N-甲基-4-异亮氨酸环孢素通过抑制线粒体通透性转换孔减轻凋亡诱导因子的核易位和细胞凋亡

目的探讨鱼藤酮诱导小鼠海马神经元HT22细胞凋亡的机制,观察环孢素A(cyclosporin A,CsA)衍生物N-甲基-4-异亮氨酸环孢素(N-methyl-4-isoleucine-cyclosporin,NIM811)对鱼藤酮诱导的HT22细胞毒性的保护作用。方法使用线粒体复合物Ⅰ抑制剂鱼藤酮培养小鼠海马神经元HT22细胞,使用第3~7代的HT22细胞,分成control组、鱼藤酮组、鱼藤酮+NIM811组和NIM811组。NIM811在鱼藤酮刺激3 h前加入培养基。采用Alamar Blue法检测HT22细胞活性,二氢乙二胺(DHE)荧光探针测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,四甲基罗丹明甲酯(tetramethylrhodamine methyl ester,TMRM)测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。鱼藤酮孵育24 h后,提取细胞胞浆和胞核蛋白,Western blot检测细胞核中凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)及胞浆中细胞色素C(cytochrome C,cyto C)、caspase-9、Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果鱼藤酮使HT22细胞活力降低至56.26%(P<0.01),细胞明显缩小,核浓缩,细胞周围形成透明圈。ROS产生增加(P<0.05),MMP降低(P<0.01),AIF核易位,并引起线粒体cyto C释放和caspase-9激活,Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01)。NIM811预处理增强了细胞活力,降低了ROS的产生,维持了线粒体膜电位,抑制了AIF核易位,减轻了线粒体cyto C的释放和caspase-9的激活,抑制Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达降低。结论NIM811通过抑制ROS的产生,维持线粒体MMP,抑制线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)的形成,减少线粒体cyto C的释放,减轻AIF核易位,从而减轻鱼藤酮诱导的HT22细胞凋亡,对帕金森病具有保护作用。

不同液体治疗方案对患者脑组织含水量、颅内压以及脑组织水通道蛋白-4和N-甲基-D-天冬氨酸受体-1表达的影响

目的探讨使用不同胶体以及不同晶胶比对患者颅内压、脑组织含水量和脑组织水通道蛋白-4(AQP-4)、N-甲基-D-天冬氨酸受体-1(NMDAR-1)表达及术后格拉斯哥昏迷量表评分的影响。方法按随机单位组析因设计设置2个干预因素,即胶体因素(2水平:4%琥珀酰明胶、6%中分子羟乙基淀粉)和晶胶比因素(2水平:0∶1、1∶1)的所有组合,将32例进行癫痫灶区切除术的患者随机分为4组(n=8)。术中监测颅内压;术后检测切除脑组织中的脑水含量和AQP-4和NMDAR-1的表达;测定术后2 h患者的格拉斯哥昏迷量表评分。结果 6%中分子羟乙基淀粉较4%琥珀酰明胶以及晶胶比1∶1较晶胶比0∶1均可增加液体治疗期间的平均颅内压(F=55.714,P=0.000;F=142.432,P=0.000)、脑水含量(F=31.477,P=0.000;F=84.896,P=0.000)以及AQP-4(F=37.205,P=0.000;F=149.652,P=0.014)和NMDAR-1的表达(F=29.664,P=0.000;F=65.951,P=0.000),两者的影响均呈相加效果(颅内压:F=11.056,P=0.002;脑组织含水量:F=8.007,P=0.008;AQP-4的表达:F=9.845,P=0.004;NMDAR-1的表达:F=5.020,P=0.033);但术后2 h的格拉斯哥昏迷量表评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4%琥珀酰明胶较6%中分子羟乙基淀粉、晶胶比1∶1较晶胶比0∶1对脑含水量及颅内压的控制更好,更适合神经外科围手术期使用;但不同胶体和晶胶比的液体治疗方案对术后神经精神评分无明显影响,均可安全使用。

N-(4-吡啶甲基)-L-丝氨酸铜配合物的合成、晶体结构和磁性

氨基酸还原希夫碱HL(N-(4-吡啶甲基)-L-丝氨酸)与CuCl_2·2H_2O在室温条件通过扩散法合成了配位聚合物{[Cu_2(L)_2(Cl)_2]·H_2O}_n(I)。采用元素分析、红外光谱、X-射线单晶衍射、粉末衍射和热重分析进行了表征。两个结晶学独立Cu(Ⅱ)包含于其晶体结构中,Cu1为变形八面体CuO_2N_2Cl_2几何构型;Cu2则呈现略有变形的四方锥结构。Cu1和Cu2通过配体L-的吡啶氮原子以及氯离子的桥连作用连接为2D网状结构。变温磁化率实验表明在温度为2~300 K,配合物I表现为铁磁性耦合。

氯通道阻滞剂对N-甲基-D-天冬氨酸诱导离体海马神经元凋亡的保护作用

目的:观察氯通道阻断剂4-乙酰氨基-4’-异氰酸芪-2,2’-二磺酸(SITS)对N-甲基-D-天冬氨酸诱导大鼠离体海马神经元凋亡的保护作用。方法:实验于2004-09/12在南方医科大学神经生物教研室完成。新生1dSD大鼠64只,无菌断头取双侧海马,胰酶消化,离心,筛网过滤,把神经元种植在96孔或24孔培养板内。取离体培养12d的神经元,随机分为正常对照组、N-甲基-D-天冬氨酸组、N-甲基-D-天冬氨酸处理时加SITS组和N-甲基-D-天冬氨酸处理后加SITS组。除正常对照组外,其他各组均加入含有N-甲基-D-天冬氨酸300μmol/L、甘氨酸5μmol/L的培养液,作用10min后更换培养液,N-甲基-D-天冬氨酸的作用时间是10min。N-甲基-D-天冬氨酸处理时加SITS组、N-甲基-D-天冬氨酸处理后再加SITS组分别于N-甲基-D-天冬氨酸作用时及作用10min后使用氯通道阻断剂SITS,SITS的作用终浓度是0.5mmol/L,作用时间18h。正常对照组神经元用DMEM/F12培养基换液。18h后进行Hoechst荧光染色和MTT实验,定量检测神经元凋亡数目和神经元存活率的变化。并对SITS抗凋亡的浓度效应(0-1000μmol/L)作以观察。结果:①SITS抗N-甲基-D-天冬氨酸作用的浓度效应:SITS浓度低于100μmol/L时,保护作用不明显,当浓度达到250、500、1000μmol/L时具有明显保护作用(P<0.05)。②神经元细胞核形态的观察:经Hoechst33258染色后,正常神经元的细胞核呈卵圆形,荧光显微镜下呈现均匀的淡蓝色荧光,凋亡的细胞皱缩变圆、染色质浓集或断裂或出现凋亡小体,呈强亮的蓝色荧光,凋亡计数显示,N-甲基-D-天冬氨酸可诱导31.44%左右神经元凋亡,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05),在N-甲基-D-天冬氨酸作用细胞的同时使用SITS,细胞的凋亡数目减少为19.23%,N-甲基-D-天冬氨酸作用10min后再使用SITS,细胞的凋亡数目升高为31.64%,两组相比差异有显著性(P<0.05)。③SITS在对N-甲基-D-天冬氨酸处理神经元前后神经元存活率的影响:N-甲基-D-天冬氨酸处理后的细胞存活率明显下降,在N-甲基-D-天冬氨酸作用细胞的同时使用SITS,细胞存活率为93.44%,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);N-甲基-D-天冬氨酸作用10min后再使用SITS,细胞存活率为73.95%,与N-甲基-D-天冬氨酸处理时加SITS组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:SITS作为氯通道阻断剂能抑制N-甲基-D-天冬氨酸诱导的神经元凋亡,对N-甲基-D-天冬氨酸诱导的海马神经元死亡有保护作用,且在N-甲基-D-天冬氨酸处理神经元前后使用作用效果不同,作用机制可能与N-甲基-D-天冬氨酸的效应和氯通道活动均被阻断有关。

7-甲氧基-4’-羟基异黄酮促进大鼠成骨细胞成骨性分化的作用机制

目的探讨7-甲氧基-4’-羟基异黄酮(MHIF)促进成骨细胞成熟矿化是否与NO/cGMP/sGC信号通路相关。方法检测成骨细胞经不同浓度(0,10^(-4),10^(-5),10^(-6),10^(-7),10^(-8) mol·L^(-1)) MHIF处理后骨钙素和碱性磷酸酶确定最适药物浓度。使用一氧化合成酶阻断剂N-单甲基-L-精氨酸(L-NMA)处理成骨细胞,观察MHIF对骨钙素和碱性磷酸酶影响,一氧化氮(NO)和3`-5`-环鸟苷-磷酸(cGMP)的含量;应用蛋白质印迹检测细胞中蛋白可溶性的鸟氨酸环化酶和蛋白激酶G的表达水平。结果经10^(-6 ) mol·L^(-1) MHIF处理后成骨细胞中碱性磷酸酶活性和骨钙素的含量升高,预先使用L-NMA处理成骨细胞后,MHIF提高成骨细胞中碱性磷酸酶活性和骨钙素含量的作用受到抑制,MHIF提高一氧化氮合酶(NOS)、NO、cGMP、sGC和PKG表达均受到抑制。结论 MHIF可通过NO/cGMP/sGC信号通路促进体外培养成骨细胞成熟与矿化。

AMPA与NMDA抗体重叠的自身免疫性脑炎合并眼阵挛-肌阵挛综合征1例报告

眼阵挛-肌阵挛综合征(OMS)是一种少见的神经系统综合征,与肿瘤相关,常见于儿童,成人少见,其特征是不自主、无节律、混乱、多向的眼球不自主运动,通常伴有四肢和躯干肌阵挛性抽搐、共济失调。抗α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑丙酸受体(AMPAR)与抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)抗体重叠的自身免疫性脑炎合并眼阵挛-肌阵挛综合征的病例报道更为少见,对其临床表现及治疗缺乏全面的认识。现报道1例AMPAR与NMDAR抗体重叠的自身免疫性脑炎合并眼阵挛-肌阵挛综合征患者,并基于此病例对国内外相关文献进行复习,以期提高临床医生的认识。

四种半胱氨酸前体药对小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的 研究 2 甲基四氢噻唑 4 羧酸 (2 methylthiazolidine 4 carboxylicacid ,MTCA) ,四氢噻唑 4 羧酸 (thiazolidine 4 car boxylicacid ,TCA) ,N ,N 双乙酰胱氨酸 (N ,N diacetylcystine ,DAC) ,N 乙酰半胱氨酸 (N acetylcysteine ,AcCYS)对对乙酰氨基酚 (paracetamol,APAP)致急性肝衰竭 (acuteliverfailure ,ALF)的保护作用。 方法 小鼠ipAPAP 90 0mg·kg-1后 ,分别ipMTCA ,TCA ,DAC ,AcCYS ,监测小鼠血液化学和肝组织损害程度 ,监测小鼠凝血功能 ,高效液相色谱法监测血浆支链氨基酸和芳香族氨基酸 ,观察病死率。结果 4种半胱氨酸前体药均不同程度抑制血液化学的变化 ,减轻肝脏病理损害 ,改善凝血功能 ,纠正血浆氨基酸紊乱并降低病死率。结论 MTCA和DAC对APAP引起小鼠急性肝衰竭有明显保护作用 ,并优于Ac CYS 。

MK-801及CNQX对尾末端截断后小鼠血清褪黑素含量变化的影响

目的观察谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK-801)、α-氨基3-羟基5-甲基4-异恶唑丙酸/海人藻氨酸(AMPA/Kainate)受体拮抗剂6-氰基-7-硝基喹喔啉-2,3-二酮(CNQX)对尾末端截断后小鼠血清褪黑素(MLT)含量变化的影响,为进一步研究截肢后中枢的可塑性变化提供依据。方法用ELISA法测定尾末端2.5 cm截断后2 h小鼠血清MLT含量,并观察静脉注射MK-801、CNQX对断尾后小鼠血清MLT含量变化的影响。结果与对照组比较,断尾后2 h小鼠血清MLT含量降低;MK-801、CNQX分别拮抗断尾引起的小鼠血清MLT含量的降低。结论断尾后2 h小鼠血清MLT含量降低;NMDA受体、AMPA/Kainate受体参与断尾引起小鼠血清MLT含量降低的过程。

四种半胱氨酸前体药对小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的:研究2-甲基四氢噻唑-4-羧酸(2-Methylthiazolidine-4-Carboxylic acid,MTCA),四氢噻唑-4-羧酸(Thiazolidine-4-carboxylic acid,TCA),N,N-双乙酰胱氨酸(N,N-diacetylcystine,DAC),N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,AcCYS)对醋氨酚(Acetaminophen,APAP)致急性肝衰竭(Acute liver failure,ALF)的保护作用。方法:小鼠ipAPAP900mg·kg-1后,分别ip MTCA、TCA、DAC、AcCYS,监测小鼠血液化学和肝组织损害程度,监测小鼠凝血功能,高效液相法监测血浆支链氨基酸和芳香族氨基酸,观察病死率。结果:四种半胱氨酸前体药均不同程度抑制血液化学的变化,减轻肝脏病理损害,改善凝血功能,纠正血浆氨基酸紊乱并降低病死率。结论:MTCA和DAC对APAP引起小鼠急性肝衰竭有明显保护作用,并优于AcCYS,TCA无明显保护作用。

Homer1a-mGluR5在抑郁症中作用的研究进展

Homer1a是由中枢神经系统即刻早期基因(immediate early genes,IEG)编码的支架蛋白质,广泛的临床及基础研究表明Homer1a不仅与多种神经精神疾病的发病有关,也是多种抗抑郁治疗方案的关键蛋白质。抑郁症的发病与1型代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor,mGluR1/5)的表达和可用性降低,N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)的功能障碍所致的突触可塑性失调相关。Homer1a对mGluR1/5的作用具有高度特异性。Homer1a过表达可通过增加突触后膜mGluR1/5的表达和可用性,调节突触后膜的离子型谷氨酸受体NMDAR和α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸受体(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid receptor,AMPAR),调节突触可塑性,最终发挥抗抑郁作用。Homer1a在突触活动的调节中发挥中心作用,因此了解Homer1a发挥作用的机制能为研究靶向Homer1a蛋白的抗抑郁药物提供新思路。

鬼臼毒素衍生物Lg-2对人肝癌细胞系HepG-2凋亡的诱导作用

目的研究N-(1-烃氧基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶基氧羰基)-L丙氨酸-4'-去甲-4-脱氧鬼臼酯(Lg-2)对人肝癌细胞系HepG-2的诱导凋亡作用及机制。方法分别设阴性对照组(只加HepG-2细胞)、VP-16处理组及Lg-2处理组3组,采用MTT法检测Lg-2对HepG-2细胞生长的影响,流式细胞术检测Lg-2对HepG-2细胞周期和凋亡的影响,荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测Lg-2对HepG-2细胞凋亡相关基因p53、Bax、Bc1-2、p21、Caspase 3表达的影响;设阴性对照组及Lg-2处理组2组,Hoechs33258染色检测Lg-2对HepG-2细胞形态学的影响。结果 MTT法证实Lg-2对HepG-2细胞增殖有明显的抑制作用,药物处理48 h,随药物浓度增加(同一时间时)抑制效应增强,Lg-2处理组各浓度HepG-2抑制率均高于VP-16处理组(P<0.05)。随药物作用时间的延长(同一浓度时)抑制效应增强,Lg-2处理组各作用时间HepG-2抑制率均高于VP-16处理组(P<0.05)。流式细胞术显示,Lg-2作用于HepG-2细胞24和48 h时,Lg-2处理组S期细胞比例与阴性对照组及VP-16处理组比较均明显增高,而G2/M期细胞显著减少。qRT-PCR检测细胞凋亡相关基因,结果表明Lg-2处理组与VP-16处理组相比Bc1-2 mRNA的表达显著降低(P<0.05),而p53、Bax、p21、Caspase3 mRNA的表达显著增高(P<0.05)。Hoechst33258染色显示Lg-2处理组细胞核固缩、碎裂,呈凋亡样改变。结论 Lg-2可抑制肝癌细胞增殖,使细胞阻滞在G2/M期,该过程可能与其上调p53、bax、p21、caspase3表达和下调bc1-2基因的表达有关。

谷氨酸受体与全身麻醉机制研究进展

谷氨酸（Glu）是哺乳动物脑内主要的兴奋性氨基酸,Glu受体是其结合靶点,其在脑内分布广泛,其中大脑皮质和海马的Glu受体密度最高。中枢Glu受体至少可分为5种类型,分别命名为N-甲基-D-天门冬氨酸（N-methyl-D-aspartale,NMDA）受体、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isox-azole-propionate,AMPA）受体、海人藻酸（kainic acid,KA）受体、代谢型Glu受体（metabotropic glutamete receptors,mGluR）和L-2-氨基-4-磷酸丁酸（L-AP4）受体。其中NMDA、AMPA、KA受体都是由Glu门控的阳离子通道,属离子型Glu受体;非NMDA受体mGluR和L-AP4受体均属于G蛋白偶联的Glu受体。

电针颈夹脊穴对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角谷氨酸受体及趋化因子受体表达水平的影响

目的:观察电针颈夹脊穴对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角谷氨酸受体N-甲基-D-天冬门氨酸(NMDA)、氨基-3-羧基-5-甲基异唑-4-丙酸(AMPA)及单核细胞趋化蛋白-1受体(CCR2)、趋化因子C-X3-C-基元受体1(CX3CR1)表达的影响。方法:将72只大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、电针组、L-α-氨基乙二酸(LAA)组、LAA+电针组,各12只。除空白组外,其余组大鼠均结扎右侧C_(7)脊神经建立神经病理性疼痛模型(假手术组仅暴露神经,不结扎)并结合鞘内置管处置。空白组正常饲养不予干预;假手术组与模型组同时间点按照电针组进行绑缚处理,每次20 min,连续14 d;电针组于术后第7天开始干预,电针双侧C_(7)夹脊穴,每次20 min,1次/d,连续治疗14 d;LAA组于术后第7天开始干预,鞘内注射LAA,5 nmol/次,1次/d,持续14 d;LAA+电针组于术后第7天开始干预,同时间点按照电针组与LAA组进行电针夹脊穴与5 nmol/次鞘内注射LAA。采用免疫荧光法检测各组大鼠C_(7)脊髓节段脊髓背角CXC3R1受体、CCR2受体的表达量;采用Real-Time PCR技术检测各组大鼠脊髓背角NMDA、AMPA受体的表达。结果:与空白组相比,假手术组大鼠脊髓背角NMDA、AMPA、CCR2、CX3CR1表达差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组相比,模型组大鼠脊髓背角NMDA、AMPA、CCR2、CX3CR1表达量均升高(P<0.05);同模型组相比,电针组、LAA组与LAA+电针组大鼠NMDA、AMPA、CCR2、CX3CR1表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且LAA+电针组相较于电针组、LAA组的NMDA、AMPA、CCR2、CX3CR1的表达量明显降低(P<0.05)。结论:电针颈夹脊穴可抑制神经病理性疼痛大鼠CCR2、CX3CR1活化,影响CC亚族趋化因子配体2(CCL2)、CX3CL1及其受体CCR2、CX3CR1的结合,并降低谷氨酸受体NMDA、AMPA活化,抑制了胶质细胞的活化及中枢敏化,进而减少促炎性细胞因子和生长因子释放,减少神经病理性疼痛发生。

高血氨诱导肝性脑病发生发展的研究现状

肝性脑病(hepatic encephalopathy,HE)是急、慢性肝衰竭的严重并发症,以星形胶质细胞病变为主要病理变化。肝性脑病的发病可能与多种因素有关,大量研究表明氨在HE发病过程中起关键作用。高血氨诱导星形胶质细胞上末梢型苯二氮类受体(peripheral-type benzodiazepine receptor,PTBR)、葡萄糖转运体-1(glucose tranporter-1,GLUT-1)、水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)和Na+/K+-ATPase基因表达上调;影响微管相关蛋-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)磷酸化及N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体表达;诱导一氧化氮(nitricoxide,NO)合成增加从而改变神经细胞功能。此外,氨能使脑内哇巴因类复合物生成增加,并能够使Na+/K+-ATPase的活性增加。对上述因素的研究将帮助我们理解氨诱导星形胶质细胞功能障碍的基本机制,并进一步制定防治肝性脑病的新策略。

氯胺酮快速抗抑郁机制及不良反应的研究进展

目的对氯胺酮治疗抑郁症的可能作用机制及临床不良反应进行系统阐述,以期为氯胺酮的临床研究及新一代抗抑郁药的研制提供思路及参考。方法从中国知网(CNKI)、万方中文数据库、Web of Science数据库及PubMed数据库检索2012年5月至2022年5月收录的相关文献;以“氯胺酮、艾司氯胺酮、抑郁症、难治性抑郁症、重度抑郁症、N-甲基-D-天冬氨酸受体、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑-丙酸受体、脑源性神经营养因子、雷帕霉素靶蛋白、肠道菌群、真核延伸因子2激酶、不良反应”为中文检索词,以“ketamine,esketamine,depression,treatment resistant depression,major depressive disorder,NMDAR,AMPAR,BDNF,TOR,gut microbiota,eEF2K,side effect”为英文检索词,最终纳入83篇文献进行研究分析。结果与结论氯胺酮是一种N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-d-aspartate receptors,NMDAR)拮抗剂,由(S)-氯胺酮和(R)-氯胺酮两种对映异构体按照1∶1的比例构成。已有证据表明其对抑郁症的治疗有着显著疗效。研究显示,氯胺酮的作用机制可能与NMDAR、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑-丙酸受体(α-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid receptor,AMPAR)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、肠道菌群、真核延伸因子2激酶(eukaryotic elongation factor 2 kinase,eEF2K)等有关。同时,多项研究显示氯胺酮可能导致神经毒性反应、拟精神病、心血管系统疾病,以及泌尿系统疾病等多种不良反应,导致其在临床应用及试验中存在一定局限性。因此,深入探讨氯胺酮的作用机制及临床不良反应应,探索氯胺酮可能的作用靶点极其重要。

2-氯乙醇经NMDAR/cAMP/PKA信号通路致星形胶质细胞AQP4蛋白表达增强

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)/环磷酸腺苷(cAMP)/cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)信号通路在2-氯乙醇上调星形胶质细胞(AS)表达水通道蛋白-4(AQP4)中的作用。方法①取对数生长期的AS予剂量为0.0、7.5、15.0和30.0 mmol/L 2-氯乙醇(设为相应剂量组)刺激12 h后,收集细胞进行检测。②取对数生长期的AS为空白对照组、抑制剂(MK-801或H89)对照组、2-氯乙醇组、抑制剂(MK-801或H89)干预组。空白对照组不予任何处理;抑制剂对照组仅予浓度为10.0μmmol/L MK-801或15.0μmmol/L H89处理;MK-801干预组以浓度为10.0μmmol/L的MK-801提前干预30 min,H89干预组以浓度为15.0μmmol/L的H89提前干预1 h;干预结束后,2-氯乙醇组和MK-801、H89干预组AS均予浓度为30.0 mmol/L的2-氯乙醇刺激12 h。③收集各组AS,采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测AS内AQP4、NMDAR受体主亚基(NR1)、NMDAR受体2B亚基(NR2B)、钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的蛋白和mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)和PKA的表达;采用比色法检测AS内钙离子(Ca^(2+))浓度,采用酶联吸附试验检测腺苷酸环化酶(AC)活力和cAMP水平。结果①30.0 mmol/L剂量组AS内AQP4、NR1、NR2B的蛋白与mRNA,PKA蛋白、CaMKⅡmRNA的相对表达水平以及p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白比值、Ca^(2+)浓度、AC活力、cAMP水平均高于0.0 mmol/L剂量组(P<0.05)。PKA蛋白相对表达水平和Ca^(2+)浓度均随着2-氯乙醇剂量的增加而增加(P<0.05)。②2-氯乙醇组AS内AQP4蛋白相对表达水平、Ca^(2+)浓度均高于空白对照组和MK-801对照组(P<0.05),MK-801干预组AS内AQP4蛋白相对表达水平和Ca^(2+)浓度均低于2-氯乙醇组(P<0.05);2-氯乙醇组AS内AQP4和PKA蛋白相对表达水平均高于空白对照组和H89对照组(P<0.05),H89干预组AS内AQP4和PKA蛋白相对表达水平均低于2-氯乙醇组(P<0.05)。结论 2-氯乙醇可通过激活NMDAR/cAMP/PKA信号通路诱导AS中AQP4的表达增强。

芍药苷对血虚肝郁证模型大鼠海马谷氨酸及其不同类型受体mRNA表达的影响

目的:研究血虚肝郁证大鼠海马谷氨酸(Glu)及不同类型受体NR1、NR2A、NR2B、GluR1、mGluR5 mRNA的表达及芍药苷的干预作用。方法:正常组、模型组、20mg/kg芍药苷组、40mg/kg芍药苷组,造模第1天开始给药,正常组给等量超纯水,其余各组灌胃予以相应浓度药物,共造模21d。治疗结束后,取脑组织,剥离海马,采用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生HPLC荧光检测法测定Glu含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应法(RTqPCR)检测NR1、NR2A、NR2B、GluR1、mGluR5等5种受体亚单位mRNA的表达。结果:血虚肝郁证候模型大鼠海马组织中Glu含量显著升高(P<0.05),且不同Glu受体亚基表达不同,其中NR2A和GluR1 mRNA的表达显著升高(P<0.01),NR1、NR2B mRNA表达有升高的趋势,而mGluR5表达无明显变化,给予芍药苷可使海马组织中Glu含量显著降低(P<0.05),可下调NR2A、GluR1、mGluR5 mRNA表达(P<0.01,P<0.05)。结论:血虚肝郁证模型大鼠脑内存在Glu能神经调节异常,白芍的养血柔肝作用,能够通过调节NO/cGMP信号通路上个的多个靶点发挥效果。

一类新型手性表面活性剂的研究

制备了一对旋光异构的两亲分子L-C10HL(N-(4-癸氧基-2-羟基苯亚甲基)-L-亮氨酸)和D-C10HL(N-(4-癸氧基-2-羟基苯亚甲基)-D-亮氨酸).对相应的表面活性和聚集体研究发现,C10HL与传统羧酸盐表面活性剂有很大的不同,在较高pH时仍具有较高的表面活性和聚集能力.利用荧光激发光谱和圆二色性谱研究了L-C10HL和D-C10HL与环糊精之间的相互作用.

具有好的溶解性和高的热稳定性的富勒烯-苝化合物的合成

在氩气保护下 ,利用 N- (正丁基 ) - N′- (4 -甲酰基苯氧戊基 ) - 1,6 ,7,12 -四 - (4 -叔丁基苯氧基 ) - 3,4 ,9,10 -⊥酰亚胺和 N-甲基甘氨酸产生的亚胺叶立德与富勒烯反应 ,合成了含富勒烯的⊥化合物 ,用 NMR、FT- IR、UV- Vis及 TGA等方法对其结构和性能进行了表征和测试。

酸枣仁汤对焦虑大鼠海马离子型谷氨酸受体的表达及突触可塑性的作用研究

探讨酸枣仁汤对条件性恐惧致焦虑大鼠海马离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)和α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑丙酸受体(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid receptor,AMPAR)的表达及突触可塑性的影响。通过旷场实验、高架十字迷宫实验和明暗箱实验考察酸枣仁汤对焦虑大鼠行为学的影响;利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠海马中谷氨酸(glutamate,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)含量;采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马区离子型谷氨酸受体的基因及蛋白表达;采用透射电镜技术观察大鼠海马区神经突触超微结构的变化,并通过在体长时程增强(long-term potentiation,LTP)检测技术记录各组大鼠海马区的群峰电位(polulation spike,PS)幅值变化率。行为学结果显示,与模型组相比,酸枣仁汤能有效增加焦虑大鼠的开臂次数、开臂运动时间、开臂占总运动时间百分比、开臂占入臂总次数百分比(P<0.01),显著升高明箱时间和穿梭次数(P<0.01),跨格次数、进入中央格次数、进入中央格时间有增加趋势,表现出明显的抗焦虑作用;ELISA结果显示,与模型组相比,酸枣仁汤组大鼠海马组织中的Glu含量和Glu/GABA比值显著降低(P<0.01),GABA含量显著升高(P<0.01);此外,与模型组相比,酸枣仁汤能明显降低NMDAR(GluN2B、GluN2A)、AMPAR(GluA1、GluA2)的基因和蛋白表达。透射电镜结果表明,酸枣仁汤组海马区的突触、神经元细胞及细胞器较模型组均有改善。LTP检测结果显示,与模型组比较,酸枣仁汤组大鼠海马区的PS幅值变化率在5~35 min显著增加(P<0.05,P<0.01)。综上,酸枣仁汤具有显著的抗焦虑作用,其作用机制可能与减少NMDAR、AMPAR表达水平以及改善神经突触可塑性有关。