虾仁中酸性红73间接ELISA检测方法的建立

本文采用活性酯法和N，N-羰基二味唑法分别合成了酸性红73的人工抗原，方阵滴定实验表明活性酯法所得兔抗酸性红73的IgG更适合用于后继实验，以此为基础建立了一种虾仁中酸性红73的间接ELISA检测方法井对反应条件进行了优化。优化后，该方法的半敬抑制浓度（IC50）为45．39μg/L，检测限（LOD）为5．64μg／L。交叉反应实验结果表明除苏丹红3号（0．15％）外与番红花红、苯酚红、刚果红、碱性品红和胭脂红等其他竞争物无交叉反应。在虾仁中的空白添加回收率范围为71．3％-84．4％，变异系数（RSD）〈9．55％。此法可用于虾仁中酸性红73的残留检测，并为进一步制备单克隆抗体和研制快速检测试制盒奠定了基础。

酸性红73人工抗原的合成与鉴定

为进一步制备酸性红73新型人工抗原,试验采用N,N-羰基二咪唑(CDI)法合成酸性红73的免疫原和包被原,经紫外扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定偶联成功,酸性红73与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OA)的偶联比分别为9∶1和5∶1。免疫后所得兔源多克隆抗体,采取双向琼脂扩散实验和方阵滴定法确定包被抗原和抗体的最适工作浓度分别为1∶4000、1∶8000。