原发性肝细胞癌患者血清N-糖组的表达分析

目的:通过对厚发性肝细胞癌(HCC)与正常人血清N-糖组图谱比较分析,寻找异常峰,为寻求新的HCC肿瘤标志物奠定基础。方法:收集乙型肝炎病毒(HBV)感染的HCC患者(n=100)及健康献血员(n=130)血清,采用基于DNA测序仪的毛细管电泳技术,检测每份标本中荧光标记的N-糖组分。结果:每份血清均得到具有11个峰的图谱,峰值经校正后量化,HCC组较对照组峰1、2、9、11升高,蜂6、8、10降低(P<0.05);且部分峰值变化与肿瘤标志物甲胎蛋白、HBV DNA载量、临床肝功能指标存在相关性。结论:HCC组血清N-糖组图谱较正常对照存在明显的差异,这种变化有望为临床疾病诊断提供依据。

原发性支气管肺癌患者血清中N-糖组学改变

目的:探索肺癌患者、正常人群以及良性肺病患者血清N-糖组图谱差异性表达,为寻找新的肺癌相关肿瘤标志物奠定基础。方法:收集105例肺癌患者、71例健康对照者以及43例良性肺病患者血清,采用DSA-FACE技术检测血清样本的N-糖组图谱。结果:(1)3组间有8个峰值差异存在显著性:与对照组相比,肺癌组peak1、5、9升高,Peak3、6、11降低(P<0.05)。与良性肺病组相比,肺癌组Peak5、9升高;Peak3、4、11降低(P<0.05)。(2)肺癌组中,不同的TNM分期、年龄及性别与N-糖链均具有一定的相关性。结论:肺癌患者血清N-糖组图谱具有特征性表达,其作为肺癌诊断标志物具有一定的诊断性能和潜在价值,还需进行大样本的深入研究。

二乙基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型血清N-糖组表达分析

糖蛋白糖链具有广泛的生物学意义,异常糖基化状态与疾病的发生发展密切相关。肝纤维化易向肝硬化和肝癌发展,早期肝纤维化具有可逆转性,所以早期诊断尤为重要。本研究通过二乙基亚硝胺(DENA)诱导的大鼠肝纤维化模型,验证N-糖标志物在肝纤维化发生发展中的变化过程。用DENA腹腔注射的方法诱导大鼠肝脏纤维化,用DSA-FACE的方法检测血清及血清中纯化的免疫球蛋白的N-糖组图谱。研究发现,peak1,peak2,peakR5a和peakR5b随着肝纤维化程度的加深而升高,而peak5和peak8则降低。Peak2主要来源于免疫球蛋白,可能与肝纤维化过程中的炎症状态密切相关,而大鼠特异性的N-糖peakR5a和peakR5b则主要来源于肝脏,可以评估和检测大鼠肝脏的纤维化状态,从而验证了N-糖标志物作为肝病诊断标志物的可靠性和潜在价值,为进一步筛选肝病的早期诊断指标打下了基础。

血清N-糖组诊断模型在丙型肝炎患者肝纤维化评价中的应用

目的研究丙型肝炎不同分期肝纤维化患者血清中N-聚糖丰度变化,依此建立丙型肝炎肝纤维化诊断N-糖组模型并评估其临床应用价值。方法纳入169例丙型肝炎肝纤维化患者资料,采用基于DNA测序仪的荧光标记糖电泳技术,检测和分析患者血清中9种N-聚糖。基于肝纤维化各期N-聚糖相对含量变化,应用二元Logistics回归方法建立诊断模型,采用受试者操作特征曲线等评价其诊断效力,并与其他肝纤维化诊断模型比较。结果N-糖组诊断模型(模型B和模型C)在区分纤维化S1~S2与S3~S4和S1~S3与S4受试者操作特征曲线下面积最大(受试者操作特征曲线下面积=0.776,0.827),高于GlycoFibroTest(受试者操作特征曲线下面积=0.760,0.807)、GlycoCirrhoTest(受试者操作特征曲线下面积=0.722,0.787)、天冬氨酸转氨酶与血小板的比值指数(受试者操作特征曲线下面积=0.755,0.751)、肝纤维化4项指数(受试者操作特征曲线下面积=0.730,0.774)和S指数(受试者操作特征曲线下面积=0.707,0.744),但模型A(受试者操作特征曲线下面积=0.752)在区分纤维化S1与S2~S4时诊断效力仅低于天冬氨酸转氨酶与血小板的比值指数(受试者操作特征曲线下面积=0.807)。当N-糖组模型与天冬氨酸转氨酶与血小板的比值指数联合诊断各期肝纤维化时,受试者工作特征曲线下面积(模型A、模型B和模型C)为0.839、0.825和0.837,提高了诊断效力。结论血清N-糖组模型诊断丙型肝炎肝纤维化具有潜在临床应用价值。

血清N-糖组在原发性肺癌中的特征性表达及与中医证型的关联性

目的:分析原发性肺癌患者外周血N-糖组图谱的特征性表达,探索外周血N-糖组学对原发性肺癌患者中医证型的关联性。方法:分别收集原发性肺癌患者、良性肺部疾病患者、健康对照者外周血,基于DNA测序仪的荧光糖电泳(DSA-FACE)技术对血清N-糖组图谱进行分析。进一步探索原发性肺癌患者外周血N-糖组与肺癌分期、中医证型之间的相关性。结果:外周血N-糖组图谱检测结果显示,Peak2、Peak3、Peak4、Peak5、Peak6、Peak9、Peak10、Peak11、Peak12及总核心岩藻糖基化水平(SumFuc)在原发性肺癌患者、良性肺部疾病患者及健康对照者中存在差异性(P<0.05);从健康对照组到良性肺部疾病再到原发性肺癌组,Peak2、Peak5、Peak9呈逐步上升趋势;而Peak3、Peak4、Peak6、SumFuc呈逐步下降趋势。原发性肺癌组N-糖组Peak3、Peak4、Peak6、SumFuc与TNM分期呈负相关,Peak9、Peak12与TNM分期呈正相关。N-糖组在不同证型患者的差异具有统计学意义(P<0.05)。Peak1、Peak6、SumFuc从气虚痰湿证、阴虚热毒证到气阴两虚证中呈逐步下降趋势。Peak5、Peak11在3种证型中呈逐步上升趋势。结论:原发性肺癌患者外周血N-糖组存在特征性表达,N-糖组在原发性肺癌筛查和鉴别方面具有潜在的应用价值。外周血N-糖组与原发性肺癌患者TNM分期以及中医证型分布具有相关性。

结构特异N-糖蛋白质组学研究进展

N-连接糖基化修饰是蛋白质上常见的翻译后修饰,发生在特征氨基酸序列N-X-T/S/C(X≠P)中的天冬酰胺上。N-连接糖具有五糖核心结构,包括高甘露糖型、杂合型和复杂型等3种主要类型。N-糖基化在修饰位点上具有微观和宏观不均一性,其功能与修饰位点和N-连接糖结构对应。对蛋白质N-糖基化位点和结构特异性的精准鉴定和定量,是基于质谱的N-糖蛋白质组学发现N-糖蛋白相关疾病诊断和预后标志物、药物靶点,以及研发高效靶向大分子药物的主要任务。随着高效富集材料、液相色谱分离技术、串联质谱和检测技术以及生物信息学数据库搜索方法的逐步发展和成熟,目前N-糖蛋白质组学已能够对体系中的N-糖基化进行高通量位点和结构特异性鉴定和定量。本文主要介绍N-糖蛋白质组学的样本制备、高效液相色谱-质谱联用分析、生物信息学数据处理等基本步骤,以及由这些步骤组成的完整分析流程的代表性应用研究。

植物N-糖链检测技术研究进展

N-糖基化作为一种重要的蛋白质翻译后修饰,在胚胎发育、癌症发生发展及免疫防御等诸多复杂的生命活动中发挥着关键作用。近年来,基于质谱的N-糖链的检测及其定量研究在动物方面取得了显著进展,相比之下,植物N-糖基化及N-糖链检测的相关研究要远远滞后,这也是制约植物糖生物学研究发展的关键瓶颈问题之一。对蛋白质N-糖链的释放、定量策略、可视化检测及其在植物中的应用进展进行了归纳总结,以期为指导后续植物N-糖链及N-糖组的定性定量检测提供参考。

血清N糖组学标志物诊断乙型和丙型肝炎病毒相关肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌

人体肝脏是蛋白质合成与修饰的重要场所,肝脏损伤会影响蛋白质糖基化修饰,可能导致糖蛋白表面糖基化数量或结构异常,进而影响其功能。糖蛋白的异常糖基化与患者肝脏纤维化、肝硬化、肝癌密切相关。早期诊断和治疗可阻断肝病进展并改善预后。本文对血清N糖组生物标志物诊断乙型和丙型肝炎病毒相关肝纤维化、肝硬化和肝癌的研究进展进行了简要综述。