N-对氯苯磺酰基-4-氨基水杨酸抑制DSS诱导的溃疡性结肠炎的作用

本研究旨在探讨N-对氯苯磺酰基-4-氨基水杨酸对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)诱导的溃疡性结肠炎的治疗作用。将60只BALB/c小鼠随机分为空白组、DSS模型组、5-氨基水杨酸(5-amino salicylic acid, 5-ASA)组、给药组,每组10只,空白组正常饮水,其他各组均饮用质量浓度(w/v)为0.04的DSS, 5-ASA组(40 mg·kg^(-1))、N-对氯苯磺酰基-4-氨基水杨酸(10、20、40mg·kg^(-1))采用灌胃给药方式。实验期间每日测量小鼠体重,观察各组小鼠大便形态(大便是否成形)和肉眼血便情况以及精神状态等。建模10天,取血后处死小鼠,解剖并摘取重要脏器以及结肠组织,称取脏器重量,测量结肠长度。通过苏木精-伊红(hematoxylinand eosin,HE)染色对各组小鼠的重要脏器(心、肝、肺、肾)和结肠组织进行病理学评分。通过ELISA检测血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白细胞介素1(interleukin 1 beta, IL-1)、白细胞介素6(interleukin6,IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白2(macrophageinflammatoryprotein2,MIP-2)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)等炎症因子的表达。实验结果显示,建模第4天, DSS模型组小鼠出现便血的情况,第7日模型组便血小鼠数量上升至10只,造模后5-ASA组及给药组小鼠出现便血和腹泻。DSS模型组小鼠从建模第4天起出现精神状态差,体重下降明显,给药组和5-ASA组小鼠精神状态较好,体重接近于空白组小鼠(P <0.01)。给药组的结肠长度明显大于DSS模型组。HE染色结果显示, DSS模型组小鼠结肠黏膜层出现重度炎症细胞浸润,局部出现不同程度的坏死,坏死处已有成纤维细胞增生,黏膜肌层组织出现炎症细胞浸润;中剂量组(20mg·kg^(-1))结肠黏膜表现为轻度慢性炎症和少量炎性细胞浸润,情况略有改善;高剂量组(40mg·kg^(-1))小鼠结肠黏膜结构基本恢复正常,上皮结构较完整,少量炎症细胞浸润。ELISA结果显示,给药组小鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α、MIP-2及MPO的含量较模型组显著降低。因此可以得出, N-对氯苯磺酰基-4-氨基水杨酸有治疗DSS诱导UC模型的作用。

N-[4-[2-[乙酰基[2-萘氧基]乙基]氨基]-乙基]苯甲磺酰胺对离体豚鼠心房肌的影响

目的 考察 N-[4-[2 -[乙酰基 [2 -萘氧基 ]乙基 ]氨基 ]-乙基 ]苯甲磺酰胺 (MS0 0 49)对离体豚鼠心房肌的影响对心肌电生理特性 :收缩性、自律性、兴奋性的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法 采用离体豚鼠心房肌 ,测定 MS0 0 49对心房收缩力、心率、功能不应期、兴奋性、自律性、静息后增强及正阶梯现象的影响。结果 MS0 0 491 0 - 8～ 1 0 - 5mol/L可延长左心房功能不应期 ,降低右心房收缩性及心率。MS0 0 49(1× 1 0 - 6 mol/L)对肾上腺素诱发左心房自律性无明显影响 ,对兴奋性亦无显著影响。但可显著抑制左心房正阶梯现象及静息后增强效应。结论 MS0 0 49可能作用于心肌钾通道 ,同时对心肌钙内流亦有非选择性的抑制作用。

4-(2-N,N-二甲氨基-乙基)磺酰基-苯肼的合成

芳香肼4-(2-N,N-二甲氨基-乙基)磺酰基-苯肼是阳离子荧光增白剂CH制备的重要中间体,采用对位酯为原料,经过水解,加胺得到芳香胺,再经重氮化、还原的合成路线得到。还原过程中采用氯化亚锡作为还原剂提高芳香肼的收率(85%)。用熔点、红外、核磁、元素分析对产品结构进行表证。

[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(N-甲基-N-甲磺酰基氨基)嘧啶-5-基]甲醇含量测定和有关物质检查

目的:建立[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(N-甲基-N-甲磺酰基氨基)嘧啶-5-基]甲醇(瑞舒伐他汀中间体Ⅵ)含量及其有关物质的测定方法。方法:采用高效液相色谱法检测3批样品中主成分和有关物质的含量。色谱柱为Grace-Alltima C18;流动相为乙腈-0.025mo·lL-1磷酸二氢钠溶液(57∶43);检测波长235nm为主成分测定波长,220nm为有关物质测定波长;流速为1.0mL·min-1;柱温为25℃。结果:主成分与其有关物质均能完全分离;主成分检测浓度线性范围为65.20～391.18μg·mL-1(r=0.9999);低、中、高3个浓度回收率分别为99.16%、98.73%、100.59%(RSD分别为0.59%、0.67%、1.06%)。有关物质检测限为195.8ng·mL-1。3批样品中主成分含量分别为98.48%、99.32%、98.14%,有关物质含量分别为0.17%、0.13%、0.17%。结论:本方法准确、可靠、专属性强,可用于瑞舒伐他汀中间体Ⅵ的含量测定及质量控制。

GC法测定[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(N-甲基-N-甲磺酰基氨基)嘧啶-5-基]甲醇中的残留溶剂

目的:建立以气相色谱法测定瑞舒伐他汀中间体[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(N-甲基-N-甲磺酰基氨基)嘧啶-5-基]甲醇中乙醇、丙酮、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、甲苯和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)残留量的方法。方法:以二甲基亚砜为溶剂,苯为内标,在DB-624毛细管柱上分离各组分,用氢火焰离子化检测器检测,柱温采用程序升温,载气为氮气,流速为1.0mL·min-1,进样口温度为220℃,检测器温度为250℃,分流比为10:1。结果:乙醇、丙酮、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、甲苯和DMF的检测浓度线性范围分别为25.0～350.0、24.9～348.6、3.2～44.8、1.6～22.4、24.1～337.4、4.5～63.0、5.4～75.6μg·mL-1(r>0.995),平均回收率为83.7%～113.8%,日内RSD小于4.2%,日间RSD小于4.6%。样品中乙醇、丙酮、二氯甲烷、DMF均未检出,其余溶剂均不超过限量。结论:该方法操作简便,准确度高,适用于[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(N-甲基-N-甲磺酰基氨基)嘧啶-5-基]甲醇中残留溶剂的检测。

基于HepaRG活细胞的N-乙酰基转移酶1活性测定方法的建立与评价

目的建立基于人类肝癌HepaRG活细胞的N-乙酰基转移酶1(NAT1)活性测定方法,并对其测定结果进行评价。方法 HepaRG细胞用含10%牛血清和青、链霉素培养液进行培养。用免疫印迹技术考察培养24,48和72 h的HepaRG细胞中NAT1表达情况;用噻唑蓝实验测定NAT1底物4-氨基水杨酸(4-ASA)孵育24和48 h对细胞活力的影响,分别用液-质联用技术及免疫印迹技术考察不同浓度4-ASA对HepaRG细胞中NAT1活性及蛋白表达的影响,比较基于HepaRG活细胞的NAT1活性测定方法与传统组织/细胞裂解法对NAT1活性测定结果的影响。结果与培养24 h的HepaRG细胞相比(0. 71±4. 00×10^(-3)),培养48和72 h的HepaRG细胞中NAT1的表达量显著增加,分别为(0. 80±7. 00×10^(-3))和(1. 04±0. 04),差异均有统计学意义(均P <0. 05)。与对照组相比,浓度为5～100μmol·L^(-1)的4-ASA孵育HepaRG细胞24和48 h,对其活力无明显影响(均P> 0. 05); 25～100μmol·L^(-1)的4-ASA孵育HepaRG细胞8 h,对NAT1蛋白表达无明显影响(均P> 0. 05),且50～75μmol·L^(-1)的4-ASA孵育HepaRG细胞,培养液中4-ASA代谢物的生成量与底物浓度成正比。NAT1活性测定结果显示,HepaRG活细胞法测得的结果略低于传统的组织/细胞裂解法所测得的结果(P <0. 05或P <0. 01),但两者的酶促反应趋势比较相似。结论以4-ASA为反应底物建立的基于HepaRG活细胞的NAT1活性测定方法具有操作简单、结果稳定、可动态检测等优势,有望用于NAT1活性的动态测定及NAT1特异性抑制的高通量筛选。

瑞舒伐他汀钙的合成工艺改进

以(4R-cis)-6-醛基-2,2-二甲基-1,3-二氧己环-4-乙酸环戊酯和[4-[4-氟苯基-6-(1-甲基乙基)-2-[N-甲基-(N-甲磺酰基)氨基]]-5-嘧啶基]甲基溴化三苯基磷为起始原料,经维悌希反应、水解、成盐等反应制备瑞舒伐他汀钙,产品纯度99.2%,总收率为79.2%,其结构经ESI-MS、1H NMR确证。