学改变及肝、肾功能变化 ,以及对凝血指标 (PT和KPTT)的影响。结果 肝、肾缺血再灌流后 ,大鼠肝、肾组织内P -选择素广泛表达 ,出现明显的组织病理学改变及肝、肾功能损伤。经给予N -去硫酸肝素处理后 ,肝、肾组织P -选择素表达受到抑制 ,组织病理学改变减轻 ,肝、肾功能得到改善。进一步发现N -去硫酸肝素对PT和KTPP无明显影响。结论 N -去硫酸肝素可能通过间接抑制P -选择素作用 ,而对肝和肾缺血 -再灌流损伤起到防治效果 。

非抗凝N-去硫酸肝素对胃癌转移抑制作用的实验研究

目的研究N-去硫酸肝素对人胃癌组织原位移植非肥胖性糖尿病(non-obesity diabetes,NOD)重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠转移模型的肿瘤转移抑制、血管生成和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法建立人胃癌组织原位移植NOD SCID小鼠胃痛转移模型,20只小鼠均分成2组。移植后1周,分别静脉注射0．9%氯化钠溶液(0．9%氯化钠溶液组)与10 mg/kg N-去硫酸肝素(N-去硫酸肝素组),每周2次,共3周。第6周处死动物,观察肿瘤转移情况,免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度、VEGF表达,荧光定量PCR检测肿瘤组织VEGF mRNA表达。结果0．9%氯化钠溶液组10只小鼠9只有肿瘤转移,N-去硫酸肝素组10只小鼠只有2只转移,两组间差异有统计学意义(P＜0．05)。未发现出血等不良反应。0．9%氯化钠溶液组平均微血管密度为9．1±3．4,N-去硫酸肝素组为4．7±1．8,两组间差异有统计学意义(t=3．617,P＜0．05)。0．9%氯化钠溶液组有9只VEGF阳性表达,明显高于N-去硫酸肝素组的2只(P＜0．05)。荧光定量PCR测定显示,N-去硫酸肝素组VEGF mRNA(Ct：19．56±1．53)表达较0．9%氯化钠溶液组(Ct=16．38±1．68)低,两组间差异有统计学意义(t=4．425,P＜0．05)。结论N-去硫酸肝素通过抑制肿瘤组织VEGF表达和血管生成,抑制肿瘤转移。N-去硫酸肝素无明显出血等不良反应。

N-去硫酸基团肝素对幼猪肠穿孔脓毒症诱发急性肺损伤治疗作用机制探讨

目的通过观察白细胞介素-2（IL-2）、IL-8、可溶性血管细胞黏附分子（sVCAM-1）的变化，探讨N-去硫酸基团肝素对幼猪肠穿孔脓毒症诱发急性肺损伤治疗机制。方法23只雄性幼猪随机分为假手术对照组（A组，n=5）、模型组（B组，n=6）、N-去硫酸基团肝素治疗组（C组，n=6）、低分子肝素治疗组（D组，n=6），建立肠穿孔脓毒症诱发急性肺损伤模型后，机械通气基础上，在Au即刻，C组12ms／kgN-去硫酸基团肝素静脉注射，D组300U／kg低分子肝素静脉注射，观察比较基础状态、出现Au后4h、8h血清IL-2、IL-8、sVCAM-1水平。并比较支气管肺泡灌洗液白细胞浓度。结果C组支气管肺泡灌洗液白细胞计数明显低于B组和D组，其血清IL-2、IL-8在Au后短暂上升即均呈下降趋势，sVCAM-1持续下降。B、D组血清IL-2、IL-8、sVCAM-1在ALI后均呈明显上升。结论N-去硫酸基团非抗凝肝素对脓毒症诱发急性肺损伤的治疗作用可能和其降低血清IL-2、IL-8、sVCAM水平，从而抑制白细胞的趋化、黏附、活化有关。

N-去硫酸基团肝素与低分子肝素对造模肠穿孔诱发急性肺损伤治疗作用的对比研究

目的:在幼猪肠穿孔脓毒症诱发急性肺损伤(ALI)的动物模型基础上,比较N-去硫酸基团肝素与低分子肝素的治疗效果。方法:23只雄性幼猪随机分为:A组为假手术对照组(n=5),B组为模型组(n=6),C组为N-去硫酸基团肝素治疗组(n=6)及D组为低分子肝素治疗组(n=6)。于建立肠穿孔脓毒症诱发急性肺损伤模型后,在机械通气基础上,即刻在C组予静脉注射N-去硫酸基团肝素12mg/kg,D组予静脉注射低分子肝素抗Xa因子300IU/kg,观察比较动脉血气、肺动态顺应性、呼吸系统阻力、血流动力学、肺干湿重比、病理组织检查。结果:C组PaO2/FiO2、肺干湿重比相对较B组明显改善,呼吸系统阻力下降,肺动态顺应性下降不明显,肺组织病变减轻。D组仅肺干湿重比减轻,其他指标未见明显好转。结论:N-去硫酸基团肝素对肠穿孔脓毒症诱发的急性肺损伤有一定治疗作用,相对于低分子肝素在采用实验剂量下的治疗作用不明显。

修饰肝素对急性肾损伤的防治及NK细胞功能的调节

目的研究N -去硫酸肝素对大鼠肾缺血再灌注损伤防治及NK细胞功能的调节。方法建立肾缺血再灌注损伤大鼠模型 ,随机分为正常对照组、N -去硫酸肝素治疗组和非治疗组。观察大鼠治疗前后肾组织中P -选择素表达、组织病理学和肾功能改变 ,NK细胞活性以及凝血指标 (PT、APTT)的变化。结果缺血再灌注损伤后大鼠肾脏P -选择素表达增强 ,出现明显的组织病理学改变及肾功能损害 ,且NK细胞明显激活。经给予N -去硫酸肝素处理后 ,肾组织P -选择素表达受抑 ,病理学改变及肾功能损害减轻 ,NK过度细胞活化下调 ,且对PT和APTT无明显影响。结论N -去硫酸肝素对肾缺血再灌注损伤具有防治作用。其抗炎机制可能与抑制P -选择素及白细胞浸润 。

N-去硫酸基团非抗凝肝素治疗脓毒症诱发急性肺损伤

目的 应用N-去硫酸基因非抗凝肝素治疗幼猪急性肠穿孔脓毒血症、ALI模型,为临床探索新的治疗途径。方法 健康幼猪17只随机分为对照组;模型组:切开盲肠,24h后关闭穿孔;治疗组:肠穿孔模型同前,ALI出现后,除机械通气基础治疗外,静脉注射12mg/kgN-去硫酸基因非抗凝肝素。每2h检测动脉血气、肺功能、血流动力学,并测定支气管肺泡灌洗液白细胞含量、病理及细菌学检查。结果 模型组ALI后Rrs进行性升高,PaO_2/FiO_2、Cdyn持续下降;血白细胞先升后降,而支气管肺泡灌洗液白细胞含量明显升高;肺泡和间质水肿、充血、出血、炎细胞浸润,肺泡扩张不均;血培养及腹腔液培养为大肠杆菌。治疗组应用N-去硫酸基因非抗凝肝素后PaO_2/FiO_2、Cdyn下降不明显,支气管肺泡灌洗液白细胞含量明显低于模型组;肺病理改变减轻。结论 N-去硫酸基因非抗凝肝素对脓毒症诱发的ALI具有一定治疗作用,其治疗机制可能是通过抑制肺内白细胞聚集、活化,使其向外周血释放。

肾缺血再灌注损伤西药防治进展研究

早在20世纪70年代,Glaumann等发现,恢复缺血肾脏的血液供应后,可加重原有的单纯缺血性损伤,首先提出了肾缺血再灌注损伤(renal ischemic reperfusion injure,简称RIRI)的概念[1].