基于酰胺甲基化策略的GluA2内吞阻滞剂环肽的合成及评价

目的在GluA2-3Y结构基础上通过环化和N-甲基化策略设计甲基化环肽,提高化合物与靶标的亲和力、神经保护活性及稳定性。方法基于Fmoc固相合成法合成目标多肽,经RP-HPLC对多肽进行分析和纯化。采用表面等离子共振技术测试多肽与BRAG2蛋白的亲和力。通过CCK8法检测多肽对HT22细胞的毒性。构建氧糖剥夺(OGD)模型评价多肽的体外神经保护活性。通过HPLC检测多肽的血浆稳定性。结果基于Fmoc固相合成法共设计合成14条多肽,经RP-HPLC分析纯度均在90%以上。表面等离子共振结果显示:环肽c10c-Y-5表现出与对照药Ac-3Y相近的亲和力,解离常数KD为0.68μmol·L^(-1),与BRAG2蛋白有较强的亲和力。CCK8法测试多肽的毒性结果显示:10μmol·L^(-1)多肽在HT22细胞上基本没有毒性。环肽在OGD模型上对HT22细胞的神经保护活性结果显示:与模型组相比,环肽c10c-Y-2在1μmol·L^(-1)和10μmol·L^(-1)下有神经保护活性(P<0.05);环肽c10c-Y-5在3个浓度下有神经保护活性(P<0.05);环肽c10c-Y5G6在10μmol·L^(-1)下有神经保护活性(P<0.01)。环肽的血浆稳定性实验结果显示:c10c-Y-2和c10c-Y-5经环化和N-甲基化修饰后,与线性肽相比稳定性有大幅度提高。结论本研究应用SPR技术和多肽在OGD模型上对HT22细胞的神经保护活性评价手段,筛选出了具有潜在神经保护活性且增强了血浆稳定性的环肽c10c-Y-2和c10c-Y-5,可为多肽药物的修饰改造提供思路和依据。