在线红外法在N-羟基琥珀酰亚胺酯合成中的应用

在线红外法是一种通过监测反应体系中各组分浓度变化,直观体现反应历程的监测方法。具有无需取样,灵敏度高,时效性强,应用范围广泛等优点。在N-羟基琥珀酰亚胺酯的合成中采用在线傅里叶红外法,通过实时直观的反应进程,成功克服了实验中的困难,并且有利于进一步的条件优化。所得一系列产物的结构均经过1HNMR确证。

N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯的合成与应用

利用两种方法合成了N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯,并用核磁共振谱进行了结构表征,N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯的应用前景非常广泛。

甲烷磺酸N-羟基琥珀酰亚胺酯的制备及其在寡肽合成中的应用

制备甲烷磺酸N-羟基琥珀酰亚胺酯,并将其应用于寡肽的液相合成.以N-羟基琥珀酰亚胺与甲烷磺酰氯反应制备甲烷磺酸N-羟基琥珀酰亚胺酯,并使其与Boc保护的酪氨酸、丙氨酸或Boc保护的酪氨酰脯氨酸发生SN2取代反应,生成相应的N-羟基琥珀酰亚胺活泼酯而活化羧基,并成功用于内吗啡肽-2和力肽的液相合成;N-羟基琥珀酰亚胺活泼酯的制备和应用反应条件温和、副产物少、收率较高.实验结果表明,甲烷磺酸N-羟基琥珀酰亚胺酯可用于寡肽的液相合成.

N-琥珀酰亚胺3-[^(125)I]碘苯甲酸酯(S^(125)IB)的放射化学合成

利用Iodogen法成功地对N-琥珀酰亚胺 3-(三正丁基锡)苯甲酸酯(ATE)进行了放射性碘-125标记,利用Sep-Pak硅胶柱实现了干扰蛋白标记的ATE及Iodogen与S125IB的分离,得到了放射性碘间标蛋白质有用的中间体S125IB,标记率93%以上。并研究了影响标记的因素,得出较佳标记条件为:ATE与 Na125I摩尔比6:1、氧化剂 Iodogen用量7mg、室温反应5min。

N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯的制备及其热稳定性研究

目的研究N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯(BNHS)的制备及其稳定性研究。方法以D-(+)-生物素为原料,与N-羟基琥珀酰亚胺在N,N'-二环己基碳二亚胺作用下反应生成N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯,用差示扫描量热法和热重分析研究分析N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯的热稳定性和热分解过程。结果合成工艺的收率为79.7%以生物素计。在氮气氛(氮气流量为20 mL·min^(-1))、10 K·min^(-1)的升温条件下,N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯在353℃发生剧烈分解,至500℃几乎分解完全。结论所用制备方法简单、产率良好,适合大量制备,且产物热稳定性好。

2-氯苄基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯的合成研究

以2-氯苄醇和三氯甲基碳酸双酯为起始原料,以二氯乙烷为溶剂,合成了氯甲酸2-氯苄酯,并和N-羟基琥珀酰亚胺反应制备得到肽类保护剂2-氯苄基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯。对反应条件进行了优化,两步反应的总收率接近50%,所得产品经1H NMR确证。

含活性基团马来酰亚胺的RAFT聚合

采用N-(4-羟基苯基)马来酰亚胺与苯乙烯为单体,以四氢呋喃为溶剂,偶氮二异丁腈为引发剂,加入RAFT试剂二硫代苯甲酸苄酯进行RAFT聚合,成功地得到N-(4-羟基苯基)马来酰亚胺和苯乙烯相对分子质量分布较窄的共聚物,单体转化率基本随聚合反应时间而呈线性增加,且该聚合物的耐热性能也有所提高.

原子转移自由基聚合制备聚甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯及其嵌段共聚物

以CuCl/N-苄基-2-吡啶基甲亚胺(NBPM)/2-溴异丁酸乙酯(EBrIB)作为引发催化体系,使甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯(MASI)进行ATRP聚合,得到的聚甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯(PMASI)具有较高的单体转化率(90%)、较窄PDI(~1.10)和较高的分子量。在整个聚合过程中,较强的C—Cl键仍使聚合物的端基保持活性,有利于与第二单体甲基丙烯酸(N,N-二甲氨基)乙酯(DMAEMA)嵌段共聚形成结构明确的嵌段共聚物P(MASI-b-DMAEMA)。当MASI的链长较短时,P(DMAEMA40-b-MASI16)具有水溶性并可自组装成直径均匀的核-壳型微胶束,间接证明了聚合过程的可控特征。

聚甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯的簇聚诱导发光研究

不含普通发光单元的非典型生色团发光化合物因其基础研究重要性和广泛的应用前景引起了人们的极大兴趣.其中许多化合物还具有独特的聚集诱导发光(Aggregation-induced emission,AIE)特性.然而其发光机理仍然存在争议.在此前的研究中,提出了簇聚诱导发光(clustering-triggered emission,CTE)机理,即非典型生色团的簇聚和电子共享来解释这些体系的发光和AIE现象.为进一步验证这一假说,设计合成了不含传统生色团的聚甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯(PNHSMA).其稀溶液基本不发光,但浓溶液,纳米聚集体,固体粉末均发射蓝光,呈现出AIE性质.通过与其单体甲基丙烯酸(N-羟基琥珀酰亚胺)酯(NHSMA)的发光行为对比及单体单晶结构解析,利用CTE机理很好地解释了其光物理行为.

AccQ-Tag法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸含量的方法。方法采用AccQ—Tag法，以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生试剂，与复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸柱前衍生，用Waters2695 HPLC仪器，AccQ—Tag^TM柱，以醋酸钠（pH4．95）缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，水为流动相C进行梯度洗脱，检测波长为248nm，柱温为37℃，进样量为5止。结果17种氨基酸的线性回归方程r值为0．9996～0．9999（n=5），平均回收率为93．3％～104．4％（RSD值为0．88％～3．05％，n=6）。结论本法快速，简便，结果准确。

AccQ-Tag法测定复方精氨酸胶囊中精氨酸的含量

目的:建立测定复方精氨酸胶囊中精氨酸含量的AccQ-Tag法。方法:以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC)为衍生剂,与复方精氨酸胶囊中精氨酸柱前定量衍生,用Waters HPLC仪,AccQ-Tag^(TM)氨基酸分析柱,以pH4.95醋酸钠缓冲液为流动相A,乙腈-水(3:2)为流动相B,进行梯度洗脱,检测波长为248nm。结果:线性范围:0.1006～0.9054μg,r=0.9995(n=5)。回收率:99.7％,RSD 0.38％(n=5)。结论:本法快速、简便,辅料无干扰,结果满意。

NHSI催化嘧菌酯中间体2-[2-(6-氯嘧啶-4-基氧基)苯基]-3,3-二甲氧基丙酸甲酯的合成研究

以2-香豆冉酮为原料、甲酸甲酯/NaH为甲酰化试剂、对甲苯磺酸甲酯为甲基化试剂,通过“一锅”反应得到3-甲氧甲烯基-2-香豆冉酮,进一步以N-羟基丁二酰亚胺(NHSI)为催化剂,3-甲氧甲烯基-2-香豆冉酮在甲醇中与4,6-二氯嘧啶反应得到嘧菌酯中间体2-[2-(6-氯嘧啶-4-基氧基)苯基]-3,3-二甲氧基丙酸甲酯。考察了碱、催化剂用量、反应温度等对产率的影响,优选的最佳反应条件为:反应温度为60℃、反应时间为6 h、n(甲氧甲烯基香豆冉酮)∶n(二氯嘧啶)∶n(碳酸钾)∶n(NHSI)=1∶1∶1.2∶0.2,此时产率为84.5%。相比传统方法,该方法无需低温、无需使用甲醇钠、反应时间较短。初步放大实验中,反应扩大10倍后仍具有较高的产率。

恩诺沙星人工抗原的合成与鉴定

采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法,将恩诺沙星(ENR)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)连接,制备人工免疫原ENR-BSA和包被原ENR-OVA,经紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,研究结果对抗恩诺沙星单克隆抗体的制备具有重要意义。

壳聚糖与型胶原复合制作组织工程软骨支架及其性能研究

目的 探讨采用壳聚糖与 型胶原复合制作新型组织工程软骨三维多孔支架的方法,并对其理化性能进行检测。 方法 将精制88%脱乙酰度壳聚糖溶于0 .2 mol/ L 醋酸溶液制成2 %溶液,高纯度猪 型胶原溶于0 .5 m ol/ L醋酸溶液制成1%溶液,两者按4∶1(重量比)充分搅拌混合,采用冷冻干燥法制成壳聚糖与 型胶原复合支架。采用碳化二亚胺/ N-羟基琥珀酰亚胺对支架进行交联,力学测定比较支架交联前后的强度变化,扫描电镜观察其超微结构,于2、4、6和8周经溶菌酶体外降解实验测定其体外降解性。 结果 制备的复合支架成形良好,交联后其力学强度明显增加。扫描电镜显示壳聚糖与 型胶原成分在支架内分布均匀,支架内孔洞相互连通似海绵状,孔径10 0～2 5 0 μm。各时间段复合支架体外降解较单纯壳聚糖支架快。 结论 壳聚糖与 型胶原复合成功地制作成了三维多孔复合支架。其理化性能及体外降解测定,可以作为支架载体,应用于组织工程软骨的构建。

恩诺沙星免疫抗原的制备与鉴定

通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成恩诺沙星免疫抗原,用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和酶联免疫法分析对恩诺沙星免疫抗原的结构、分子量、免疫原性等特征进行鉴定。经紫外光谱分析恩诺沙星-牛血清白蛋白偶联比为5:1,紫外光谱峰形发生变化并位移。间接酶联免疫法分析证明其免疫兔所获得的抗体与恩诺沙星有良好的特异性,半数抑制浓度为60ng/mL。实验结果表明成功合成了恩诺沙星免疫抗原,并获得了抗恩诺沙星抗体,为ELI SA或TRFI A等免疫方法的进一步研究提供了试验基础。

交联对胶原溶液的动态流变性能和热稳定性能的影响

为了提高胶原溶液的粘弹性能和热稳定性,以及提高胶原耐酶解的能力,使用一种新的交联剂——N-羟基琥珀酰亚胺己二酸酯(NHS-AA),对胶原溶液进行交联改性。动态流变仪测定结果表明,在f=0.02Hz和25℃时,胶原溶液的弹性模量(G′)、粘性模量(G″)和复数粘度(η*)分别从未交联时的0.03、0.11Pa和0.76Pa.s增加到22.83、3.36Pa和143.90Pa.s。差示扫描量热分析仪(DSC)测量结果显示,交联后胶原溶液的热变性温度达到42.5℃,比未交联胶原溶液(40.4℃)提高了2.1℃。针对交联后胶原溶液制成的海绵,电泳法(SDS-PAGE)研究表明胶原海绵抗酶降解能力显著增强。

鼠抗达氟沙星多克隆抗体的制备

为了制备鼠抗达氟沙星多克隆抗体,试验应用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法将达氟沙星(DFLX)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)耦联,制备免疫抗原(DFLX-BSA)和检测抗原(DFLX-OVA);通过SDS-PAGE电泳检测人工抗原是否耦联成功;用DFLX-BSA免疫昆明小鼠,以获得高效价的多克隆抗体,并用间接ELISA法检测抗体效价。结果表明:经SDS-PAGE电泳,BSA和DFLX-BSA以及OVA和DFLX-OVA两组蛋白条带迁移距离都相对发生了变化,耦联物均滞后于其载体蛋白,说明药物耦联成功;间接ELISA检测结果为1∶32 000,证明获得了高效价的抗体。说明用该方法制备鼠抗达氟沙星多克隆抗体是可行的。

达氟沙星完全抗原的制备与鉴定

通过N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)法,将半抗原达氟沙星(danofloxacin,DAN)与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原DAN-BSA。对所制备的完全抗原通过FT-IR光谱、紫外光谱和SDS-PAGE进行分析确证,并通过测定免疫血清的效价和IC50对其免疫原性进行检测。结果表明,DAN-BSA的FT-IR光谱较BSA和DAN均有变化;紫外光谱扫描中,DAN-BSA的最大吸收波长较BSA和DAN有所偏移;SDS-PAGE电泳中DAN-BSA的条带较BSA条带上移,说明DAN-BSA的分子量大于BSA;免疫原性检测中,血清的效价达到256 000,IC50值为28.84μg/L,说明所制备的完全抗原具有免疫原性。综上可知,完全抗原DAN-BSA成功合成,可以用来免疫动物制备抗体,这为后续免疫学检测方法的建立奠定了良好的基础。

穿膜肽与蛋白微球偶联物的制备及鉴定

目的:制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球(BSA-NP)偶联物,并检测其对膀胱癌EJ细胞的穿膜活性。方法:通过异型双功能交联剂N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯(SPDP)交联的方法制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球偶联物。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电镜、荧光显微镜及共聚焦显微镜检测其共价连接及活性。结果:SDS-PAGE电泳鉴定TAT-EGFP与白蛋白微球是通过共价键连接;电镜显示二联偶联物(TAT-EGFP-BSA-NP)的构象;荧光显微镜及电镜显示了二联偶联物的穿膜活性。结论:成功的制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球偶联物-TAT-EGFP-BSA-NP,且偶联物对膀胱癌细胞有穿膜活性。

环丙沙星免疫抗原的合成与鉴定

目的:合成和鉴定环丙沙星免疫抗原。方法:通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法偶联免疫抗原。结果:经紫外光谱分析CIP-BSA偶联比(CIP:BSA)为6:1,紫外光谱峰形发生变化并位移。间接酶联免疫法分析证明其免疫兔所获得的抗体与环丙沙星有良好的特异性,半数抑制浓度为38 ng/ml。结论:成功合成了环丙沙星人工抗原,并获得了抗环丙沙星抗体,为ELISA或TRFIA等免疫方法的进一步研究提供了试验基础。