N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)对家蚕毒性的半致死剂量调查

N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)是一种能诱导生物体产生随机点突变的烷化剂。为了完善利用MNU诱导家蚕突变的实验体系,用MNU处理家蚕品种大造的5龄第3天幼虫、化蛹第5天蛹、羽化当天的雄蛾及产后4～6 h的受精卵,通过Bliss法计算MNU对家蚕的半致死剂量(LD50)。结果显示MNU对不同发育时期家蚕的LD50值存在一定的差异:MNU对家蚕5龄第3天幼虫雌雄个体的LD50分别为28.735、20.157μg/头;对化蛹第5天蛹雌雄个体的LD50分别为56.466、54.672μg/头;对羽化当天的雄蛾的LD50为273.94μg/头;对产后4～6 h的受精卵的LD50为7 288.8μg/mL。实验数据表明,家蚕幼虫对MNU的毒性耐受能力差,蛾和卵的耐受能力较强;雌性个体对MNU毒性的耐受能力比雄性个体更强。

N-甲基亚硝基脲诱导小鼠胸腺淋巴瘤TCR基因重排分析

目的探讨N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的小鼠胸腺淋巴瘤的单克隆起源。方法采用巢式PCR方法,对8例MNU诱导的胸腺淋巴瘤组织进行T细胞受体β链(TCRβ)和γ链(TCRγ)克隆性基因重排分析,并对TCRγ基因重排的PCR产物直接测序。结果 8例胸腺淋巴瘤检测TCRβ和TCRγ均呈克隆性基因重排。DNA序列测定证实TCRγ基因PCR扩增产物为基因重排产物。结论巢式PCR TCR基因重排检测及DNA序列分析证实,MNU诱导的小鼠胸腺淋巴瘤是来源于T细胞的肿瘤。

N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）对家蚕毒性的半致死剂量调查

N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）是一种能诱导生物体产生随机点突变的烷化剂。为了完善利用MNU诱导家蚕突变的实验体系，用MNU处理家蚕品种大造的5龄第3天幼虫、化蛹第5天蛹、羽化当天的雄蛾及产后4～6h的受精卵，通过Bliss法计算MNU对家蚕的半致死剂量（LD50）。结果显示MNU对不同发育时期家蚕的LD50值存在一定的差异：MNU对家蚕5龄第3天幼虫雌雄个体的LD50分别为28．735、20．157μg／头;

N-甲基亚硝基脲诱导胸腺淋巴瘤病理形态学及超微结构研究

本研究探讨N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的小鼠胸腺淋巴瘤的肿瘤细胞起源及分型。应用光学显微镜、透射电子显微镜和免疫组织化学方法,对诱发肿瘤进行观察。结果表明,光学显微镜下胸腺结构破坏,代之以弥漫分布的中等大小的淋巴样肿瘤细胞。免疫组织化学检测显示,瘤细胞表达CD3和TdT。超微结构观察显示,瘤细胞表面无突起,核形相对规则或伴有扭曲核,胞质内细胞器极少。结论:MNU诱导的所有肿瘤为胸腺T淋巴母细胞淋巴瘤。

海藻玉壶汤对N-甲基亚硝基脲诱导小鼠胸腺淋巴瘤的疗效研究

目的研究N-甲基亚硝基脲诱导胸腺淋巴瘤小鼠的体征,观察海藻玉壶汤对小鼠症状及肿瘤进展的影响。方法每周1次、连续5周给小鼠腹腔注射N-甲基亚硝基脲建立小鼠胸腺淋巴瘤模型,观察诱癌过程中小鼠外观和外耳微循环变化,用血液流变学指标评价N-甲基亚硝基脲诱导胸腺淋巴瘤小鼠的体征,并在模型建立同时用海藻玉壶汤进行治疗,考察其对小鼠症状及肿瘤进展的影响。结果 N-甲基亚硝基脲诱导胸腺淋巴瘤过程中小鼠逐渐出现畏寒喜暖、踡缩少动、弓背毛松、外耳和尾部血管紫暗现象,同时全血黏度及红细胞聚集指数增高。海藻玉壶汤可以减弱上述体征,阻止肿瘤进展。结论 N-甲基亚硝基脲诱导的胸腺淋巴瘤小鼠表现为痰凝血瘀体征,海藻玉壶汤能改善小鼠症状和体征,阻止肿瘤进展。

N-甲基亚硝基脲诱发大白鼠膀胱肿瘤病理学动态观察

目的 研究N-甲基亚硝基脲(MNU)诱发大白鼠膀胱肿瘤的发生、发展过程。方法 以MNU为诱癌剂,进行大白鼠膀胱灌注,对其诱发的膀胱肿瘤过程的不同时期进行动态观察。结果 第1次MNU灌注后第2周8/10只出现单纯增生,第6周9/10只表现为乳头状肿瘤,第8周10/10只出现膀胱癌,主要为表浅膀胱癌,第10周6/10只为浸润癌。结论 MNU诱发的肿瘤发生、发展经历了从单纯增生→乳头状、结节状良性增生→乳头状肿瘤→非浸润癌→浸润癌这样一个典型病理过程。

川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲致光感受器细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲(NmethylNnitrosourea,MNU)致大鼠视网膜损伤的作用。方法大鼠生后47d,腹腔注射不同剂量的川芎嗪注射液;50d注射MNU60mg·kg-1。测量视网膜总厚度;TUNEL和RTPCR法分别检测细胞凋亡、cjun和cfos的表达。结果川芎嗪注射液可剂量依赖性地增加周边视网膜总厚度和降低凋亡指数,并抑制MNU诱导的即早基因表达。结论川芎嗪通过下调基因c-jun和c-fos的表达,抑制光感受器细胞凋亡,从而部分保护MNU引起的视网膜损伤。

N-甲基亚硝基脲诱导大鼠膀胱肿瘤动物模型的实验研究

目的观察N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导SD大鼠膀胱肿瘤的作用及动态过程。方法MNU大鼠膀胱灌注2mg/次,1次/2周,共4次,光镜下对其诱发的膀胱肿瘤过程的不同时期进行动态观察。结果膀胱灌注6周时有原位癌改变,8周时膀胱内有癌性肿块,10～12周发展为浸润性癌,组织学改变及病理学特征与人膀胱癌十分相似;12周大鼠膀胱癌模型的病理分期与6～10周相比较,其病理分期于第12周有统计学意义(P=0.038)。结论MNU灌注诱导大鼠膀胱癌方法简便、可靠、诱癌率高,是理想的肿瘤动物模型。

N-甲基亚硝基脲诱导的胸腺淋巴瘤小鼠模型改进

本研究的目的旨在进一步提高N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导小鼠胸腺淋巴瘤模型的成瘤率并降低其死亡率。在前期实验的基础上,对给药方案和实验周期进行了调整。第0、4周2次给C57BL/6小鼠腹腔注射MNU诱导液,分组分剂量注射。注射后观察动物一般情况。于第24周处死全部小鼠,解剖检查胸腺肿瘤的发生及其他脏器情况,并应用病理学和免疫组织化学方法,对诱发的胸腺淋巴瘤及其侵袭脏器进行研究并鉴定肿瘤细胞来源、分型。结果表明:第25周83.3%(55/66)实验小鼠产生胸腺淋巴瘤,其中5只死亡,死亡率7.6%。结论:通过调整给药方案和实验周期后,使该模型的成瘤率从以前的67.5%提高到83.3%,死亡率从10%降低至7.6%。

茶多酚早期干预对N-甲基亚硝基脲诱发膀胱肿瘤影响的实验研究

目的研究茶多酚早期干预是否能够抑制或拮抗N-甲基亚硝基脲诱发膀胱肿瘤的发生。方法将72只雌性Wistar大鼠随机分为对照组、实验组各36只,两组采用膀胱灌注法给予N-甲基亚硝基脲,对照组同时给予0.9%NaCl溶液灌胃,实验组予茶多酚灌胃;分别于实验后第3、5、7、9、11、13周处死6只大鼠获取膀胱标本,观察两组急慢性炎症、不典型增生和癌肿的发生率。结果对照组从第3周起发生膀胱黏膜不典型增生,第9周逐步出现膀胱癌,第13周癌变率100%;实验组未见膀胱癌发生;组间病理学分类情况比较,第13周癌变情况差异有统计学意义(P<0.05)。两组病理计分情况同期比较,除第3周外,其余观察时点差异均有统计学意义(P<0.05)。结论茶多酚可有效拮抗、抑制N-甲基亚硝基脲诱发膀胱肿瘤的发生。

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍复合法构建胃癌前病变气虚血瘀证大鼠模型

目的建立胃癌前病变(PLGC)气虚血瘀证病证结合大鼠模型。方法将30只SD大鼠分为正常对照组(14只)和模型组(16只),模型组采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常、乙醇灌胃、氨水自由饮用、雷尼替丁饲料喂养五因素复合造模法建立PLGC大鼠模型。观察大鼠表征进行证候判定,检测大鼠体质量、24 h进食量和24 h饮水量,HE染色观察胃组织病理变化。结果与正常对照组比较,模型组大鼠出现活动度减少、倦怠嗜卧、眼球黯红、毛枯黄无泽、大便不成形、唇青紫、舌黯红、尾部瘀点等表征;第6周开始体质量明显下降(P<0.01),24 h进食量和饮水量明显减少(P<0.05,P<0.01);胃黏膜腺体排列紊乱,可见大量杯状细胞,细胞浆嗜碱性,细胞核大、深染、不规则,黏膜肌层浸润破坏。结论MNNG复合造模法可成功复制PLGC气虚血瘀证大鼠模型,本研究可为构建PLGC中医证候模型提供新方法。

N-甲基-N-亚硝基脲诱导大鼠视网膜变性早期基因表达谱分析

背景N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）诱导的大鼠光感受器细胞凋亡可用于研究视网膜变性类疾病，但视网膜变性类疾病早期基因水平的研究尚未见报道。目的应用基因芯片技术研究MNU诱导的视网膜变性大鼠早期基因表达谱的变化。方法6周龄雌性SD大鼠50只分为正常组20只、12h模型组20只和24h模型组10只。模型组大鼠皮下注射MNU（40mg／kg），正常组大鼠皮下注射等容量的生理盐水作为对照。分别于造模后12、12、24h处死正常组和12h模型组、24h模型组大鼠，大鼠右眼球进行常规视网膜组织病理学检查，正常组和12h模型组大鼠左眼的新鲜视网膜用基因芯片技术检测差异基因的表达，用荧光实时定量PCR（real—timePCR）法验证基因芯片技术检测出的差异表达率≥2．0的基因mRNA表达水平。结果全层视网膜厚度测量表明，24h模型组大鼠的厚度值明显低于正常组大鼠和12h模型组大鼠，差异均有统计学意义（t=9．926，P=0．002；t=2．736，P=0．028）。24h模型组大鼠外核层厚度值为（26．58±2．90）仙m，明显低于正常组的（38．11±1．01）μm和12h模型组的（35．07±3．03）μm，差异均有统计学意义（t=6．028，P=0．009；f=6．839，P=0．006），正常组与12h模型组间大鼠全层视网膜厚度和外核层厚度值比较差异均无统计学意义（全层厚度：t=1．541，P=0．324；外核层厚度：t=2．040，P=0．134）。大鼠cDNA基因芯片技术检测结果表明，12h模型组大鼠全部17000个基因的表达谱中涉及生物过程的基因为142个，涉及分子功能的基因为94个，排除重复基因共有74个基因，差异表达基因主要涉及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、Toll样受体通路和细胞凋亡通路。对基因芯片技术检测的差异表达率≥2．0的基因进行的real．timePCR定量分析表明，CCL2、，L—Jb、CCL3、c-fos、c—myc、p53和MMP3基因mRNA表达值与基因芯片技术检测的表达趋势一致。结论MNU诱导的视网膜变性早期有明显的基因表达改变。基因芯片检测的基因表达改变结果与real—timePCR定量分析结果一致。

骨髓间充质干细胞(MSCs)对N-甲基-N-亚硝脲(MNU)诱导的C57BL小鼠视网膜变性的治疗作用

目的观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)诱导的C57BL小鼠视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)的治疗作用。方法应用不同剂量(30 mg·kg^(-1)、45 mg·kg^(-1)、60 mg·kg^(-1)、75 mg·kg^(-1)、90 mg·kg^(-1))的MNU腹腔注射给予C57BL小鼠和MNU作用不同时间(1 d、3 d、7 d)后,通过视网膜电图(electroretinogram,ERG)和HE染色检测小鼠视网膜的电生理功能和组织形态变化,优化建立稳定的RP动物模型的最佳条件;在此动物模型的基础上,经玻璃体内注射和尾静脉注射给予MSCs移植,并应用ERG和HE染色评估MSCs对MNU诱导的RP的治疗作用。结果与对照组相比,30 mg·kg^(-1)、45mg·kg^(-1)剂量的MNU可引起视网膜形态和功能的轻微损伤,而60 mg·kg^(-1)及其以上剂量的MNU可使视网膜ERG波幅明显降低(均为P<0.001),视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)厚度明显变薄(P<0.001),损伤严重;与对照组相比,60 mg·kg^(-1)的MNU作用后1 d和3 d,视网膜ERG波形开始降低,形态结构开始出现ONL厚度变薄的损伤,作用7 d时,ERG波形呈现熄灭型(均为P<0.001),ONL厚度明显变薄(P<0.001),内外核层融合,损伤严重。与MNU单独作用组相比,60 mg·kg^(-1)MNU作用1 d后给予MSCs移植,7 d后MSCs组内ONL厚度增加(P<0.001),视网膜ERG波形趋于恢复(均为P<0.001)。结论MSCs移植对MNU诱导的视网膜退行性变有一定的治疗作用。

胃癌高发区食品中N-甲基亚硝基脲的分离鉴定

目的：从亚硝化食品中分离鉴定Ｎ亚硝酰胺。方法：用高效液相色谱（ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）光水解热裂解热能分析仪联机技术，从胃癌高发区食品鱼露亚硝化产物中直接分离、测定和制备热不稳定性Ｎ亚硝酰胺色谱组份；利用ＨＰＬＣ电喷雾离子化质谱计和ＨＰＬＣ紫外光谱仪联机技术，对该色谱峰的制备组份进行结构确证。结果：从亚硝化鱼露中直接分离到一种热不稳定性Ｎ亚硝基化合物，其色谱保留时间与Ｎ甲基亚硝基脲（Ｎｎｉｔｒｏｓｏｍｅｔｈｙｌｕｒｅａ，ＮＭＵ）相同；进行结构确证研究发现，该色谱峰的质谱特征峰（ｍ／ｚ６４、１０２、１４５）及紫外吸收光谱（λｍａｘ＝２３０ｎｍ）与ＮＭＵ标准品相同。结论：实验结果充分说明该色谱峰含ＮＭＵ，首次直接证明了亚硝化食品中存在ＮＭＵ。

几种影响N-甲基-N-亚硝基脲诱导向日葵叶绿体基因突变的生理因素

用诱变剂N 甲基 N 亚硝基脲 (NMU)诱变向日葵种子时 ,温度、2 ,4 二硝基苯酚 (DNF)、利福平 (R)、KT、硝酸铵(AA)、二氨基苯甲酸 (DABA)和处理时间都会影响NMU对向日葵叶绿体的突变诱导效果。突变诱导的最佳温度为 15℃ ,2 ,4 二硝基苯酚、利福平、硝酸铵和二氨基苯甲酸明显降低花叶植株的频率 ,而KT则增加叶绿体突变的频率 ,在 0 .0 15 %KT作用下 ,叶绿体突变频率由 (8.5± 2 .9) %提高到 (2 5 .0± 4 .2 ) %。咖啡因 (COF)对诱导叶绿体突变没有任何作用。

姜黄素对N-甲基亚硝基脲诱发膀胱癌大鼠化学干预作用及机制分析

目的分析姜黄素对N-甲基亚硝基脲（MNU）诱导的膀胱癌大鼠模型的化学干预作用及作用机制。方法将100只SD大鼠随机分为四组,对照组（10只）、模型组（10只）、干预组（40只）和治疗组（40只）,对照组等时等量的膀胱灌注生理盐水,其他三组均对大鼠进行膀胱灌注MNU,诱发SD大鼠形成膀胱癌模型（将浓度为1 mg/m L的MNU溶液灌注入膀胱内,MNU灌注时间为第2、4、6和8周,每次2 mg,每2周1次,共4次）,模型组在诱发大鼠膀胱癌时膀胱灌注蒸馏水,干预组在膀胱灌注MNU时灌注姜黄素溶液（400μmol/L）,即第1、3、5、7和9周膀胱灌注,第10周安乐死大鼠;治疗组在诱发大鼠膀胱癌模型后膀胱灌注姜黄素溶液（400μmol/L）,即在第10、12、14、16、18周时间内持续膀胱灌注,在第19周时处死大鼠,获得的膀胱组织依次通过苏木精-伊红（HE）染色,观察病理变化;TUNEL末端标记法测定肿瘤组织中细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果模型组在第10周时膀胱癌的发生率为90%（9/10）,干预组在第10周时大鼠膀胱癌的发生率为12.5%（5/40）,治疗组第10周时膀胱癌的发生率为92.5%（37/40）,比较干预组与模型组大鼠膀胱癌的发生率差异有显著性（P〈0.05）,说明姜黄素对MUN诱发膀胱癌大鼠有明显的化学干预作用;在治疗组膀胱癌形成后给予姜黄素治疗,第19周膀胱癌发生率为78.4%（30/37）,与治疗前的第10周比较说明姜黄素对膀胱癌有治疗作用,可以延缓膀胱癌的恶化。TUNEL实验证实姜黄素显著促进膀胱癌细胞的凋亡,抑制膀胱癌细胞的增殖。Western blot结果发现,姜黄素抑制NF-κB的激活,有效下调NF-κB调节的基因产物的表达。结论姜黄素对MNU诱导的膀胱癌大鼠模型有明显的的化学干预作用,且作用机制可能是通过抑制NF-κB的激活并且有效下调NF-κB调节的基因产物,来调节膀胱癌中相关蛋白的表达机制,即抑制增殖,诱导凋亡,进一步发挥抗癌的化学干预作用以及预防膀胱癌的复发。

N-甲基亚硝基脲诱导大鼠膀胱癌模型的动态观察

目的探讨N-甲基亚硝基脲（MNU）诱发SD大鼠膀胱癌的模型构建及动态变化。方法采用MNU进行大鼠膀胱灌注2mg／次，每2周1次，共4次。分别观察实验第3、5、7、9、12和14周的膀胱黏膜改变。结果膀胱灌注3周出现不典型增生，5周上述改变明显，7周有原位癌改变，9周膀胱内可见明显癌性肿块，12—14周证实为膀胱乳头状癌或浸润性癌，9周的致癌率为100％（6／6），其组织学改变及病理学特征与人膀胱癌相似。结论MNU灌注诱导构建大鼠膀胱癌模型方法简便、可靠。致癌经历上皮增生、乳头状瘤形成和癌变过程，为比较理想的动物模型。

不同N-甲基-N-亚硝基脲处理下高粱离体花粉的活力解析

为了确立高粱离体花粉在N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)的常温处理下维持较高活力的适宜条件,通过TTC染色法研究了MNU浓度、处理时间、磷酸盐浓度与p H值对离体花粉活力的影响。结果表明,处理后花粉的存活率与MNU浓度、处理时间呈负相关,随磷酸盐浓度、p H值的增大呈先升高后降低的变化规律;各诱变因素对处理后花粉存活率影响的大小顺序为MNU浓度>处理时间>磷酸盐浓度>pH。当MNU浓度为0.5 mmol/L、处理时间为40 min、磷酸盐浓度为10 mmol/L、p H值为4.8时,受处理花粉的存活率达到约40.0%的最高值。研究结果对于基因水平上高粱种质的创新具有重要意义。

N-甲基-N-亚硝基脲影响新生小鼠玻璃体血管退化的时序

目的：探讨生后不同时间和不同剂量N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）对小鼠视网膜发育和玻璃体血管系统退化的影响及其相互关系。方法：MNU单次腹腔注射制备小鼠视网膜发育不良模型，取左侧眼球切片后行H—E染色，观察眼球主要结构的形态改变，取右侧眼球玻璃体血管铺片后行DAPI染色，进行玻璃体血管定量分析。结果：高剂量MNU（75mg／kg）在P1及P9给药，对视网膜发育及玻璃体退化影响有差异。在P1给药时，出现小眼球畸形和晶状体后瘢块；视网膜因视细胞呈玫瑰花结样排列而形成皱襞样结构，至P18-P28，视网膜皱襞逐渐消失，P28后仅表现为外核层的局部不规则。在P9给药时，除在P28后仍有玻璃体动脉束残留外，未见视网膜退变和其他眼部病理改变，但玻璃体血管定量分析显示直到P42仍有退化血管残留。结论：高剂量MNU（75mg／kg）能诱导新生小鼠视网膜发育不良，且视网膜发育不良和玻璃体退化延迟在发生时间上存在相关性，提示感光细胞发育障碍对玻璃体血管退化具有一定作用。