血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎小鼠海马神经元的保护作用及机制

目的探讨血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)脑炎小鼠的治疗作用及对辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)变化的影响。方法实验分组:对照组、模型组、低剂量血必净组、高剂量血必净组,每组10只小鼠,除对照组外,其余3组小鼠采用抗原注射与免疫刺激建立抗NMDAR脑炎模型,低、高剂量血必净组的小鼠分别通过腹腔注射5 ml/kg、10 ml/kg血必净注射液,12 h注射1次,连续3 d;2周后,HE染色观察小鼠脑组织病理学改变,尼氏染色观察小鼠神经细胞形态变化,TUNEL染色检测小鼠神经细胞凋亡情况,ELISA检测小鼠血清和脑脊液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)含量,免疫组织化学染色与Western blotting检测脑组织IFN-γ、IL-4表达情况,流式细胞术检测外周血Th1、Th2细胞比例分布,并计算Th1/Th2比值。结果与模型组比较,低剂量血必净组和高剂量血必净组的小鼠海马组织损伤得到改善,神经细胞形态变化较小,尼氏小体形态较为完整且数目增加,神经细胞的TUNEL阳性率降低,血清和脑脊液中TNF-α、IL-1β、IFN-γ含量均减少而IL-4含量增加,脑组织内IFN-γ阳性细胞百分比与蛋白相对表达量降低,IL-4阳性细胞百分比与蛋白相对表达量升高,外周血分化簇(CD)4^(+)IFN-γ^(+)标记的Th1细胞比例、Th1/Th2比值降低,且高剂量血必净组小鼠外周血CD4^(+)IL-4^(+)标记的Th2细胞比例升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠的上述各项检测指标改善效果更为明显,且差异也均具有统计学意义(P<0.05)。结论血必净能够改善抗NMDAR脑炎小鼠海马神经元损伤,该作用可能与减少IFN-γ表达、促进IL-4表达进而维持Th1/Th2细胞平衡有关。

慢性脑缺血模型大鼠神经突触可塑性与N-甲基-D-天门冬氨酸型受体

背景:N-甲基-D-天门冬氨酸型受体是与神经突触可塑性密切相关的离子型谷氨酸受体,且由N-甲基-D-天门冬氨酸型受体启动突触的可塑性调节。目的:探索N-甲基-D-天门冬氨酸型受体亚单位N-甲基-D-天门冬氨酸型受体亚单位2A(NR2A)和N-甲基-D-天门冬氨酸型受体亚单位2B(NR2B)在脑缺血后对神经突出的可塑性调节机制。方法:60只Wistar大鼠随机等分为假手术组和脑缺血组,脑缺血组大鼠依据改良型2VO模型方法构建大鼠慢性脑缺血模型,假手术组大鼠不结扎颈总动脉和迷走神经。结果与结论:慢性缺血后0-12 h大鼠大脑海马中NR2A表达水平逐渐降低,而NR2B慢性缺血后4 h达到峰值,且在脑缺血的情况下,无论低频或高频刺激均不能诱导长时程增强的形成。提示NR2B对条件刺激诱导的长时程增强形成有抑制作用;而NR2A对条件刺激长时程增强形成具有促进作用。

N-甲基-D-天门冬氨酸和非N-甲基-D-天门冬氨酸类受体在新生大鼠延髓脑片呼吸节律性放电中的作用

目的 探讨Ｎ－基－Ｄ－天门冬氨酸（Ｎ-methyl-Ｄ-aspartate,ＮＭＤＡ）和非ＮＭＤＡ类受体在基本呼吸节律发生和调 节中的作用。方法 在新生ＳＤ大鼠离休延髓脑片上记录舌下神经的呼吸节律性放电活动，在改良的Krebs液中加入兴 奋性氨基酸类递质及相应的拮抗剂，观察其ＲＲＤＡ的影响。结果 使用非ＮＭＤＡ受体激动剂海人酸（Kainic acid.ＫＡ） 后，可见呼吸周期及呼气时间有所延长， ＮＭＤＡ受体激动剂对呼吸活动则没有明显影响（Ｐ＞０．１）；相应的拮抗剂６－氰基 －７－硝基喹恶啉土卫四（６，７-dinitroquinoxaline-2,3-dione,ＤＮＱＸ）和２－氨基磷酸戊酸（D-２-amino-5-phosphonopentanoic, ＡＰ5）均可使放电频率和积分幅值明显降低吸气时间显著缩短（Ｐ＜０.０１），ＤＮＱＸ同时可致呼吸周期和呼气时间明显缩短 （Ｐ＜０．０５）。结论 在哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节中，ＮＭＤＡ类受体主要对呼吸活动的强度产生调节作用；而非 ＮＭＤＡ类受体不仅可以影响呼吸的强度，同时对呼吸的频率也发挥调节作用。

神经节苷脂对脑缺氧缺血后新生大鼠海马CA_1区N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的影响

目的 研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马区N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)及NMDARmRNA表达的变化和神经节苷脂(GM1)对其的影响。方法 建立HIBD模型。用免疫组化及原位杂交方法检测缺氧缺血(HI)和GM1干预后不同时间点NMDA受体I型亚单位(NR1)阳性细胞及NR1mRNA阳性细胞的表达。结果 HI后新生大鼠海马CA1区NR1及NR1mRNA表达增强,GM1可使其受体表达下调(P<0.05)。结论 GM1可使新生大鼠海马CA1区NR1及NR1mRNA表达下调,对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。

电针对慢性压迫性损伤大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2B表达的影响

目的:观察电针对慢性压迫性损伤(CCI)大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2B表达的影响,分析电针(EA)累积性镇痛效应可能的作用机制。方法:将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组、CCI模型组、EA3次组、EA5次组、EA10次组,每组10只。对照组大鼠行假手术,其余4组结扎坐骨神经造成CCI疼痛模型。手术后一周开始测定大鼠双侧缩腿的潜伏期(PWL)。EA3次组于CCI术后第14天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续3d,EA5次组于CCI术后第12天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续5d,EA10次组于CCI术后第7天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续10d,每天1次。电针结束后用RT-PCR和Western blot法检测脊髓NMDA受体NR2B表达的情况。结果:与对照组比较,CCI后各组动物出现明显的痛觉过敏(P<0.01)。EA5次后动物的痛觉过敏有明显减轻。EA10次后动物的痛觉过敏进一步减轻。CCI后第18天大鼠脊髓NMDA受体NR2B亚基mRNA和蛋白表达水平明显增加,与CCI组,EA5次组和EA10次组比较NMDA受体NR2B亚基mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论:NR2B表达上调可能是神经损伤后出现慢性疼痛的发病机制之一,电针有可能通过抑制其表达从而发挥一定程度镇痛作用。

亚低温对心肺复苏大鼠大脑海马神经元内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1表达的影响

目的探讨亚低温对心肺复苏模型大鼠大脑海马神经元内N甲基D天门冬氨酸受体1(NMDAR1)表达的影响。方法24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、常温组和亚低温组,每组8只。常温组和亚低温组大鼠用水封瓶密闭法制备心肺复苏后脑水肿动物模型,常温组制模后置于室温环境,亚低温组制模后立即给予亚低温治疗。应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测各组大鼠大脑海马神经元内NMDAR1表达。结果亚低温组大鼠脑组织水肿明显减轻,大脑海马神经元内NMDAR1mRNA和蛋白表达明显降低,与常温组比较差异有显著性(NMDAR1mRNA:80.48±0.03比80.64±0.18,P<0.05)。结论亚低温能够减轻心肺复苏后脑水肿,其机制可能为:亚低温通过减少NMDAR1在mRNA和蛋白水平的表达,降低阳离子通道通透性的作用,而减轻脑水肿的形成,起到治疗心肺复苏后脑水肿的作用。

组胺对N-甲基-D-天门冬氨酸诱发的神经元损伤的改善作用

目的 :在细胞水平探讨组胺对 N-甲基 - D-天门冬氨酸 ( NMDA)诱发的神经元损伤的改善作用及初步机制。方法 :采用原代新生大鼠皮层培养的方法 ,以形态学和二苯基四氮唑溴盐染色为指标观察神经元的损伤和药物的改善作用。结果 :组胺在 10 -4、10 -6、10 -7、10 -8mol/ L浓度时能显著改善 NMDA5 0 μmol/ L作用 3h引起的神经元死亡 ,并在 10 -4和 10 -7mol/ L浓度时分别呈现保护双峰。组胺 10 -7mol/ L的改善作用只被组胺 H2 受体西米替丁逆转 ,而组胺 10 -4mol/ L的改善作用只被 H1受体吡拉明逆转。结论 :组胺能减弱 NMDA诱发的神经元兴奋性死亡 ,其保护作用在低浓度时可能与 H2 受体有关 ,在高浓度时可能与 H1受体有关。

丰富环境及居住方式对快速老化小鼠认知功能和海马CA1区N-甲基-D-天门冬氨酸受体1的影响

目的:观察不同环境和居住方式对快速老化(SAMP8)小鼠认知功能和海马CA1区N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)的影响,探讨环境及社会支持系统提高认知功能延缓衰老的可能机制。方法:健康雄性6月龄SAMP8小鼠32只,随机分为丰富环境+群居组(A组)、丰富环境+独居组(B组)、普通环境+群居组(C组)和普通环境+独居组(D组)。环境和居住方式干预2个月后通过Morris水迷宫实验测定小鼠的认知功能,免疫组织化学方法测定海马CA1区NMDAR1免疫反应性的表达。结果:Morris水迷宫结果:随训练天数增加,各组潜伏期均有缩短;A组潜伏期明显短于其他各组(P<0.05),空间探索试验中跨越平台次数最多(P<0.05)。B组和C组两者相比无明显差异,但都优于D组(P<0.05)。抗NMDAR1免疫组化染色结果:D组免疫反应产物表达最少,染色最淡;A组可见NMDAR1蛋白免疫反应产物表达较多,细胞排列紧密,染色较深。光密度值分析显示A组光密度值最高,D组光密度值最低。结论:丰富环境和群居能改善SAMP8小鼠的学习记忆及认知功能;增加海马CA1区NMDAR1的蛋白含量;但环境和居住方式是SAMP8小鼠认知功能和海马的独立性保护因素,二者无交互作用。

N-甲基-D-天门冬氨酸受体介导缺氧SD大鼠PO/AH区神经元Ca^(2+)浓度的变化

目的研究N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体特性,探讨NMDA对缺氧大鼠PO/AH区神经元Ca2+浓度的影响。方法给大鼠应用NMDA受体激动剂NMDA和拮抗剂丙戊酸,观察其在正常和缺氧条件下对PO/AH区神经细胞内Ca2+浓度的影响。结果在正常条件下,细胞内Ca2+荧光比值为0.95,第40秒加入NMDA后[Ca2+]i的荧光强度迅速增高,25s后达到峰值2.054,并稳定在此水平,其升幅为(109±52)%,加入激动剂后30 s内达到峰值3.783,并持续稳定在此水平,加入NMDA后[Ca2+]i升高了(286±91)%;缺氧条件下神经元[Ca2+]i在加入丙戌酸后由平台向下的降幅为(103±45)%。结论[Ca2+]i的升高主要是由于NMDA受体通道开放,细胞外游离Ca2+易化扩散入胞内所致,丙戊酸可有效地降低NMDA受体活性,从而使细胞内游离Ca2+浓度明显下降,具有保护神经元免受缺氧损伤的作用。

N-甲基-D-天门冬氨酸对大鼠视网膜损伤的形态学观察

目的 :研究N 甲基 D 天门冬氨酸 (NMDA)兴奋毒性对大鼠视网膜及视神经所致的形态学变化。方法 :32只大鼠随机均分为 4组 ,正常对照组 (A组 ) ,实验组 2 4只右眼注射NMDA 2 μl,依注射剂量 10nmol,2 0nmol,4 0nmol随机等分为B组、C组、D组 ,7d后处死大鼠摘除眼球。每组取 6只大鼠眼球作石蜡包埋 ,测量距视乳头边缘 1～ 1.5mm间的视网膜内丛状层厚度 ,用以评价NMDA对视网膜的神经毒性。各组其余 2只大鼠取视神经作半薄切片 ,光镜下观察是否有轴索退行性变 ,电镜观察同一眼视网膜神经元的超微结构改变。结果 :不同剂量NMDA干预后 7d视网膜内丛状层的厚度均明显降低 ,各组间差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。视神经半薄切片光镜下可见轴索退行性变 ,其程度与NMDA浓度相关。在各浓度组切片均可见视网膜神经节细胞 (RGC)及双极细胞出现核固缩 ,染色质边聚等具有凋亡特征的改变。结论 :NMDA导致的视网膜内丛状层厚度变薄及视神经轴突变性程度与NMDA剂量相关。凋亡可能是NMDA介导的视网膜神经节细胞 (RGC)死亡的主要形式 ,NMDA损伤模型与青光眼性损伤有相似性。

抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎的研究进展

Vitaliani等人于2005年报道了4例卵巢畸胎瘤年轻女性,她们的共同临床症状包括记忆障碍、精神症状、意识障碍和通气不足。随后,Dalmau等人于2007年在上述4例和其他症状相似的8例患者血清和脑脊液中,分离出抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体（NMDAR）自身抗体,首次命名了抗NMDAR脑炎。认为该病是一种自身抗体特定作用于NMDAR的NR1/NR2亚基,通过免疫介导而产生神经精神系统症状的副肿瘤性脑炎[1]。

糖尿病大鼠视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的变化

目的:观察糖尿病不同时期视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体各亚基的表达。方法:采用雄性SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别于4、8、12周灌注,取眼球、冷冻切片;免疫组织化学、原位杂交方法检测NMDA受体NR1、NR2A、NR2B亚基表达的变化;用RS IMAGE软件进行图像分析。结果:NR1、NR2A、NR2B基因及其蛋白表达在糖尿病第4周时开始升高,至12周升高具有统计学意义,特别是NR1的变化更为显著。结论:NMDA受体各亚基的高表达参与了糖尿病视网膜病变。

电针对脊髓损伤大鼠N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基NR2b的影响

目的观察督脉、夹脊电针对脊髓损伤(SCI)后大鼠N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR2b表达的影响。方法 SD大鼠32只随机分为假手术组、模型对照组、督脉电针组、夹脊电针组,用改良的Allen氏造模法建立大鼠SCI模型,两电针组取相应穴位于SCI后第8日开始每隔1 d进行1次电针治疗,共治疗6周。造模后1 d、1周、3周、7周对各大鼠后肢活动情况行BBB评分,术后7周取损伤区脊髓组织,Real-time PCR检测NR2b mRNA表达,Western-Blot检测NR2b蛋白的表达。结果大鼠下肢运动功能经BBB评分显示,两电针组评分与模组相比有明显升高(P<0.05);SCI后7周模型组NR2b表达较假手术组增高(P<0.05),治疗后两电针组NR2b表达较模型组下降(P<0.05),组间比较水平相近(P>0.05)。结论 SCI后电针可能通过降低脊髓组织NR2b表达量,减轻损伤的发生,改善下肢运动功能。督脉取穴与夹脊取穴治疗效果相近。

抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎39例临床特点分析

目的:了解抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)脑炎患者的发病症状、检验检查、治疗及预后等临床特点,为更好的早期诊断抗NMDAR脑炎提供依据及思路。方法:回顾性分析39例诊断为抗NMDAR脑炎的患者病历资料,分析总结其临床特点、治疗及预后。结果:39例患者中,男23例(59.0%),女16例(41.0%),年龄为4~59岁,平均(28.3±13.7)岁。20例(51.3%)伴有不同程度的前驱症状,首发症状多为精神行为异常(46.2%)及癫痫发作(43.6%),有意识障碍14例(35.9%),记忆力减退4例(10.3%),锥体外系症状3例(7.7%)。39例患者脑脊液中抗NMDAR抗体均阳性(100.0%),血清检测9例(23.1%)阳性。头颅MRI表现14例异常(35.9%)。脑脊液病毒抗体6例(15.4%)阳性。脑电图慢波增多5例(12.8%),可见棘波、尖波3例(7.7%)。均给予丙种球蛋白、激素或免疫抑制剂治疗。随访3个月至2年,1例(2.6%)死亡,4例(10.3%)症状无改善,12例(30.8%)症状完全缓解,22例(56.4%)症状稍改善继续药物治疗中。结论:全面认识并掌握抗NMDAR脑炎的临床特点,早期诊治,合理用药,有利于改善患者预后并降低病死率。

急性缺氧对大鼠海马神经元N-甲基-D-天门冬氨酸诱发电流的影响

目的:研究N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-asparate,NMDA)在大鼠海马神经元上诱发电流的特性以及急性缺氧对大鼠海马神经元NMDA诱发电流(INMDA)的影响。方法:运用常规全细胞膜片钳技术,在原代培养第七八天的大鼠海马神经元上记录INMDA,并建立神经细胞体外急性缺氧模型,由Clampex8.0软件采样系统获得的图形,直接进入Clampfit8.0软件处理数据。结果:①在钳制电压为-60mV时,100μmol/LNMDA可在海马神经元上诱发出一大的内向电流,INMDA的峰值为(-745.461±123.731)pA。I-V曲线显示在钳制电压为正值时INMDA呈外向电流,而钳制电压为负值时则为内向电流。给予NMDA后,海马神经元上即刻诱发出内向电流,随后尽管持续给药20s,但INMDA开始发生衰减。②在钳制电压为-60mV时,海马神经元急性缺氧2min后,细胞外给予100μmol/LNM-DA可诱发一大而增强的INMDA,峰值为(-1670.49±202.09)pA,峰值显著增大(t=12.572,P<0.01),峰值增加率为130%。结论:NMDA诱发的电流呈现明显的内向整流性和失敏特性,急性缺氧能提高海马神经元NMDA通道的兴奋性,NMDA受体参与了兴奋毒性的产生。

N-甲基-D-天门冬氨酸对大鼠热痛阈的影响

目的 :观察鞘内应用N 甲基 D 天门冬氨酸 (NMDA)对大鼠热痛阈的影响。方法 :70只雌性SD大鼠随机分成 7组 ,A组为对照组 ,鞘内注射生理盐水 ,B组、C组、D组和E组分别为鞘内注射不同剂量的NMDA ,F组鞘内注射NMDA受体拮抗剂 5 甲基 二氢 丙环庚烯 亚胺马来酸(MK80 1) ,G组鞘内注射MK80 1,然后再注射NMDA。各组注射的容积均为 10 μl,每组动物在注药前后用热板测定热痛阈 ,并且计算出疼痛指数 (AI)。结果 :鞘内注射NMDA可以引起大鼠的痛阈降低 ,呈剂量依赖性地减小疼痛指数 ,MK80 1可显著地抑制这种变化。结论

儿童抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎免疫治疗进展

抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)脑炎是近年被报道的一种自身免疫性脑炎。目前国内外尚无针对该病的儿童及青少年患者的统一治疗方案,免疫治疗仍是主要的治疗措施,应用较为广泛的包括一线免疫治疗、二线免疫治疗及长程免疫治疗。近年来也有学者尝试应用新型免疫抑制剂或改进现有免疫治疗方案来提高对儿童及青少年患者的治疗效果,该文将尝试总结相关免疫治疗方案,并对免疫治疗研究方向做一展望。

抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎与肿瘤关系的研究进展

抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDA)受体脑炎是一种近年来备受关注的自身免疫性脑炎,也是一种最常见的与卵巢畸胎瘤相关的自身免疫性疾病。抗NMDA受体脑炎最早被描述为与年轻女性畸胎瘤相关的副肿瘤神经疾病;之后经大样本的研究发现男女均可患此病,并且在年轻的成人和儿童患病率最高。目前大多数研究提示抗NMDA受体脑炎的发生与肿瘤,尤其是与畸胎瘤密切相关。本文对抗NMDA受体脑炎与肿瘤关系的研究进展进行综述。

N-甲基-D-天门冬氨酸诱导Wistar乳鼠癫痫发作West综合征动物模型的初步探讨

目的：探讨NMDA诱发Wistar乳鼠惊厥发作的表现及皮质脑电图特点和建立West综合征动物模型的可能性。方法：选用12日龄Wistar乳鼠系统地进行腹腔注射NMDA诱导癫痫发作．对其痫性发作的类型、潜伏期、发病率及行为改变和皮质脑电图变化作以相应记录。结果：12-13日龄的Wistar乳鼠引出甩尾等自动症及前弓反张发作．14-25日龄的Wistar乳鼠只有自动症而没有前弓反张发作。对照组皮质脑电图无明显癫痫性波形发放。仅可见偶发棘波．NMDA处理组则在自动症及惊厥发作期间出现某些特征性改变。对照组及NMDA处理组在组织形态学方面未见明显异常改变。结论：NMDA可以诱导Wistar乳鼠产生一种独特的、年龄依赖性癫痫发作，虽未满足West综合征动物模型的全部标准。但发作表现和脑电图改变与儿童时期West综合征有相似之处。

N-甲基-D-天门冬氨酸诱导Wistar乳鼠癫痫发作及脑电图改变

目的观察N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)诱导Wistar乳鼠的癲痫发作表现及皮质脑电图特点,以其对婴幼儿时期的癫痫进行更加深入的研究。方法12日龄Wistar乳鼠腹腔注射NMDA可诱导癫痫发作,其痫性发作的特点和皮质脑电图变化均做相应记录。结果12日龄的Wistar乳鼠引出甩尾等自动症及前弓反张发作,且上述行为发作期间出现某些特征性皮质脑电图改变。结论12日龄Wistar乳鼠腹腔注射NMDA产生一种独特的、年龄依赖性癫痫发作与婴幼儿时期West综合征在发作表现和脑电图改变有相似之处。