孔石莼质体蓝素的柱色谱纯化及其N-端氨基酸序列的分析测定

通过DEAE—Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Sephadex G-75凝胶过滤柱分离纯化得到了孔石莼（Ulva pertusa）的质体蓝素。其步骤为：将孔石莼样品以0．02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7．2）进行匀浆，然后离心去除沉淀，将上清液用硫酸铵分级盐析获得饱和度为40％～80％的盐析蛋白；通过DEAE-Sepharose柱色谱，在含有0～1．0mol/L NaCl的0．0lmoVL磷酸盐缓冲液线性梯度洗脱下，盐析蛋白有3个主要的洗脱峰，然后在Sephadex G-75凝胶过滤色谱柱中进一步纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）显示，该蛋白质被纯化为单一条带。根据蛋白质电泳迁移率，纯化蛋白质的相对分子质量约为10000。该蛋白质不含糖。纯化的蛋白质经电转移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜后，以Edman降解法进行N-端氨基酸序列测定，前20个氨基酸残基序列为AAIVKLGPDDGSLAFVPSKI。通过对相关蛋白质数据库的检索，发现该序列与3种已报道的海藻的质体蓝素具有较高的序列同源性，其同源性分别为85％，85％和90％。据此，认为孔石莼的质体蓝素已获得纯化，其N-端20个氨基酸残基与已报道的海藻质体蓝素的氨基酸残基有较大的同源性，也存在着一定的变异。

沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定

以人工自花授粉 3 d后的沙田柚 (Citrusgrandisvar.Shatinyu Hort.)花柱为材料 ,切取 1 /2部位处花柱组织 ,匀浆后 ,进行抽提和硫酸铵盐析 ,得到 3 5%级分的蛋白质粗提液 ,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,显示出 9条蛋白质带 ;经 Con A-Sepharose 4 B亲和柱层析 ,特异峰 (S#)仅显示 1条蛋白质带 ,恰好是 3 5%级分中近正极端的 2种蛋白质中的一种最优势蛋白质 ;部分生化性质测定结果表明 ,该蛋白质为碱性糖蛋白 ,糖含量为 9.2 % ,由 2个亚基组成 ,相对分子质量分别为 3 8.0 ku,3 2 .0 ku,等电点分别约为 7.5,7.2 ;生物活性测定结果表明 ,该蛋白质能抑制离体 (in vitro)萌发自花花粉花粉管的生长 ;氨基酸序列分析表明 ,3 2 .0 ku组分 N-端 1 5个氨基酸序列与矮牵牛 ,花烟草等的

光敏核不育水稻61 kD特异性蛋白质的纯化和N-端序列分析

用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳和制备型等电聚焦纯化了曾报道的光敏核不育水稻 (Oryza sativa)农垦 58S叶绿体的特异性蛋白质 P2 ,得到 SDS- PAGE和等电聚焦 (IEF )纯的 P2。经 SDS- PAGE和 IEF测定 ,该纯蛋白质的分子量是 61 k D,等电点是 5.8。现称 P2为 P61。氨基酸序列分析表明 P61的 N-端氨基酸序列与水稻和大麦叶绿体 ATPaseβ亚基的 N-端氨基酸序列同源。

玉米精细胞质膜68 kD特异糖蛋白组分的纯化和N-端序列测定

经ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ和ＩＥＦ＿ＳＤＳ双向电泳，从玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）精细胞质膜分离纯化得到等电点（ｐＩ）为５．５的６８ｋＤ糖蛋白的单一组分。伴刀豆球蛋白＿辣根过氧化物酶（ＣｏｎＡ＿ＨＲＰ）染色结果表明，该组分的糖链中含有甘露糖及葡萄糖残基。氨基酸序列分析表明，该组分的Ｎ＿端１５个氨基酸序列与ＣｏｎＡ的Ｎ＿端相应序列相同。根据分子量及ｐＩ值的差异，认为该组分并非ＣｏｎＡ，而可能与玉米精细胞质膜上的ＣｏｎＡ受体有关。它在玉米的精卵识别、粘附及融合中有何作用，无疑是令人感兴趣的问题。

水稻种子贮藏谷蛋白的微细异质性(英文)

利用灵敏的等点聚焦与SDS_PAGE结合的双向电泳分析方法 ,从水稻 (OryzasativaL .)种子贮藏谷蛋白中至少可以分离为 1 3条酸性和 1 9条碱性多肽。依据谷蛋白多肽的表现量推测 ,水稻谷蛋白主要由约 6个主效基因控制。肽图谱与N_端氨基酸序列分析可清晰将谷蛋白酸性多肽分为两组。此两组恰好与谷蛋白GluA和GluB两个cDNA克隆组相吻合。

PHA-L4的纯化及结构分析

通过阴离子交换层析对植物血球凝集素(PHA)提取物进行组分分离、纯化和活性检测,制得了高丝裂原活性的PHA-L4糖蛋白,并利用SDS-PAGE、质谱、N-端氨基酸序列、肽质量指纹谱等分析方法对其结构进行了鉴定.结果表明,PHA-L4是由4个PHA-L蛋白亚基组成的四聚体糖蛋白,相对分子质量为120000,每个亚基N-端第12位天冬酰胺残基被糖基化,糖基化呈现微不均一性.

带His标签的GL-7-ACA酰化酶一步纯化及固定化

GL-7-ACA酰化酶（GLA）能将GL-7-ACA转化为7-ACA，后者是半合成头孢菌素类抗生素的起始材料。本研究构建了四种带his标签的GLA，它们之间的N-端氨基酸序列不同。其中重组菌株BL21（DE3）／pET28GA01的GLA活性最大，在19h后达到3800u／L。将GLA分别固定化于TALON亲和载体、EPI—IDA—Co^2＋琼脂糖凝胶和FP—IDA-Ni^2＋树脂后，采用一步纯化和固定化方法进行活性测定，

双孢蘑菇中的锰过氧化物酶：麸皮促进该酶的产生和该酶的基因特性研究

对双孢蘑菇ATCC 62459在含木质纤维素的培养基上产生的主要锰过氧化物酶（MnP）进行了分离、克隆和测序。在液体培养基上，只能测定到痕量的MnP。添加黑麦和小麦麸皮的培养基可以促进MnP的产生。从含麸皮的培养基上分离的这种酶的pI（3．25）和N-端氨基酸序列（25aa）与从堆料中分离的MnP1是相同的。