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组织自发荧光在大鼠心肌缺血实验中的应用
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作者 李峰杰 张金艳 +4 位作者 何萍 李贻奎 赵乐 郝伟 李连达 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期885-888,共4页
目的基于特定的荧光检测技术,探讨组织自发荧光在大鼠心肌缺血性损伤实验中的应用。方法本研究通过Kodak FX Pro活体成像技术检测大鼠心肌组织的自发荧光。通过荧光检测,比较正常大鼠和心肌缺血性损伤大鼠的心肌组织对应部位自发荧光的... 目的基于特定的荧光检测技术,探讨组织自发荧光在大鼠心肌缺血性损伤实验中的应用。方法本研究通过Kodak FX Pro活体成像技术检测大鼠心肌组织的自发荧光。通过荧光检测,比较正常大鼠和心肌缺血性损伤大鼠的心肌组织对应部位自发荧光的变化,并进行定量分析。结果心肌缺血损伤后,损伤部位组织自发荧光信号明显增强,将荧光信号通过活体成像系统进行定量,与正常心肌组织比较差异有统计学意义。结论大鼠心肌组织在心肌缺血损伤后,心肌组织的自发荧光明显增强,为大鼠心肌缺血损伤模型的研究及其评价提供新的方法。有利于定位、定性、定量比较研究,可用于病理、生理、药理及作用机制等多方面研究。 展开更多
关键词 大鼠 心肌组织 心肌缺血损伤 n-bt 自发荧光 活体成像系统 定量分析
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鳞翅目昆虫氨肽酶N与Bt毒素的结合及其与Bt抗性的关系 被引量:9
2
作者 马文静 韩兰芝 +2 位作者 尹新明 曹广春 苏丽娟 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期378-387,共10页
随着BtCry作物在我国的广泛应用和推广,靶标害虫对其抗性风险已成为BtCry作物生态安全研究的重要内容。氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是位于昆虫中肠刷状缘膜囊泡(Brush Border Membrane Vesicles,BBMV)上BtCry毒素重要的受体蛋白之一... 随着BtCry作物在我国的广泛应用和推广,靶标害虫对其抗性风险已成为BtCry作物生态安全研究的重要内容。氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是位于昆虫中肠刷状缘膜囊泡(Brush Border Membrane Vesicles,BBMV)上BtCry毒素重要的受体蛋白之一,它与BtCry毒素的结合能力决定了BtCry毒素的杀虫活性及昆虫对Bt抗性的产生。本文从APN的结构特征与分类、APN与BtCry毒素的结合特异性、结合位点、结合过程中的分子互作机制及APN变异导致昆虫抗性产生几方面系统综述了鳞翅目昆虫中肠BtCry受体蛋白-氨肽酶N与BtCry毒素的结合及其与Bt抗性关系的研究进展。 展开更多
关键词 氨肽酶N BT Cry毒素 受体 结合能力 抗性
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抗Bt棉棉铃虫幼虫Bt受体氨肽酶N(APN2)基因克隆 被引量:8
3
作者 苏建亚 周晓梅 沈晋良 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第10期59-62,共4页
通过对Bt棉抗性和敏感棉铃虫幼虫中肠氨肽酶N的克隆和测序 ,鉴定了氨肽酶N基因家族的 1个成员Haapn2 ,其cDNA序列具有 32 0 9个核苷酸 ,含有 30 96bp的开放阅读框 ,编码产生1 0 32个氨基酸的蛋白质。其推定氨基酸序列具有锌结合模体HEXX... 通过对Bt棉抗性和敏感棉铃虫幼虫中肠氨肽酶N的克隆和测序 ,鉴定了氨肽酶N基因家族的 1个成员Haapn2 ,其cDNA序列具有 32 0 9个核苷酸 ,含有 30 96bp的开放阅读框 ,编码产生1 0 32个氨基酸的蛋白质。其推定氨基酸序列具有锌结合模体HEXXHX18E ,N 末端具有 1 7个氨基酸的疏水性信号序列 ,C 末端还具有 2 2个氨基酸的糖基磷酯酰肌醇 (GPI)添加信号肽。比对抗性和敏感棉铃虫cDNA的开放阅读框 ,抗性品系的开放阅读框中 ,有 5 7个点突变 ,共导致了 1 5个氨基酸的改变 ,其中 2个突变 (谷氨酰胺13 7→谷氨酸、缬氨酸173 →苏氨酸 )位于Cry1A毒素结合区域 ,可能与棉铃虫对转Bt基因棉产生抗性有关。报道的氨肽酶cDNA序列已提交GenBank ,AY346383和AY2 795 35分别是Bt抗性和敏感品系的Haapn2。 展开更多
关键词 抗B 开放阅读框 氨肽酶N 氨基酸 受体 A毒素 APN 棉铃虫 BT棉 幼虫
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黄河三角洲盐渍土棉花施用氮、磷、钾肥的效应研究 被引量:46
4
作者 辛承松 董合忠 +4 位作者 罗振 唐薇 张冬梅 李维江 孔祥强 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1698-1706,共9页
为探讨盐渍土抗虫棉施用氮(N)、磷(P)、钾(K)肥的效应及其营养生理机制,指导滨海盐渍土抗虫棉合理施肥,在黄河三角洲盐渍土低、中、高盐棉田种植转Bt基因抗虫棉鲁棉研28,研究N、P、K肥配合施用对其养分吸收利用、Na+吸收积累、光合速率... 为探讨盐渍土抗虫棉施用氮(N)、磷(P)、钾(K)肥的效应及其营养生理机制,指导滨海盐渍土抗虫棉合理施肥,在黄河三角洲盐渍土低、中、高盐棉田种植转Bt基因抗虫棉鲁棉研28,研究N、P、K肥配合施用对其养分吸收利用、Na+吸收积累、光合速率、干物质积累和产量的影响。结果表明,N、P肥配合,尤其是N、P、K肥配合施用显著增加了低、中、高盐田棉花的N、P、K养分吸收量,减少了Na+吸收积累量。低、中、高盐田棉花的N、P、K养分农学利用效率均以N、P、K配施的处理较高,氮养分农学利用效率分别为0.20、1.95和2.07kg皮棉kg-1N,磷养分农学利用效率分别为0.87、8.35和8.71kg皮棉kg-1P,钾养分农学利用效率分别为0.26、2.89和3.77kg皮棉kg-1K。N、P、K肥配合施用还维持了较高的棉株叶面积、叶绿素含量和净光合速率。低、中、高盐田棉花的生物产量和皮棉产量也均以N、P、K配施的处理较高,皮棉产量分别增产2.53%、28.67%和30.47%。中、高盐棉田的施肥效应明显好于低盐棉田。表明根据盐碱程度分类合理施肥是减轻盐渍土营养障碍、改善棉花营养、提高养分农学利用效率和棉花产量的有效途径。 展开更多
关键词 抗虫棉 盐渍土 N P K肥 养分农学利用效率 施肥效应
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盐酸西布曲明在中国志愿者体内的药代动力学(英文) 被引量:3
5
作者 陈钧 陆伟 +3 位作者 蒋新国 荣征星 黄霞 陈红专 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期850-853,共4页
目的 研究西布曲明主要药理活性代谢产物N 去二甲基西布曲明 (BTS 5 4 5 0 5 )在中国志愿者体内的药代动力学。方法  2 0名健康中国志愿者采用随机交叉自身对照的方式 ,单剂量po盐酸西布曲明胶囊 2 0mg。给药后 ,连续采集血样至 72h... 目的 研究西布曲明主要药理活性代谢产物N 去二甲基西布曲明 (BTS 5 4 5 0 5 )在中国志愿者体内的药代动力学。方法  2 0名健康中国志愿者采用随机交叉自身对照的方式 ,单剂量po盐酸西布曲明胶囊 2 0mg。给药后 ,连续采集血样至 72h。分离得到的血浆 ,采用高效液相色谱 电喷雾 二级质谱分析BTS 5 4 5 0 5的血药浓度。结果 国产和进口胶囊剂的体内药代动力学参数AUC0 t,AUC0 ∞ ,Cmax,Tmax,T1 2 ,Kelm 和MRT均与文献报道相似。 展开更多
关键词 西布曲明 N-去二甲基西布曲明(BTS54505) 中国人 药代动力学 高效液相色谱 二级质谱
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聚(琥珀酸丁二醇酯-共-富马酸丁二醇酯)的合成及其双羟基化反应研究 被引量:13
6
作者 张世平 杨晶 +2 位作者 刘小云 常建华 曹阿民 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1008-1012,共5页
以琥珀酸、富马酸、丁二醇为原料 ,用共缩聚的方法合成了一系列高分子量聚 (琥珀酸丁二醇酯 -共 -富马酸丁二醇酯 ) .然后在催化剂四氧化锇和N 甲基吗啉 N 氧化物以及水存在下 ,使高分子主链中富马酸丁二醇酯共聚单元的碳碳不饱和双键... 以琥珀酸、富马酸、丁二醇为原料 ,用共缩聚的方法合成了一系列高分子量聚 (琥珀酸丁二醇酯 -共 -富马酸丁二醇酯 ) .然后在催化剂四氧化锇和N 甲基吗啉 N 氧化物以及水存在下 ,使高分子主链中富马酸丁二醇酯共聚单元的碳碳不饱和双键发生羟基化反应得到含有亲水性侧羟基的功能性聚酯 .对上述合成的生物降解性高分子运用核磁共振 (NMR)、红外 (FT IR)、热分析等方法进行了结构与物理性能表征 . 展开更多
关键词 聚(琥珀酸丁二醇酯-共-富马酸丁二醇酯) 合成 双羟基化反应 聚(琥珀酸丁二醇酯-共-酒石酸丁二醇酯) 四氧化饿 N-甲基吗啉-N-氧化物
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抗转Bt基因棉棉铃虫幼虫中肠氨肽酶N基因的克隆与序列特征 被引量:5
7
作者 苏建亚 周晓梅 +1 位作者 张天翼 沈晋良 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期13-20,共8页
通过对抗性和敏感棉铃虫中肠氨肽酶的克隆和测序,鉴定了氨肽酶基因家族的2个成员:Haapn3和Haapn4,其cDNA序列具有3053和2862个核苷酸,分别具有3045和2853bp的开放阅读框,编码产生1014和951个氨基酸的蛋白质。其推定氨基酸序列均具有锌... 通过对抗性和敏感棉铃虫中肠氨肽酶的克隆和测序,鉴定了氨肽酶基因家族的2个成员:Haapn3和Haapn4,其cDNA序列具有3053和2862个核苷酸,分别具有3045和2853bp的开放阅读框,编码产生1014和951个氨基酸的蛋白质。其推定氨基酸序列均具有锌结合模体HEXXH和所有锌依赖氨肽酶共有的序列GAMEN。N 末端分别具有18和20个氨基酸的疏水性信号肽,C 末端均具有21个氨基酸的GPI添加信号肽。比对抗性和敏感棉铃虫cDNA的开放阅读框,在Haapn3的开放阅读框中,抗性品系的cDNA具有25个核苷酸的不同,其中9个碱基替代造成氨基酸的变化:苏氨酸189→天冬酰胺、甘氨酸229→天冬氨酸、赖氨酸231→精氨酸、谷氨酸250→丙氨酸、异亮氨酸275→缬氨酸、天冬酰胺281→天冬氨酸、酪氨酸302→组氨酸、缬氨酸648→异亮氨酸、脯氨酸975→谷氨酰胺,其它16个碱基替代为无义突变。在Haapn4的开放阅读框中,有15个点突变,其中8个突变为无义突变,其它7个导致了氨基酸的改变,即赖氨酸4→天冬酰胺、组氨酸162→酪氨酸、脯氨酸185→丝氨酸、谷氨酸297→甘氨酸、苯丙氨酸385→丝氨酸、甲硫氨酸450→异亮氨酸、缬氨酸630→异亮氨酸。本文报道的氨肽酶4个cDNA序列已提交GenBank,AY279536和AY279537分别是抗性和敏感品系的Haapn3。 展开更多
关键词 抗转Bt基因棉 棉铃虫 幼虫 氨肽酶 N基因 基因克隆 序列分析
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昆虫中肠Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N的研究进展 被引量:7
8
作者 刘凯于 姚汉超 +1 位作者 杨红 洪华珠 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2004年第3期203-207,共5页
鳞翅目昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜 (BBM)上的Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N(APN)的结构和位点密度的改变是昆虫对Bt毒素的主要抗性机制之一 ,该文简要综述了APN受体的研究进展。每种昆虫中肠上皮细胞中有数种APNs,彼此间同源性较高 ,其... 鳞翅目昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜 (BBM)上的Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N(APN)的结构和位点密度的改变是昆虫对Bt毒素的主要抗性机制之一 ,该文简要综述了APN受体的研究进展。每种昆虫中肠上皮细胞中有数种APNs,彼此间同源性较高 ,其中部分APNs为Cry1A家族毒素的功能性受体。不同种类昆虫的APNs受体 ,甚至同一种昆虫的不同类型APNs,其所结合的毒素种类可能不同。APNs决定该昆虫对Cry1A类毒素的敏感程度差异。有些抗性昆虫的APNs基因编码区发生了多个点突变。 展开更多
关键词 鳞翅目 昆虫 BT毒素 中肠上皮细胞刷状缘膜 受体 抗性 BBM
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目标昆虫对Bt杀虫晶体蛋白抗性的研究概况 被引量:1
9
作者 杨宙 康美花 +2 位作者 陈红萍 刘建华 曹丰生 《江西农业学报》 CAS 2012年第2期80-82,85,共4页
综述了多种目标昆虫对Bt杀虫晶体蛋白的抗性机制和遗传特性。
关键词 BT蛋白 抗性 蛋白酶 钙粘蛋白 氨肽酶N
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泡罩立体筛板的液相提升量研究
10
作者 杜蕾 王领 +2 位作者 刘莎 褚雅志 马晓迅 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期81-82,84,共3页
通过改变气液相速率、清液层高度、泡罩立体筛板型式和内伸长度等对泡罩立体筛板(N-BTS)的液相提升量进行研究,得到最佳的操作和结构参数,以及液相提升量与孔板动能因子及清液层高度的数学关联式。并将N-BTS与垂直筛板和泡罩立体筛板(B... 通过改变气液相速率、清液层高度、泡罩立体筛板型式和内伸长度等对泡罩立体筛板(N-BTS)的液相提升量进行研究,得到最佳的操作和结构参数,以及液相提升量与孔板动能因子及清液层高度的数学关联式。并将N-BTS与垂直筛板和泡罩立体筛板(BTS)进行对比,结果表明,新型泡罩立体筛板的液相提升效果优于垂直筛板和BTS。 展开更多
关键词 泡罩立体筛板 垂直筛板 气相提升能力 液相提升量
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转Bt基因玉米对土壤微生物量碳氮的影响 被引量:5
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作者 刘玲 赵建宁 +4 位作者 王生荣 杨殿林 李刚 娜布其 娜日苏 《草原与草坪》 CAS 2011年第3期35-39,共5页
利用三室根箱装置获得玉米生长室(S1)、根际土(S2)、非根际土(S3)3个不同根区土壤,研究了转基因玉米Bt11及其非转基因亲本玉米播种后40,50和60 d各根区土壤微生物量碳、氮的变化。结果表明,转Bt基因玉米播种后40 d各根区土壤微生物量碳... 利用三室根箱装置获得玉米生长室(S1)、根际土(S2)、非根际土(S3)3个不同根区土壤,研究了转基因玉米Bt11及其非转基因亲本玉米播种后40,50和60 d各根区土壤微生物量碳、氮的变化。结果表明,转Bt基因玉米播种后40 d各根区土壤微生物量碳与非转基因亲本玉米相比无显著差异,土壤微生物量氮显著升高;播种后50 d土壤微生物量碳、氮均显著高于亲本;播种后60 d转Bt基因玉米S1根区土壤微生物量碳、氮含量显著降低,S2根区土壤微生物量碳较亲本玉米显著下降,微生物量氮则显著升高,S3根区土壤微生物量碳、氮均高于亲本玉米。转Bt基因玉米土壤微生物量碳氮比在各采样时期均与亲本存在差异,依玉米生长时期和根区的变化而不同。 展开更多
关键词 转BT基因玉米 土壤微生物量碳氮 根箱
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昆虫氨肽酶N的研究进展 被引量:1
12
作者 常晓丽 吴青君 +2 位作者 王少丽 徐宝云 张友军 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期213-220,共8页
氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一种偏好水解蛋白或寡肽N端中性氨基酸的酶,广泛分布于动植物中。在昆虫中,APN主要分布于中肠刷状缘膜上,涉及食物蛋白的消化以及Bt毒素对靶标害虫的作用。从APN的结构特征和分类地位、APN的分离纯化及... 氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一种偏好水解蛋白或寡肽N端中性氨基酸的酶,广泛分布于动植物中。在昆虫中,APN主要分布于中肠刷状缘膜上,涉及食物蛋白的消化以及Bt毒素对靶标害虫的作用。从APN的结构特征和分类地位、APN的分离纯化及其酶活性位点与结合位点的相关性、APN同工酶的区分特征及系统发育关系、APN同工酶的基因功能、不同APN同工酶在昆虫体内的分布及表达量、APN基因功能最新研究方法和结果以及APN与昆虫抗药性的关系等方面概述了昆虫APN的最新研究进展。鉴于昆虫体内受体的多样性、复杂性及当前研究手段的局限性,对APN功能的全面了解还有赖于研究方法的改进和提高而逐步深入。 展开更多
关键词 氨肽酶N同工酶 BT毒素 系统进化 基因功能 昆虫
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氨肽酶N(APN)与鳞翅目昆虫对Bt抗性的关系 被引量:3
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作者 苗素丽 张少平 程红梅 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第S1期12-17,共6页
使用Bt Cry毒素防治农业害虫是作物生产上的一个革命性的进步,受体与Bt杀虫蛋白结合能力的改变可能是昆虫对Bt产生抗性的主要原因。氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一类存在于昆虫中肠内的Bt毒素受体蛋白,通过讨论APN与Bt毒素的结合作... 使用Bt Cry毒素防治农业害虫是作物生产上的一个革命性的进步,受体与Bt杀虫蛋白结合能力的改变可能是昆虫对Bt产生抗性的主要原因。氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一类存在于昆虫中肠内的Bt毒素受体蛋白,通过讨论APN与Bt毒素的结合作用,综述了APN基因变异与鳞翅目昆虫Bt抗性相关的分子机理,并介绍了(Bt)Cry毒素与APN相关的作用方式新模型。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌(Bt) 氨肽酶N(APN) 受体 突变 抗性
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大螟中肠氨肽酶N基因的克隆及表达谱分析 被引量:4
14
作者 王兴云 马文静 +1 位作者 韩兰芝 侯茂林 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1022-1030,共9页
昆虫中肠氨肽酶N是Bt毒素的重要受体之一,与Bt毒素的杀虫机制及昆虫Bt抗性的产生密切相关。本研究通过简并引物PCR结合RACE技术克隆并获得大螟Sesamia inferensBt受体蛋白——氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)基因的cDNA序列全长,经NCBI... 昆虫中肠氨肽酶N是Bt毒素的重要受体之一,与Bt毒素的杀虫机制及昆虫Bt抗性的产生密切相关。本研究通过简并引物PCR结合RACE技术克隆并获得大螟Sesamia inferensBt受体蛋白——氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)基因的cDNA序列全长,经NCBI同源比对分析,认为该基因为APN3基因,并将其命名为SiAPN3(GenBank登录号为HQ636624)。序列分析表明,该基因的cDNA序列全长为3411bp,开放阅读框为3018bp,编码1006个氨基酸;预测蛋白质分子量为114kD,等电点为4.95;其推导的氨基酸序列中具有鳞翅目昆虫氨肽酶N典型的结构特征,即含有1个N-和12个O-连接的糖基化位点,N-末端具有18个氨基酸的剪切信号肽,谷氨酸锌化氨肽酶保守结构GAMEN,锌结合位点HEXXHX18E,C-末端具有22个氨基酸的糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚信号肽。采用实时定量PCR研究了SiAPN3在大螟4龄幼虫肠道不同部位和幼虫不同龄期的转录表达谱。结果表明,该基因在幼虫中肠中的表达量最高,其次为后肠,前肠中表达量最低,且中肠和后肠中的表达量显著高于前肠(P<0.05);SiAPN3在3龄幼虫中的表达量最高,1龄幼虫中最低,虽然3、4日龄之间的表达量没有显著差异,但二者均显著高于其他日龄,1,2和5日龄之间不存在显著差异(P>0.05)。该研究为阐明APN基因的功能及大螟对Bt抗性产生的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 大螟 Bt受体蛋白 氨肽酶N 基因克隆 表达谱
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不同基因型抗虫棉氮磷钾养分吸收与分配特征 被引量:3
15
作者 聂军军 秦都林 +7 位作者 刘艳慧 王双磊 张美玲 李金埔 赵娜 毛丽丽 宋宪亮 孙学振 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1690-1701,共12页
【目的】探讨不同抗虫棉品种植株干物质与氮、磷、钾养分积累分配特点,为制定棉花高产栽培管理措施提供依据。【方法】在大田条件下,选用三个抗虫棉品种(冀棉169、鲁棉研21号和岱字棉99B)为研究对象,比较研究了三个品种的干物质积累与... 【目的】探讨不同抗虫棉品种植株干物质与氮、磷、钾养分积累分配特点,为制定棉花高产栽培管理措施提供依据。【方法】在大田条件下,选用三个抗虫棉品种(冀棉169、鲁棉研21号和岱字棉99B)为研究对象,比较研究了三个品种的干物质积累与氮磷钾吸收特性。【结果】冀棉169产量最高,两年分别比鲁棉研21号提高了27.9%和25.5%,分别比岱字棉99B提高了65.9%和41.1%。三个品种单铃子棉重的变化趋势与产量一致,而单株结铃数和衣分则不同。冀棉169棉株各器官干物质和氮磷钾积累量均较高,尤其在生育中后期,营养器官保持最高的氮磷钾养分积累量,促使其干物质积累量显著高于其他两个品种,为棉铃发育提供了充足的物质基础,铃叶比较大,因此结铃最多,单铃子棉重最大,皮棉产量最高,使得养分利用效率也最高。鲁棉研21号棉株各器官干物质和氮磷钾积累量均最低,主要是由于营养器官氮磷钾养分快速积累期结束最早,加之向棉铃分配比例最高,从而限制了营养器官的生长发育,影响生育中后期棉铃的发育,使之不仅结铃数最少,单铃子棉重较小,产量也较低。岱字棉99B棉株各器官干物质和氮磷钾积累量虽最高,但其快速积累期出现在盛花期以后,棉株贪青,结铃数虽较多,但单铃子棉重最小,使之产量最低,养分利用效率也最低。【结论】不同年代抗虫棉品种产量提高的主要原因是单铃子棉重的增加,其次是单株结铃数的提高。单铃子棉重和单株结铃数的增加主要归因于棉株总生物量和向生殖器官转运量的协同提高,特别是生育中后期保持高的同化物和生殖器官运转比例;而生物量的增加依赖于养分积累量和利用效率的提高。 展开更多
关键词 抗虫棉 干物质 氮磷钾 吸收与分配 产量
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Bt棉功能叶氮代谢对Bt蛋白表达及氮肥调节的响应 被引量:3
16
作者 李晓荣 张美俊 +2 位作者 杨武德 冯美臣 武志明 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2014年第4期301-307,319,共8页
为评价外源Bt基因插入以及氮肥对Bt棉功能叶Bt蛋白表达及氮代谢的影响,对Bt棉功能叶Bt蛋白含量,硝酸还原酶、谷丙转氨酶和蛋白酶活性,可溶性蛋白质和全氮含量等指标进行了测定。结果表明:Bt棉功能叶Bt蛋白含量在蕾期最高,此后,随生育进... 为评价外源Bt基因插入以及氮肥对Bt棉功能叶Bt蛋白表达及氮代谢的影响,对Bt棉功能叶Bt蛋白含量,硝酸还原酶、谷丙转氨酶和蛋白酶活性,可溶性蛋白质和全氮含量等指标进行了测定。结果表明:Bt棉功能叶Bt蛋白含量在蕾期最高,此后,随生育进程呈显著下降。与常规棉相比,Bt棉功能叶硝酸还原酶活性提高,在前中期谷丙转氨酶活性显著提高且有利于可溶性蛋白质的合成,前期全氮含量显著增加,对蛋白酶活性没有明显影响。Bt棉功能叶Bt蛋白含量与硝酸还原酶活性、可溶性蛋白质和全氮含量呈显著正相关,表明Bt棉前期增强的氮代谢促进了Bt蛋白的表达。施氮肥明显提高Bt棉中后期功能叶硝酸还原酶活性、可溶性蛋白质含量和Bt蛋白的表达。基施和初花期各50%的效应显著大于全部基施,而在基施氮肥基础上,初花期增施50%的氮肥效应最明显。与常规棉比较,施氮肥更有利于Bt棉中后期功能叶硝酸还原酶活性、可溶性蛋白质含量提高。 展开更多
关键词 BT棉 BT蛋白 氮代谢 氮肥
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美国白蛾氨肽酶N的基因克隆表达及与苏云金杆菌3种毒素蛋白的结合特性分析
17
作者 刘子欢 赵丹 +4 位作者 常梦颖 张雅昆 徐畅 陆秀君 郭巍 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期24-31,共8页
美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制,利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物,以美国白蛾中肠cDNA为模板,利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因... 美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制,利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物,以美国白蛾中肠cDNA为模板,利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因hcapn1全长序列(GenBank登录号:KP053647)。该基因开放阅读框为3 000 bp,编码999个氨基酸,预测蛋白质的分子质量和等电点分别为113.14 kD和4.85。设计去信号肽引物PCR扩增获得hcapn1基因序列,构建原核重组表达载体pET30a-hcapn1,诱导表达的HcAPN1重组蛋白约110 kD。将苏云金杆菌Cry1Ac、Cry2Ab33和Cry9Ea6原毒素经胰蛋白酶消化后与HcAPN1重组蛋白分别进行体外配体印迹试验,发现HcAPN1重组蛋白与Cry9Ea6结合,而不与Cry2Ab33、Cry1Ac发生特异结合,推测HcAPN1可能为Cry9Ea6在美国白蛾中肠的受体蛋白。分别设计引物扩增HcAPN1蛋白2个结构域Asp_(34)~Asp_( 527)和Leu_(563)~Gln_(925)的编码序列,在大肠埃希菌中表达获得62 kD和48 kD 2种重组蛋白,体外结合试验显示Cry9Ea6与HcAPN1的结合发生在Leu_(563)~Gln_(925)之间。研究结果为深入理解苏云金杆菌Cry9Ea6蛋白对美国白蛾的杀虫机制提供了基础数据。 展开更多
关键词 美国白蛾 氨肽酶N BT蛋白 配体印迹
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Relationship Between Leaf C/N Ratio and Insecticidal Protein Expression in Bt Cotton as Affected by High Temperature and N Rate 被引量:8
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作者 ZHANG Xiang LU Chun-hua +3 位作者 CHEN Yuan WANG Gui-xia CHEN Yuan CHEN De-hua 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2014年第1期82-88,共7页
Expression of insecticidal protein for transgenic Bacillus thuringiensis (Bt) cotton is unstable and related to nitrogen metabolism. The objective of this study was to investigate the relationship between leaf carbo... Expression of insecticidal protein for transgenic Bacillus thuringiensis (Bt) cotton is unstable and related to nitrogen metabolism. The objective of this study was to investigate the relationship between leaf carbon nitrogen ratio (C/N) and insecticidal efficacy of two Bt cotton cultivars. C/N ratio and Bt protein content were both measured at peak square period and peak boll period respectively under 5-7 d high temperature and different nitrogen fertilizer rates on the Yangzhou University Farm and the Ludong Cotton Farm, China. All plants were grown in field. The results showed that the C/N ratio enhanced slightly and the Bt protein content remained stable at peak square period, but significant increases for the C/N ratio and decreases markedly for the leaf Bt protein concentration were detected at the peak boll period. The similar patterns at the two growth periods were found for the leaf C/N ratio and Bt protein content by different N fertilizer treatments. When nitrogen rate was from 0 to 600 kg ha-l, the C/N ratio was reduced by 0.017 and 0.006 for Sikang 1 and Sikang 3 at peak square period, compared to the 1.350 to 1.143 reduction for Sikang 1 and Sikang 3 at peak boll period, respectively. Correspondingly, the leaf Bt protein contents were bolstered by 2.6-11.8 and 26.9-36.9% at the two different growth periods, respectively. The results suggested that enhanced C/N ratio by high temperature and nitrogen application may result in the reduction of inseetiocidal efficacy in Bt cotton, especially in peak boll period. 展开更多
关键词 Bt cotton C/N ratio Bt protein insecticidal efficacy
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RNAi介导的棉铃虫氨肽酶N基因Haapn1和钙粘蛋白基因Ha_BtR沉默对Cry1Ac毒力的影响 被引量:5
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作者 周慧丹 杨亦桦 吴益东 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1097-1103,共7页
氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)和钙粘蛋白(cadherin)是存在于鳞翅目昆虫中肠刷状缘膜囊(brush bordermembrane vesicles,BBMV)上Bt毒素Cry1A的受体。本实验将棉铃虫Helicoverpa armigera氨肽酶N1基因Haapn1和钙粘蛋白基因Ha_BtR双链RNA... 氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)和钙粘蛋白(cadherin)是存在于鳞翅目昆虫中肠刷状缘膜囊(brush bordermembrane vesicles,BBMV)上Bt毒素Cry1A的受体。本实验将棉铃虫Helicoverpa armigera氨肽酶N1基因Haapn1和钙粘蛋白基因Ha_BtR双链RNA(dsRNA)注入棉铃虫4龄幼虫体内,以研究这两种受体基因沉默后对Cry1Ac毒力的影响。结果表明:注射dsRNA(1μg/头)进行基因沉默后,Haapn1mRNA表达量比注射缓冲液(elution solution,ES)的对照下降了30%~49%,Ha_BtRmRNA表达量下降了30%~37%。注射Haapn1dsRNA的幼虫在40和70μg/cm2Cry1Ac活化毒素下的死亡率显著低于注射ES的幼虫,而在100和170μg/cm2Cry1Ac原毒素处理下两者死亡率无显著差异;Cry1Ac活化毒素以及原毒素对注射Ha_BtRdsRNA幼虫与注射ES幼虫的毒力均无显著差异。当同时注射Haapn1及Ha_BtRdsRNA后,干扰后的幼虫对Cry1Ac活化毒素和原毒素的敏感性均显著下降。本研究进一步证明了棉铃虫Haapn1和Ha_BtR均是Bt毒素Cry1Ac的功能受体,这两种受体蛋白共同参与Cry1Ac的毒杀作用过程。该结果也提示,Haapn1或Ha_BtR基因产生突变都可能导致棉铃虫对Cry1Ac产生抗性。 展开更多
关键词 棉铃虫 Bt毒素受体 原毒素 RNA干扰 基因沉默 氨肽酶N 钙粘蛋白
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不同氮素水平下CO_2倍增对转Bt棉花氮素代谢的影响 被引量:13
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作者 高慧璟 肖能文 +3 位作者 李俊生 陈小云 陈法军 翟保平 《生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2213-2219,共7页
通过开顶式CO2气室研究了盛蕾期转Bt棉花新棉33B及其对照亲本DP5415的生长势和氮素代谢特征对土壤氮素水平(100和200mgN.kg-1)和CO2浓度倍增(750和375μl.L-1)的生理生态响应。结果表明:CO2浓度升高可显著提高2种棉花的株高和茎粗,增加... 通过开顶式CO2气室研究了盛蕾期转Bt棉花新棉33B及其对照亲本DP5415的生长势和氮素代谢特征对土壤氮素水平(100和200mgN.kg-1)和CO2浓度倍增(750和375μl.L-1)的生理生态响应。结果表明:CO2浓度升高可显著提高2种棉花的株高和茎粗,增加生物产量;氮素水平提高可显著增加转Bt棉花的株高、茎粗,以及茎和蕾的鲜质量,而对亲本棉花DP5415的影响不显著;对照棉花DP5415的谷氨酰胺合成酶(GS)活力随大气CO2浓度的升高而显著降低,随氮素营养的提高而升高,转Bt棉花新棉33B在低氮条件下,GS活力随大气CO2浓度的升高而显著增加;大气CO2浓度升高及氮素营养的增加使盛蕾期转Bt棉花的硝酸还原酶(NR)活力显著增加,DP5415的NR活力也随大气CO2浓度的升高而显著提高;大气CO2浓度对2种棉花的亚硝酸还原酶(NiR)活力都有明显的抑制作用,其中,高CO2浓度条件下,DP5415的NiR活力还随氮素营养的增加而显著下降。可见,大气CO2浓度升高下,土壤氮素水平变化对转Bt棉花的生长势影响显著,但对其氮素代谢生理的影响较对照亲本棉花小。生产中(尤其是高浓度CO2环境下),应进一步加强转Bt棉花的氮肥优化管理。 展开更多
关键词 转BT基因棉花 大气CO2浓度倍增 氮肥水平 氮素代谢
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