Boc-L-天冬酰胺与正己胺的缩合反应研究

氨基酸因含有氨基、羧基等活性基团,易于对其结构进行调控,是构筑小分子有机凝胶的常用骨架或切块。以天冬酰胺为基本骨架,将羧酸位点与正己胺进行缩合反应,形成酰胺键,是一种良好的凝胶因子中间体。研究了Boc-L-天冬酰胺与正己胺的缩合反应,考查了有机碱、反应溶剂和反应温度对反应的影响。条件优化之后发现使用DCC作为缩合剂,DIPEA提供碱性环境,25℃下在DCM溶剂中反应,反应收率可达74%。合成的目标化合物结构经过~1H NMR表征确认,该工艺条件温和,操作简单,效率高。

天冬酰胺酶超分子脂质纳米粒在大鼠体内的药代动力学与药效学研究

目的研究天冬酰胺酶磺丁基-β-环糊精超分子脂质纳米粒(ASLN)在大鼠体内的药代动力学行为,并初步探讨其对小细胞肺癌细胞增殖的抑制作用。方法采用逆相蒸发法制备ASLN,考察其形态、粒径、zeta电位和包封率。12只SD大鼠随机分为2组,每组6只,分别静脉注射ASLN和游离天冬酰胺酶(Aase)2 kU/kg后,于48 h内的不同时间点取大鼠眼眶血测定血浆样品中Aase的活性,并绘制活性-时间曲线,采用DAS 2.1.1软件计算药代动力学参数。采用MTT法检测ASLN对小细胞肺癌细胞H446的细胞毒性作用。结果ASLN呈球形或类球形,其粒径为(321.27±1.42)nm,zeta电位为(-9.31±0.42)mV,包封率为(66.46±1.57)%。ASLN和Aase的0~48 h活性-时间曲线AUC分别为(199.48±2.18)、(57.63±3.89)U·mL^(-1)·h,平均滞留时间分别为(4.40±0.05)、(2.09±0.07)h,峰浓度分别为(35.49±1.11)、(27.58±1.28)U/mL。ASLN相对Aase的生物利用度为325.96%。细胞毒性结果表明,ASLN对H446细胞具有增殖抑制作用,抑制率与其浓度呈正相关。结论ASLN能改善Aase的药代动力学行为,提高Aase的生物利用度,并抑制小细胞肺癌细胞的增殖。

(叔丁氧羰基)-L-天冬酰胺的合成研究

研究了(叔丁氧羰基)-L-天冬酰胺的合成,并对该工艺条件进行了方法学研究。L-天冬酰胺、氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯溶于水和1,4-二氧六环中,在20℃下反应12h。该工艺方法得到84%的收率,且反应条件简单温和,工艺设备成本廉价,实现了操作简单、经济实惠和绿色环保的目的。

臭氧化法制备N-Boc-(甲氨基)乙醛

以N-甲基烯丙胺和二碳酸二叔丁酯为原料,在乙醇中缩合得到N-Boc-甲基烯丙胺,再以乙酸乙酯为溶剂经臭氧臭氧化,用NaHSO_(3)还原分解,经萃取、蒸馏,制备N-Boc-(甲氨基)乙醛。采用L16(45)正交实验确定了最优臭氧化温度为5~10℃、反应时间为3 h、臭氧流量为0.04 m^(3)/h,粗产物用乙醚萃取,获得目标产物收率78.7%,纯度99.2%(HPLC),并用IR、^(1)H NMR、^(13)C NMR和MS表征了产物的结构。

仿生聚天冬酰胺衍生物聚合物胶粘剂的制备及其性能

用于组织固定和伤口护理的生物胶粘剂的开发仍然是一个挑战。本研究采用聚琥珀酰亚胺为基体,引入三种不同组合的多巴胺(DOPA)、乙醇胺(EA)和疏水氨基辛烷(OA),合成了聚天冬酰胺衍生物,并通过连续氨解反应分别制备了聚天冬酰胺衍生物PolyAspAm(DOPA/EA)和PolyAspAm(DOPA/OA/EA)胶粘剂。研究结果表明:(1)不同含水量的PolyAspAm(DOPA/EA)胶粘剂在玻璃基材上的拉伸剪切强度具有较大差异,且含水量降低,拉伸剪切强度变大。当PolyAspAm(DOPA/EA)胶粘剂中水分含量降低到7%时,拉伸剪切强度明显升高到0.6 MPa。(2)PolyAspAm(DOPA/OA/EA)胶粘剂在不同基材上的拉伸剪切强度均大于PolyAspAm(DOPA/EA)胶粘剂。在常用基材如玻璃、塑料基材(PMMA)和锡箔纸上,PolyAspAm(DOPA/OA/EA)胶粘剂的拉伸剪切强度可分别达到(0.36±0.032)MPa、(0.28±0.021)MPa和(0.29±0.024)MPa。(3)PolyAspAm(DOPA/OA/EA)胶粘剂具有较好的粘接稳定性,对玻璃基材应用14 d后,拉伸剪切强度达到最高值(0.65±0.029)MPa。(4)在PolyAspAm(DOPA/OA/EA)聚合物中引入物质的量为5%的高碘酸钠,可以提高胶粘剂的内聚力,对玻璃基材的拉伸剪切强度从(0.36±0.032)MPa提高到(0.51±0.039)MPa。

L-天冬酰胺酶在肿瘤中的研究进展

氨基酸代谢与细胞氧化应激、细胞增殖和细胞凋亡等多种细胞过程相关,参与糖尿病、衰老、肿瘤等生理病理过程。L-天冬酰胺酶(L-asparaginase,L-ASP)是氨基酸代谢途径中的关键酶,能够水解天冬酰胺生成天冬氨酸和氨,参与细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭等生物过程。研究表明,L-天冬酰胺酶影响白血病、乳腺癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、肝癌等多种肿瘤的发生和发展。本文主要从L-天冬酰胺酶的结构、酶学作用、与其他药物联用对多种肿瘤治疗的潜力进行综述。

酶解-柱前衍生UPLC法检测特医食品中天冬酰胺及谷氨酰胺

建立酶水解-丹磺酰氯柱前衍生高效液相色谱法检测特殊医学用途配方食品(FSMP)中天冬酰胺(Asn)和谷氨酰胺(Gln)的方法。样品经灰色链霉菌蛋白酶(Pronase E)酶解后,取上清液与Dns-Cl进行柱前衍生,衍生化产物经Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以10 mmol/L磷酸氢二钠溶液(pH 6.5)和甲醇作为流动相进行梯度洗脱,外标法定量。结果表明,两种氨基酸在0.500~50.0μg/mL浓度范围内线性良好(R≥0.999),回收率为95.3%~105%,RSD为0.95%~3.22%。方法用2种蛋白标准品进行酶切效率与实测含量验证,准确度良好(δ<10%),可用于FSMP中Asn和Gln含量检测,并正在用于制定食品安全国家标准。

天冬酰胺合成酶通过促进β-catenin核转位驱动胆管癌转移

目的:检测天冬酰胺合成酶(ASNS)在胆管癌(CCA)中的表达情况,探讨ASNS在CCA转移中的作用及其机制。方法:通过公共数据库分析各肿瘤组织中ASNS的mRNA表达;收集CCA患者病理组织(n=27),构建硫代乙酰胺诱导的大鼠自发CCA模型和左中位胆管结扎联合二乙基亚硝胺诱导的小鼠自发CCA模型,通过免疫组化、Western blot和免疫荧光法检测ASNS蛋白表达。采用CCK8、划痕和Transwell实验检测ASNS对人CCA细胞HuCCT1和HCCC-9810增殖、迁移和侵袭的影响。构建ASNS稳定敲减的CCA细胞株HuCCT1^(shNC)、HuCCT1^(shASNS)、HCCC-9810^(shNC)和HCCC-9810^(shASNS),通过肝原位种植和尾静脉注射研究ASNS对CCA细胞肝内生长和肺转移的影响。利用公共数据库富集与ASNS相关的信号通路,并用免疫荧光和Western blot验证相关分子机制。结果:无论在人或动物CCA组织中,ASNS表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。ASNS以酶活性非依赖性方式促进CCA细胞HuCCT1和HCCC-9810的增殖、迁移与侵袭。生物信息学分析显示,β-catenin在ASNS高表达的CCA组织中富集,ASNS通过促进β-catenin核转位,启动CCA细胞上皮-间充质转化(EMT)。β-catenin抑制剂XAV-939可显著抑制CCA细胞的侵袭与迁移。结论:ASNS在CCA中高表达,通过促进β-catenin核转位,介导EMT,驱动CCA转移。

天冬酰胺类抗体-药物偶联物连接子的合成新工艺

为了提高抗体-药物偶联物(Antibody-drug conjugate,ADC)的连接子4-N-(N-(L-丙氨酰-L-丙氨酰)-N′-三苯甲基-L-天冬酰胺酰基)-氨基苯甲醇(NH_(2)-AAN(Trt)-PAB)的合成效率,设计了一条新的合成路线。以N-芴甲氧羰基-N′-三苯甲基-L-天冬酰胺为起始原料,经过氨基酸缩合、氨基脱保护4步反应,高效合成了NH_(2)-AAN(Trt)-PAB。LCMS、1H NMR分析表征结果表明成功合成了NH_(2)-AAN(Trt)-PAB。该研究具有操作简便、条件温和可控、合成效率高、总产率较高等特点,有利于NH_(2)-AAN(Trt)-PAB的放大生产及其在ADC药物研发中的应用,同时对其他蛋白酶可裂解连接子的合成具有借鉴意义。

α,β-聚-DL-天冬酰胺衍生物水凝胶的合成及其溶胀性能研究

以ＤＬ天冬氨酸为单体，通过缩合聚合反应合成聚ＤＬ丁二酰亚胺，然后用不同比例的乙醇胺和丁二胺进行开环和交联，获得α，β聚ＤＬ天冬酰胺衍生物水凝胶．测定了水凝胶在几种不同溶液中的溶胀比，结果表明该水凝胶在蒸馏水中的溶胀比为１１０～４４０倍，在不同浓度的盐溶液中的溶胀比有不同程度的降低，在０１６ｍｏｌ／Ｌ的抗肿瘤药物５氟尿嘧啶（５Ｆｕ）水溶液中的溶胀比可达１４０倍．研究了聚丁二酰亚胺分子量、溶剂用量及交联剂用量等因素对凝胶溶胀性能的影响．

5-氟尿嘧啶-聚α,β(2-羟乙基)-DL-天冬酰胺的合成及体内释放的研究

以５氟尿嘧啶为模型药物，将药物以共价键的形式键合于生物降解型高分子材料聚α，β（２羟乙基）ＤＬ天冬酰胺上制成高分子载体药物，药物接入率达３７１％（ｗ／ｗ）。用红外和差热分析法对载体药物进行了表征。以纯种大白兔为实验动物，把载体药物制成混悬型和棒状型两种剂型，进行药物体内释放实验。结果表明：以棒状型药物给药在一定程度上可以降低释药初期的“爆释”现象，为进一步临床应用提供了重要依据。

几种因素在L-天冬酰胺酶化学修饰中对酶活力及抗原性的影响

为了寻求在较好地保持酶活力的同时解除L-天冬酰胺酶抗原性的方法,采用不同分子量的乙酸酐、右旋糖酐和单甲氧基聚乙二醇,作为修饰剂和不同的修饰方法对该酶进行了化学修饰。结果表明在保持酶活性和降低抗原性方面,大分子修饰剂右旋糖酐、单甲氧基聚乙二醇优于小分子乙酸酐,底物保护修饰优于直接修饰;活化PEG,优于活化PEG_1。在底物保护下的PEG,修饰酶其抗原性完全解除的同时,酶活力保持在30%以上。

高分子载体α，β－聚（羟烷基）－DL－天冬酰胺的合成及分子量测定

以ＤＬ－天冬氨酸为单体，聚合成ＤＬ－天冬酸胺，接入不同悬臂氨基乙醇，氨基内醇，氨基丁醇，得到α，β－聚（羟烷基）－ＤＬ－天冬酰胺，分别是α，β－聚（２－羟乙基）－ＤＬ－大冬酰胺（ＰＨＥＡ），α，β－聚（３－羟丙基）－ＤＬ－天冬酰胺（ＰＨＰＡ），α，β－聚（４－羟丁基）－ＤＬ－天冬酰胺（ＰＨＢＡ）。用红外光谱表征了高分子载体，比较了不同投料比对反应的影响；测定了高分子载体的比浓粘度，建立了ＰＨＰＡ的Ｍａｒｋ—Ｈｏｕｗｉｎｋ方程。

葡聚糖磁性毫微粒固定化L－天冬酰胺酶的研究

葡聚糖磁性毫微粒固定化Ｌ－天冬酰胺酶的研究徐慧显，李民勤，潘再群，马建标，何炳林（南开大学高分子化学研究所，天津３０００７１）大肠杆菌天冬酰胺酶对急性淋巴白血病有明显疗效［１］，注射入体内以后，可迅速清除血清中的天冬酰胺──敏感性肿瘤细胞的必需营养成...

L-天冬酰胺酶工程菌株培养条件及稳定性

Ｌ天冬酰胺酶工程菌株的酶活和表达水平受菌体生物量和诱导时间的影响。在生物量Ａ６０００３ ×１０ 左右，热诱导４ｈ 酶活力和表达水平可达到较高水平。葡萄糖对酶的生成有阻遏作用，当葡萄糖浓度大于０２５ ％ 时，对工程菌酶的合成造成阻遏。确定了工程菌培养的培养基、ｐＨ 值、接种量等因素。重组质粒ｐＡＳＮ 在Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０５ ，ＴＧ１ 和ＡＳ１３５７ 等宿主菌中具有很好的稳定性，工程菌培养５０ 代以上重组质粒保留９０ ％ 以上，在ＬＢ 和Ｍ３

丝素纳米颗粒的制备及应用于L-天冬酰胺酶的固定化

丝素蛋白纤维溶于高浓度中性盐溴化锂溶液或氯化钙-乙醇-水三元溶剂中,经过透析和纯化可以制成3种液态丝素.SDS-PAGE分析结果表明,其分子量分布范围明显不同.应用能与水混溶的有机溶剂如丙酮等可将这种丝素制成丝素纳米颗粒,用SEM观察到丝素纳米颗粒粒径分布范围为50～120nm.以戊二醛为交联剂,将治疗急性淋巴性白血病常用酶制剂L-天冬酰胺酶共价结合在丝素纳米颗粒上.酶活性分析结果表明,由肽链断裂较少的丝素制备的纳米颗粒更适合于酶的生物结合.酶动力学研究结果表明,这种固定化酶活性回收率为44%,热稳定性较游离酶有明显提高,最适pH值范围加宽为6.0～8.0,最适反应温度提高10℃;抗胰蛋白酶水解能力明显增强.结果表明,丝素纳米颗粒与丝素蛋白膜一样,是一种酶固定化的良好载体,在药物缓释系统方面具有潜在的研究和开发价值.

乙酰水杨酸－聚天冬酰胺棒状药物体外释放的研究

以乙酰水杨酸为模型药物，将药物以共价键键合于聚天冬酰胺高分子母体，制成棒伏。体外释放在Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ＰＨ７．４）缓冲溶液介质中，温度为３７±０．１℃时，其释放初期的释药量为其膜剂的近１／３０，能较好地控制释药初期的“爆释”现象。

不同裂解条件对天冬酰胺主要裂解产物的影响

采用在线裂解气相色谱-质谱联用技术(Py/GC-MS)对不同条件下天冬酰胺的主要裂解产物进行分析,并通过裂解同位素标记样品,计算主要含氮裂解产物中的同位素比例,推测其形成途径,研究裂解条件对主要裂解产物形成的影响。结果表明:温度对天冬酰胺裂解影响较大,主要裂解产物在低温和高温下生成量变化较大。300℃时,马来酰亚胺和琥珀酰亚胺为主要的裂解产物,300～600℃时生成量显著增加,600～900℃时马来酰亚胺生成量缓慢增加而琥珀酰亚胺逐渐降低;随着温度升高,酸类和酰胺类物质生成量持续增加;腈类和吡咯类物质在高温下生成量明显增加。此外,温度对含氮裂解产物的形成途径也有较大影响。马来酰亚胺、乙酰胺在低温下N主要来源于标记的酰胺N,而在高温下主要来源于未标记的氨基N。氢氰酸、乙腈和丙烯腈中的N原子均主要由未标记的氨基转变而来,且随着温度升高,这种生成途径所占比例越高。而裂解气氛和裂解时间对天冬酰胺主要裂解产物的生成量及途径影响较小。

L-天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌的培养

为提高L 天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌EscherichiacolipKA/CPU2 10 0 0 9的产酶量 ,采用正交试验法确定了较佳培养条件 ,并优化了发酵工艺。工程菌摇瓶产酶稳定在 190U/ml。 2 5L发酵罐产酶亦高达 180U/ml,发酵周期大大缩短 ,仅 9～ 10h。产酶量比原工艺提高 1倍以上 ,具有较好的工业生产前景。

重组L-天冬酰胺酶Ⅱ的中试工艺及其性质的研究

目的 :通过重组L 天冬酰胺酶Ⅱ中试工艺及其性质的研究 ,旨在获得大量的高纯度产品。方法 :采用 5 0 0L发酵罐发酵 ,对所获得菌体进一步提取纯化 ,产品用还原SDS PAGE(十二烷基硫酸钠 聚丙酰胺凝胶电泳法 ) ,HPLC测定纯度 ,质谱和等电聚焦电泳分别测相对分子质量、等电点 ,并进行了紫外扫描。结果 :发酵液产酶活力达到 2 0 0U·mg-1,提取回收率为80 % ,纯化总回收率为 5 7% ,产品比活为 2 2 0U·ml-1,电泳 30 μg上样量显示一条带 ,HPLC测纯度大于 95 %。该酶Mr为13835 6 ,pI为 4.85 ,紫外最大吸收值在 2 78nm处。 结论 :本研究对实现重组L 天冬酰胺酶Ⅱ的工业化生产有重要意义。