N-Ac-L-Leu-PEI/微小RNA-34a复合物对大鼠颅骨缺损成骨的影响

目的:将N-Ac-L-Leu-PEI/微小RNA(microRNA,miR)-34a复合物用于大鼠颅骨缺损模型,探讨miR-34a对骨缺损区成骨的影响。方法:Wistar雄性大鼠32只,制备标准大鼠颅骨缺损模型,随机分为4组,分别于缺损区覆盖载有磷酸盐缓冲液(phosphate buffered salin,PBS)、N-Ac-L-Leu-PEI、N-Ac-L-LeuPEI/miR-34a复合物、N-Ac-L-Leu-PEI/miR-34aNC复合物的口腔生物膜,饲养10周后处死大鼠,通过锥形束CT(cone beam computerized tomography,CBCT)、微型CT(microcomputed tomography,micro-CT)、反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)等方法检测大鼠颅骨缺损区新骨形成情况。结果:N-Ac-L-Leu-PEI/miR-34a复合物组缺损区骨新生最为明显,新生骨量与总组织量之比(bone volume/total volum,BV/TV)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)值均高于其它组,成骨标志性基因Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、Osterix转录因子(serine protease 7,SP7)及Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,ColⅠ)的mRNA表达显著上调。结论:对实验性大鼠颅骨缺损模型,N-Ac-LLeu-PEI/miR-34a具有促进缺损区成骨的作用。

PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物对黑素瘤细胞的抑制作用

目的将树枝状聚合物聚酰胺-胺(PAMAM)包载可以表达具有抑制人恶性黑素瘤细胞A375增殖、侵袭和转移的miR-34a的质粒sh-miR-34a,构建聚阳离子纳米复合物PAMAM/sh-miR-34a。考察形成的复合物的粒径、zeta电位、细胞摄取,以及对A375细胞的抑制作用。方法利用粒度测定仪测定纳米复合物的粒径和电位,凝胶电泳实验测定PAMAM对sh-miR-34a的包裹能力;利用罗丹明标记的sh-miR-34a考察A375细胞对纳米复合物的摄取;CCK8法测定PAMAM/shmiR-34a对A375细胞的抑制作用;Transwell法测定PAMAM/sh-miR-34a抑制A375细胞迁移和侵袭作用;蛋白质印迹法测定PAMAM/sh-miR-34a对A375细胞中pAkt、pRb、pERK1/2蛋白表达的阻滞作用。结果 PAMAM包裹sh-miR-34a可形成稳定的纳米复合物,在N/P=20时,细胞对PAMAM/sh-miR-34a的摄取达最高(P<0.05)。PAMAM可以有效携带shmiR-34a进入A375细胞,体外抑制A375细胞的增殖、侵袭和迁移,并且可以阻滞A375细胞中pAkt、pRb和pERK1/2蛋白的表达。结论 PAMAM可以包裹sh-miR-34a并对人恶性黑素瘤A375细胞起到抑制作用。