N-苄基十六碳酰胺促小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮的~1H NMR代谢组学研究

采用基于核磁共振氢谱(~1H NMR)的细胞代谢组学技术探讨了玛咖有效成分N-苄基十六碳酰胺(NBH)促进小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮的作用机制.测定了小鼠Leydig细胞在给药前后的细胞增殖率和细胞培养液中的睾酮含量,采用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析,研究了小鼠Leydig细胞在给药前后细胞破碎液中的代谢物差异,并进行了代谢通路分析.实验结果表明, NBH能提高小鼠Leydig细胞增殖率和睾酮分泌量,给药后小鼠Leydig细胞破碎液中的代谢轮廓明显改变,共鉴定亮氨酸、赖氨酸、鲨肌醇、缬氨酸和丙氨酸等24种差异代谢物.经Metaboanalyst分析发现,差异代谢物主要涉及丙氨酸/天冬氨酸/谷氨酸代谢、甘氨酸/丝氨酸/苏氨酸代谢、谷胱甘肽代谢及丙酮酸代谢等10条新陈代谢和遗传信息处理代谢通路,初步阐明了NBH通过调节上述代谢通路的相关节点发挥促进小鼠Leydig细胞增殖和分泌睾酮作用.

高效液相色谱法测定川产玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量

采用HPLC法测定了川产(四川省阿坝县、峨边县、美姑县)玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量,并与其在秘鲁玛咖中的含量进行了比较。色谱条件为:Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5.0μm);流动相A为0.005%的三氟乙酸水溶液,流动相B为0.005%的三氟乙酸乙腈溶液,梯度洗脱;检测波长为210nm。结果表明,阿坝县、峨边县和美姑县玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量分别为0.087%、0.085%、0.055%,均高于秘鲁玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量(0.030%)。该方法重复性好(RSD=0.47%)、精密度高(RSD=0.38%)、加标回收率准确可靠(RSD=3.5%),可用于玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量的测定。

N-苄基十六碳酰胺与玛卡醇提物小鼠抗疲劳作用

目的比较不同剂量和不同时限N-苄基十六碳酰胺(NBH)与玛卡醇提物对小鼠抗疲劳作用。方法多次灌胃实验:60只雄性小鼠随机分为6组,对照组、7.5、0.5 mg/kg NBH组、1 800、180、45 mg/kg玛卡组,每组10只,分别灌胃给予NBH和玛卡醇提物,连续37d;一次灌胃实验:30只雄性小鼠随机分为3组,对照组、7.5 mg/kg NBH和1 800 mg/kg玛卡组,每组10只,一次灌服NBH和玛卡醇提物。比较给予受试动物前后小鼠体重变化,采用负重游泳试验,比较小鼠负重游泳时间并统计分析。结果多次灌胃实验结果显示,各剂量NBH组与玛卡组小鼠体重无明显差异;7.5 mg/kg NBH和1 800 mg/kg玛卡组小鼠负重游泳时间明显长于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);一次灌胃实验结果显示,与对照组比较,1 800 mg/kg玛卡组小鼠负重游泳时间无明显变化,7.5 mg/kg NBH组小鼠负重游泳时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NBH和玛卡醇提物均可延长小鼠负重游泳时间,增强小鼠抗疲劳作用,NBH可能为玛卡抗疲劳作用的有效成分之一。

玛咖酰胺的超临界色谱分析研究与含量测定

目的:采用超临界色谱分析技术对玛咖酰胺进行分析与含量测定。方法:以超临界CO2作为流动相,在改性剂比例3%~4.8%,压力10~18 MPa,柱温32~45℃,流速2~5 mL/min的范围内考察了N-苄基十六烷酰胺(玛咖酰胺B)和N-(3-甲氧基-苄基)-(9Z,12Z)-十八烷二烯酰胺在RP色谱柱上的保留时间、分离度和理论板数的变化规律。结果:改性剂比例越高,压力越大,柱温越高,流速越大,玛咖酰胺出峰时间越短,但分离度和理论板数随改性剂比例和柱温的增加有先增后减的趋势。在分析玛咖超临界CO_2提取物样品时,选择改性剂比例3.4%,柱温45℃,压力10 MPa,流速3 mL/min为色谱分析条件,可以较好的分离玛咖酰胺B。结论:该试验为玛咖酰胺类成分的研究提供了新的分离分析工具,为玛咖中玛咖酰胺类有效成分的质量控制提供了新思路。

云南玛咖中功能性成分的分析研究

研究云南栽培玛咖(Lepidium meyenii Walpers)的功能性成分。采用经典的植物化学研究方法硅胶色谱柱法对云南玛咖进行分离纯化,通过红外光谱、核磁共振光谱、质谱及色谱的相关数据及结合文献进行分析研究。从玛咖中分离鉴定了3个化合物,分别为β-谷甾醇(β-sitosterol)、n-苄基十六烷酰胺(N-benzylhexadecanamide)、蔗糖(Sucrose);从玛咖提取物中分析确定含有5个玛咖酰胺、2个咪唑生物碱和2个芥子油苷化合物。

丽江产玛咖中的1个新玛咖酰胺

目的研究产自丽江的玛咖Lepidium meyenii的干燥根茎的化学成分和生物活性。方法样品经90%乙醇水提取后,再经硅胶柱、微孔树脂(MCI)和高效液相色谱法等方法分离有效成分,通过核磁共振技术(包括二维核磁HSQC、HMBC和COSY)进行结构鉴定,采用MTT法对新化合物进行抗肿瘤活性测试。结果从玛咖根中分离得到3个玛咖酰胺类化合物,分别鉴定为N-(3,4-二甲氧基苄基)十六碳-9Z-烯酰胺(1)、N-苄基-13-酮基-9E,11E-十八碳二烯酰胺(2)和N-(3,4-二甲氧基苄基)-十六碳酰胺(3)。结论化合物1为新化合物,命名为玛咖新胺A;该化合物对人5种癌细胞(NB4、A549、SHSY5Y、PC3、MCF7)没有明显细胞毒活性。

吉林产玛咖的化学成分研究

目的研究吉林产玛咖Lepidium meyenii干燥根茎的化学成分。方法采用大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱和半制备高效液相色谱等现代技术进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果从玛咖根茎水提取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为N-甲基-3-羟基苯乙酰胺（1）、N-苄基十八碳酰胺（2）、苯乙酰胺（3）、苯甲胺（4）、3-甲氧基苯乙酸（5）、苯乙酸（6）、4-羟基-3-甲氧基-苯甲酸（7）、烟酸（8）、3,4-二羟基甲酸甲酯（9）、腺苷（10）、L-缬氨酸（11）、胡萝卜苷（12）、β-谷甾醇（13）。结论化合物1为首次从天然产物中分离得到,化合物3~6、9为首次从独行菜属植物中分离得到,化合物11、12为首次从玛咖中分离得到。

黑玛咖不同提取物的抗疲劳作用与谱效关系研究

目的研究黑玛咖不同提取物的抗疲劳作用及其超高效液相色谱(UPLC)图谱与抗疲劳作用的谱效关系,为明确黑玛咖的抗疲劳作用的物质基础提供依据。方法通过小鼠力竭游泳实验、检测肝糖原和血清乳酸水平,比较黑玛咖8种提取物的抗疲劳作用;采用UPLC-Q-TOF/MS法建立黑玛咖8种提取物的指纹图谱;以小鼠力竭游泳实验为抗疲劳作用的药效学指标,采用偏最小二乘法回归(PLSR)分析建立其谱效关系。结果黑玛咖60%、80%、95%乙醇提取物(醇提物)均明显增加小鼠力竭游泳时间,且以95%醇提物增加作用更为显著;黑玛咖80%醇提物能显著增加因过度运动所致的降低的肝糖原水平;黑玛咖95%醇提物能明显减少小鼠负重游泳后产生的血清乳酸堆积。从黑玛咖不同提取物UPLC指纹图谱中提取出23个能够表征含量差异的特征峰。采用PLSR分析,以力竭游泳时间为药效指标时,发现黑玛咖提取物中N-苄基十六酰胺、N-苄基-5-氧代-6E,8E-十八碳二烯酰胺、1,3-二苄基-2-苯基-4,5-二甲基咪唑和N-十八烷酰胺与抗疲劳作用呈正相关,且VIP值大于1。结论黑玛咖95%及80%醇提物具有显著的抗疲劳作用;明确N-苄基十六酰胺、N-苄基-5-氧代-6E,8E-十八碳二烯酰胺、1,3-二苄基-2-苯基-4,5-二甲基咪唑和N-十八烷酰胺是黑玛咖抗疲劳作用的主要有效成分。为深入研究黑玛咖抗疲劳药效物质基础及建立全面可靠的质量控制方法提供思路。