N-苯甲酰-L-精氨酰胺的晶体结构

在水热条件下得到N-苯甲酰-L-精氨酰胺单晶,并用X射线衍射测定其晶体结构,化合物属单斜晶系,空间群为P21/n,分子式C13H20N5O2,Mr=278.34,晶胞参数:a=0.92838(15)nm,b=0.97000(16)nm,c=1.4836(2)nm,β=90.411(3)°,V=1.3360(4)nm3,Z=4,Dc=1.384g/cm3,R1=0.0596,wR2=0.1932,化合物分子通过氢键形成三维结构.

N-乙酰基-L-精氨酸-甲酰胺的理论构象分析

目的考虑到非键的和静电的相互作用、拓朴能和键角的变化,研究N-乙酰基-L-精氨酸-甲酰胺的空间结构.方法应用主链在低能构象和侧链在低拓朴能时φ,ψ,χ1-χ4的全部组合作为初始近似,完成了对分子的优势构象的计算,比较了精氨酸和赖氨酸的构象的可能性.结果计算获得的N-乙酰基-L-精氨酸-甲酰胺的稳定构象与在已知结构的蛋白质中的精氨酸残基的几何构型相符.结论精氨酸残基在蛋白质中构象即为精氨酸孤立单肽的优势构象.

N-[2-(4-特戊酰氧基苯磺酰胺基)苯甲酰基]甘氨酸苄酯的合成

目的合成西维来司钠(sivelestatsodium)的关键中间体N-[2-(4-特戊酰氧基苯磺酰胺基)苯甲酰基]甘氨酸苄酯(1)。方法先以特戊酸、氯化亚砜、对羟基苯磺酸为原料,经酯化、苯磺酸成酰氯得到对位特戊酰氧基苯磺酰氯(4);再以甘氨酸、苄醇、邻硝基苯甲酰氯为原料经酯化、酰氨化、还原得到N-(2-氨基苯甲酰基)甘氨酸苄酯(7);将4和7两中间体缩合得1。结果及结论本方法原料廉价易得,条件温和易控,收率较高,适合工业化生产。

RGD肽类血小板聚集抑制剂的研究Ⅰ.N─乙酰─精氨酰─甘氨酰─天冬氨酸─苯乙酰胺的合成

活化的血小板暴露膜糖蛋白复合物（GPⅡb／Ⅲa），作为受体识别结合纤维蛋白原（Pg）等粘附蛋白共有的精氨酰─甘氨酰─天冬氨酸（Arg－Gly－Asp，即RGD）序列，导致血小板聚集和血栓形成。人工合成的含RGD多肽可阻断GPⅡb／Ⅲa与Fg等结合，从而抑制血小板聚集和血栓形成。为了开展肽类血小板聚集抑制剂的研究，我们用液相法合成了Ac－Arg－Gly一Asp－NHCH2CH2Ph。初步体外活性实验结果表明，该RGD肽衍生物对ADP诱导的血小板聚集具有较强的抑制作用，在血浆中3h作用强度基本不变。

佛波酯磷脂酰-L-丝氨酸(PEPS)中间体的合成工艺改进

目的改进佛波酯磷脂酰-L-丝氨酸(PEPS)的中间体3-苄基-2-(8-叔丁基二苯基硅氧辛酰基)-1-三苯甲基-sn-甘油(9)和N-叔丁氧羰基-L-丝氨酸二苯甲酯(11)的合成工艺。方法以D-甘露醇为原料,经丙叉基保护、氧化-还原、苄基保护、脱丙叉保护、选择性保护、酯化、羧基还原、硅烷基保护合成化合物9;以L-丝氨酸为原料,经氨基、羧基保护合成化合物11。结果与结论目标化合物的结构经1H-NMR谱确证,改进后的工艺,缩短了合成路线,简化了柱色谱分离、纯化步骤,具有原料易得,操作简便,成本低廉的优点。

4-(2-乙酰氨基-3-羧基丙酰氨基)苯甲酸的合成工艺研究

以L-天冬氨酸和乙酸酐为原料,经脱水环化合成N-乙酰-L-天冬酸酐,然后与对氨基苯甲酸经N-酰化反应合成得到新化合物4-(2-乙酰氨基-3-羧基丙酰氨基)苯甲酸。通过Scifinder查询,未发现它的报道。研究了物料配比、反应温度、反应时间和溶剂等因素对产物收率的影响。优化条件为:无水乙醇作溶剂,n(N-乙酰-L-天冬酸酐)∶n(对氨基苯甲酸)=1∶1,反应温度为45℃,反应时间为3 h。优化条件下产物收率为78.7%。目标化合物经熔点、红外和核磁氢谱确证。

RGD肽类血小板聚集抑制剂的研究Ⅱ.N─乙酰─精氨酰─甘氨酰─天冬氨酰─苯乙酰胺体外抗血小板聚集活性

精氨酰─甘氨酰─天冬氨酸（RGD）是纤维蛋白原（Fg）等粘附蛋白与血小板糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa／识别和结合的氨基酸序列，我们合成的含RGD肽段的Ac─Arg─Gly─Asp─NHCH2CH2Ph在体外能预防ADP（终浓度为5．0μM）诱导的血小板聚集，并表现出较强的浓度依赖性。血浆中3小时后仍有较高的生物学活性。IC50＝76．42±55．42μM。

NAC抑制镉离子诱导的小鼠精子DLD酪氨酸磷酸化作用

重金属镉是环境中广泛存在的污染物,对机体生殖系统有很强的毒性作用。镉能诱导精子细胞蛋白二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD)发生酪氨酸磷酸化修饰,但机制尚不清楚。本研究利用蛋白免疫印迹技术探讨镉离子对小鼠生殖系统的毒性作用、镉诱导生殖细胞蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰的机理及抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对精子的保护作用。结果表明,镉离子能减弱生殖细胞的能量代谢水平,从而抑制睾丸的生长发育并导致产仔数下降;镉离子能特异性诱导精子DLD蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰,且与钙离子具有协同作用。此外,NAC可在体外有效抑制DLD蛋白发生酪氨酸磷酸化从而抑制镉的生殖毒性,并恢复精子能量水平和活力参数。本研究从NAC抑制镉离子诱导特异性蛋白磷酸化修饰的角度,揭示NAC保护作用机制,旨在为镉离子生殖毒理学研究及疾病防治提供理论基础。

N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯测定水蛭提取物生物活性

目的:建立水蛭提取液生物活性测定方法。方法:用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)为底物,通过测定反应体系中未被水蛭提取物抑制的凝血酶的量,间接测定水蛭提取物抗凝血酶的生物活性。结果:水蛭提取物的生物活性测定曲线线性关系良好,回归方程为Y=0.0014X+0.0196,r=0.9994。结论:本方法于30℃条件下反应25min进行测定,日间、日内精密度分别为2.6%和1.9%,适宜作为提取物生物活性测定方法。

复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中两组分的含量测定

目的建立复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中两种二肽的含量测定方法。方法以2,4-二硝基氟苯为衍生剂进行柱前衍生,以C18柱为固定相、乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相进行梯度洗脱,于360nm处检测。结果所有组分于45min内洗脱完毕,N-甘氨酰-L-谷氨酰胺回收率为99.8%,RSD为2.63%;N-甘氨酰-L-酪氨酸回收率为100.9%,RSD为3.67%。结论该方法操作简便,结果准确,可用于复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中N-甘氨酰-L-谷氨酰胺和N-甘氨酰-L-酪氨酸的含量测定。

吡嗪酰胺对人肝细胞L02的毒性及作用机制研究

目的评价吡嗪酰胺(pyrazinamide,PZA)的肝脏毒性,并探讨其导致肝损伤的作用机制。方法将L02细胞分为对照组,PZA给药组(25、125、625、3125µg/mL),N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetlg-L-cysteine,NAC)(10 mmol/L)+PZA(25、125、625、3125µg/mL)给药组,分别给予对应培养基及不同浓度PZA、NAC;采用流式细胞仪定量检测L02细胞凋亡数量、细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);采用Western-blot法检测L02细胞内Fas、FADD、Cyt-c、Cleaved caspase-3的蛋白表达。结果与对照组比较,各浓度PZA给药组凋亡细胞比例均显著升高,且中晚期凋亡细胞比例较早期凋亡细胞比例明显增多;25、125µg/mL PZA给药组MMP分别降低32.23%、24.79%,3125µg/mL PZA给药组MMP位升高31.40%;3125µg/mL PZA给药组Fas蛋白表达升高;125、625µg/mL PZA给药组Cleaved caspase-3蛋白表达µg升高。PZA联用NAC后,各浓度组凋亡细胞比例低于单用PZA组,25、125、3125µg/mL组下降明显;25、625、3125µg/mL组与单用PZA组比较,MMP分别增加了21.95%、33.48%、22.33%;3125µg/mL组与单用PZA组比较Fas蛋白表达量降低47.50%;125、625、3125µg/mL组Cleaved caspase-3蛋白表达量分别降低66.13%、73.91%、41.67%。结论PZA可能是通过死亡受体途径、线粒体途径诱导L02细胞凋亡从而导致肝损伤,联用NAC后可明显缓解PZA导致的肝损伤。

抗菌药物与苯丙氨酸-精氨酸-β-萘酰胺联合应用对鲍曼不动杆菌耐药突变选择窗的影响

目的 探讨体外头孢哌酮舒巴坦（CFP）、亚胺培南西司他汀（IMP）、阿米卡星（AMK）、环丙沙星（CIP）四种抗鲍曼不动杆菌药物分别与外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β-萘酰胺（PAβN）联合应用,对鲍曼不动杆菌耐药突变选择窗的影响.方法 E-test测定四种药物体外单药对鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度（MIC）;棋盘格法测定抗菌药物联合PAβN的MIC;琼脂平板二倍稀释法测定单药以及联合PAβN后防耐药突变浓度（MPC）,并计算相应的选择指数SI（MPC/MIC）,根据SI下降的程度来判断减少耐药突变体的能力;并选择CFP、IMP、CIP分别联合AMK,分别测定联合前后的SI,比较联合抗菌药物与联合PAβN在防鲍曼不动杆菌耐药突变的能力.结果 CFP、IMP、AMK、CIP单独应用对鲍曼不动杆菌SI分别为＞32,＞64,16,16;与PAβN联合后分别为16、8、8、8.CFP、IMP、CIP分别与AMK联合后的SI分别为4,2,4.结论 四种抗菌药物分别与外排抑制剂PAβN联用时,可以缩小抗菌药物单药对鲍曼不动杆菌的耐药突变选择窗,有利于减少耐药突变体的产生,但其作用明显弱于抗菌药物联合应用.

小肠结肠炎耶尔森菌β-N-乙酰葡萄糖胺酶调控机制及AmpD蛋白对AmpCβ-内酰胺酶表达的作用

目的 研究小肠结肠炎耶尔森菌β-N-乙酰葡萄糖胺酶（NagZ）的调控机制及AmpD蛋白对AmpCβ-内酰胺酶表达的作用.方法 通过对小肠结肠炎耶尔森菌3个AmpD蛋白同系物（AmpD1～3）基因（ampD1～3）、低分子量青霉素结合蛋白（LMM PBPs）基因（pbp4、pbp5a、pbp5b、pbp7）、NagZ基因（nagZ）以及ampR基因进行敲除或回补,以构建基因突变株,并利用头孢西丁对突变株进行诱导;采用检测头孢硝噻吩水解法测定诱导组和非诱导组突变株AmpCβ-内酰胺酶活性（单位为U）,采用luxCDABEreporter系统检测AmpCβ-内酰胺酶启动子活性[单位为相对光单位（RLU）],采用对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为显色底物测定NagZ酶活性（单位nmol/L）.结果 AmpD1蛋白的功能较强,YEΔD1突变株的AmpCβ-内酰胺酶表达量出现上升,诱导组和非诱导组分别为（3.29±1.58）和（4.08±1.75）U.YEΔ5b、YEΔ4Δ5b、YEΔ5aΔ5b和YEΔ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性增强,其中YEΔ4Δ5b突变株活性最高,诱导组和非诱导组分别为（106903.16±61910.61）和（205427.45±45352.17）RLU.缺失3种基因的菌株中,YEΔ4Δ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性最高,诱导组和非诱导组分别为（304108.04±99274.53）和（531440.21±68891.02）RLU;缺失4种基因的菌株中,YEΔ4Δ5aΔ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性最高,诱导组和非诱导组分别为（1013810.99±260955.96）和（1230214.59±205526.79）RLU;敲除nagZ基因后,YEΔD1D2D3ΔZ突变株AmpCβ-内酰胺酶活性未发生明显的变化,而YEΔ4Δ5aΔ5bΔ7ΔZ突变株活性下降明显,诱导组和非诱导组分别为（0.30±0.20）和（0.29±0.21）U,基本降至野生株水平.结论 在肠杆菌科细菌中发现多个AmpD蛋白参与ampC基因的三级调控机制;发现以PBP5b为主,PBP4、PBP5a和PBP7共同参与的ampC基因调控模式;同时还证实了在小肠结肠炎耶尔森菌具有NagZ依赖和非依赖两种ampC基因调控途径.

深海噬菌体BVE2内溶素的重组表达及其活性研究

本研究从一株来源于西南印度洋沉积物的噬菌体BVE2基因组中得到了一条全长702 bp,编码噬菌体内溶素的基因Lysin132,编码的蛋白共含有234个氨基酸残基,预计分子量为25.74 kDa;氨基酸序列同源比对结果表明BVE2 Lysin132具有多个酰胺酶活性位点。进化树分析结果表明BVE2 Lysin132是一种N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶。将Lysin132克隆到pEASY-Blunt E2 Expression Vector中,构建了E.coli-pEASY-Lysin132表达菌株。成功用IPTG诱导表达,得到了大量带有6×His标签的重组BVE2 Lysin132。经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳,得到单一目的蛋白条带。酶学性质分析结果表明,重组BVE2 Lysin132的最适反应温度为30℃,在中高温下热稳定性良好,在10~50℃下孵育90 min,仍能保持70%以上的酶活力;最适pH为7.0,在pH 6.0~8.0时均能保持80%以上的酶活力,表明该酶有较宽的pH作用范围;Na+、Mg^(2+)可以使酶活力显著提高20%以上,Ca^(2+)可以使酶活力提高40%以上。抑菌实验结果表明,重组BVE2 Lysin132对革兰氏阴性菌的抑制效果较好,尤其对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、坎氏弧菌(V.campbellii)、哈维氏弧菌(V.harveyi)的抑制作用显著,与市售微生物溶菌酶相比,抑制效果最高提升了40%以上。因此,本研究获得了一种拥有较宽pH作用范围且热稳定性良好的内溶素,可为开发应用于水产养殖、食品保鲜、医药等领域的新型抑菌剂研发提供基础。

改良固相BANA试验方法的建立

目的:建立一种稳定、实用的改良固相BANA试验方法。方法:利用牙龈卟啉单胞菌、福赛氏类杆菌、螺旋体等牙周炎关键致病菌均能产生胰蛋白酶样酶(Trypsin-like enzyme,TLE),可使人工合成的酶底物—苯甲酰精氨酸萘酰胺(bengoyl-DL-arginine-naphthlamide,BANA)水解的原理,并以经典的液相法为"参照标准",在国外固相法的基础上进行了适当的改良,建立了改良固相BANA试验。结果:实验发现2mmol的BANA为改良固相BNA试验最适工作浓度,在55℃水箱孵育30min,可以检测到1.95×10-6Anson以上的胰蛋白酶,并具有良好的特异性和敏感性。结论:改良固相法与液相法一样具有较好的特异性和敏感性,但固相法更简单、快捷,为临床牙周病的检测提供了客观、简便的检测方法。

BANA试验在牙周病学中的应用

BANA试验是一种牙周病椅旁微生物快速诊断新技术 ,对临床医生制定治疗计划、疗效评价、口腔卫生学评估和流行病学调查等有重要实用价值。本文对这一技术在牙周病学中的应用进行综述。

液相BANA试验检测口腔关键厌氧菌方法的建立

目的建立液相苯甲酰精氨酸萘酰胺(简写BANA)水解试验快速检测牙周病关键厌氧菌的新技术。方法利用牙周病相关关键微生物可产生胰蛋白酶样酶使人工合成的酶底物———BANA水解的原理检测这些重要口腔厌氧菌。结果BANA试验可检测出8.0×105以上的牙龈卟啉菌,特异性良好、不受标本采集中血污染的影响;71.88%活动期牙周炎龈下菌斑BANA试验阳性,4%的健康人龈下菌斑BANA试验阳性。结论BANA试验可望成为牙周病诊断新的辅助指标。

一氧化氮对猪细小病毒体外增殖的影响研究

本文研究了来源于不同前体物的一氧化氮(Nitro oxide, NO)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)体外增殖的影响。结果表明,NO前体物S 硝基 N 乙酰青霉胺(SNAP)、L 精氨酸(L Arg)均能够有效地诱导 PK 15 细胞产生NO,进而显著地抑制PPV在PK 15 细胞上的复制,其效果与前体物的浓度呈正相关,在浓度为 100μmol/L和200μmol/L时,SNAP产生NO的能力与抑制病毒复制的作用要强于 L Arg。在病毒感染前 6 h和 3 h添加SNAP或L Arg对病毒复制的抑制作用比在病毒感染后3 h 和 6 h添加的作用强,表明 NO的抗病毒作用主要发生在病毒感染的初始阶段。此外,添加具有抑制 L Arg产生 NO作用的 N 硝基 L 精氨酸(L NNA)能抵消 L Arg体外抗病毒的作用。

新型联苯胺替代偶氮化合物的合成及互变异构性质研究

以4,4’-二氨基苯甲酰替苯胺为重氮组分,以N-乙酰-L-酪氨酸为偶合组分,发生重氮化偶合反应,合成了一个新型的偶氮化合物,结构通过UV、1H NMR进行了表征。探讨了所合成化合物的偶氮式-醌腙式互变异构和顺反互变异构性质。结果表明,酸碱效应对偶氮-醌腙互变异构有着显著的影响。化合物在弱酸性条件下主要为醌腙体,中性条件下主要为偶氮体。在甲醇-水体系中,存在着一个pH依赖性的偶氮体-醌腙体分子离子平衡。偶氮化合物365 nm紫外光照射发生了反式-顺式光异构化过程,化合物可由稳定的反式结构变为顺式结构。