系统性红斑狼疮女性患者IgG N-糖基与红细胞分布宽度的关联性研究

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)女性患者的免疫球蛋白G N-糖基(IgG N糖基)与红细胞分布宽度(red blood cell distribution width,RDW)之间的关系,为后续SLE联合标志物提供理论基础。方法选取2018年10月—2020年5月在山东省聊城市人民医院风湿免疫科门诊确诊及住院的341例SLE女性患者为研究对象,采集血液样本进行血常规检测并提取纯化血浆IgG,采用超高液相色谱法检测血浆IgG N-糖基水平。IgG N-糖基与红细胞分布宽度的关联性分析采用Spearman秩相关与logistic回归分析。结果RDW高水平组中的半乳糖基化及唾液酸化水平显著低于RDW低水平组。logistic回归分析结果显示,GP12、GP14、GP18与GP23为RDW升高的保护因素,高水平的GP4与GP8为RDW升高的危险因素。结论SLE女性患者IgG N-糖基与RDW存在关联性,异常的IgG N-糖基化可能是影响RDW水平升高的因素,为后续二者联合指标对疾病进行早期诊断或反映疾病情况的研究提供了理论基础。

双(N-糖基-硫代氨基脲-2-基)硫代磷酸芳基酯的合成(Ⅱ)

芳氧基硫代磷酰二氯(1a,1b)肼解后得到芳氧基硫代磷酰二肼(2a,2b),将它们分别与糖基异硫氰酸酯(3a～3c)在苯中回流,生成相应的双(N-糖基-硫代氨基脲-2-基)硫代磷酸芳基酯(4a～4c,5a～5c),它们的结构经IR,1HNMR,31PNMP,MS和元素分析加以确证.

不同年龄段人群蛋白质N-糖基的结构谱型研究

目的分析比较不同年龄人群的血浆N-糖基的结构谱型。方法采用整群抽样,以2009年4至7月在首都医科大学宣武医院进行健康体检的212名居民为研究对象,基于高效液相色谱法进行血浆糖基组检测。将年龄以中位数35为切点分组,不同年龄组的糖基含量比较采用两独立样本t检验或非参数检验。结果 212名研究对象的平均年龄为(37.78±17.89)岁,性别比为0.88。无论男性女性,半乳糖基化水平,≥35岁组二半乳糖聚糖含量较高、双触角非半乳糖聚糖含量较低;在两分支糖基的唾液酸化水平,<35岁组二唾液酸化双触角聚糖含量较高;在唾液酸化水平,≥35岁组单唾液酸含量高、三唾液酸较低;岩藻糖基化位置,≥35岁组核心岩藻糖化聚糖含量高;在分支水平,≥35岁组双触角聚糖含量较高,三触角聚糖和四触角聚糖含量较低(P≤0.03)。结论血浆N-糖基结构可能与年龄有关。

2型糖尿病患者免疫球蛋白G N-糖基与红细胞分布宽度的相关性研究

目的探索2型糖尿病患者免疫球蛋白G N-糖基与红细胞分布宽度的关系,为疾病变化的联合标志物的研究提供基础。方法选取2014年11月至2017年9月北京市小汤山医院进行体检的社区人群,纳入2型糖尿病患者429例。采用超高压液相色谱法检测免疫球蛋白G N-糖基组。免疫球蛋白G N-糖基与红细胞分布宽度的相关分析应用Spearman秩相关及多元线性逐步回归模型。结果多元线性逐步回归分析显示,2型糖尿病患者GP14(t=-2.640,P=0.009);GP13(t=3.065,P=0.003);GP11(t=-3.454,P=0.001)及GP2(t=2.264,P=0.025)与红细胞分布宽度具有独立相关关系。结论2型糖尿病患者中免疫球蛋白G N-糖基与红细胞分布宽度可能存在关联,为疾病变化的联合标志物的研究提供基础。

Endo-H在毕赤酵母中的表达、纯化及其在N-糖基化分析中的应用

目的通过巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达制备内切β-N-乙酰氨基葡糖苷酶-H(endo-beta-N-acetylglucosaminidase H,Endo-H),并用于蛋白质的N-糖基化分析。方法根据GenBank中公布的褶皱链霉菌(Streptomyces plicatus)Endo-H的cDNA序列,设计并合成Endo-H全基因,将其克隆至P.pastoris表达载体pPIC9中,重组质粒转化P.pastoris JC308宿主菌,工程菌经甲醇诱导,分泌表达Endo-H,目的蛋白经疏水层析、凝胶过滤两步纯化后,纯度可>95%。成品用于基于DNA测序的荧光辅助糖电泳(DNA sequencer assisted fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis,DSA-FACE)分析核糖核酸酶B(ribonuclease B,RNaseB)的糖基结构,比较了Endo-H与商品化N-糖酰胺酶F(peptide-N-asparigine amidase F,PNGase F)的糖基切割功能。结果利用P.pastoris表达制备EndoH,可切割天然或变性状态下的β-1,4-糖苷键连接的甘露糖型结构糖链,不能切割复杂型糖链糖蛋白;经DSAFACE分析,结果显示Endo-H酶切RNaseB后其糖链为Man5GlcNAc-Man9GlcNAc,PNGaseF酶切RNaseB的糖链为Man5GlcNAc2-Man9GlcNAc2,两者相差一个GlcNAc。结论通过P.pastoris制备的Endo-H具有天然生物活性,可用于蛋白质的N-糖基化结构分析。

α-和β-型N-呋喃核糖基酰胺

为揭示N-糖基酰胺类糖蛋白在生命活动过程中的作用,迫切需要对N-糖基酰胺中α-和β-型2种异构体进行有效分离和纯化.本文通过2种途径合成了α-和β-型N-呋喃核糖基丙酰胺,报道了核糖胺5的N-酰化途径中β-型N-呋喃核糖基丙酰胺为主要产物,而叠氮糖8的原位还原和随即进行的N-酰化途径中,α-型N-呋喃核糖基丙酰胺为主要产物;揭示了碱性展开剂对分离α-和β-型N-呋喃核糖基丙酰胺具有重要作用,而且随着碱的比例增加,α-和β-型2种异构体的ΔRf也随之增大.其中,含有机碱Et3N的展开剂体系Cyclohexane/Et3N使二者的ΔRf值达到0.24,从而实现了2种异构体9a/9b的有效分离.

N-(糖基硫代亚脲基)-芳基硫代磷酰胺芳基酯的合成

The Reaction of arylatrloxythiophosphoric hydrazide 2a～2d with glycosyl isothiocyanates 3a～3d gave the corresponding aryl N-（glycosylthioureylene）-arylthiophosphoramidates 4a～4d,5a～5d,6a～6d,7a～7d.The resulted compounds contained glycosylthioureylene and thiophosphoric amide fragments.The glycosyl isothiocyanates 3a～3d were prepared by the reaction of α-D-glycosyl bromides with Pb（SCN）2.The biologic activities of the representative compounds were studied.

山东某高校新生亚健康状态与血浆免疫球蛋白G N-糖基组的相关性

目的探索山东某高校新生亚健康状态(suboptimal health status,SHS)与血浆免疫球蛋白G(IgG)N-糖基组之间的相关性。方法采用病例对照研究设计,根据纳入、排除标准选取2017年9月至11月于山东潍坊学院进行健康体检的大学生100例为研究对象,根据SHS评判标准,将研究对象分为SHS组(50例)与健康对照组(50例)。采用超高效液相色谱技术进行血浆IgG N-糖基组检测,获得24个糖基峰。IgG N-糖基组与SHS的关联分析采用Mann-Whitney U秩和检验及二分类Logistics回归分析;采用受试者工作特征曲线分析评估血浆IgG N-糖基作为SHS生物标志物的可能性。结果由24个糖基峰构成的IgG N-糖基组中的GP17与SHS差异存在统计学意义(P<0.05),且SHS人群GP17水平较高。基础模型的诊断效能(AUC)为0.826(95%CI:0.747~0.905,P<0.001);糖基模型的AUC为0.631(95%CI:0.519~0.744,P=0.002),基础模型纳入糖基变量后构建了联合模型,其AUC为0.848(95%CI:0.763~0.912,P<0.001),其诊断效能与基础模型相比呈现出提高的趋势。结论山东某高校新生SHS与IgG N-糖基组中的GP17水平存在关联,SHS人群GP17水平较高。