柱前衍生-高效液相色谱法检测安立生坦的手性拆分剂L-脯氨酸甲酯

采用4-氯-7-硝基苯-2-（嗯）-1,3-二唑（NBD-Cl）作为柱前衍生试剂,建立了柱前衍生化-高效液相色谱法（HPLC）结合荧光检测器测定安立生坦合成过程中使用的手性拆分剂L-脯氨酸甲酯的方法.考察了衍生反应温度、时间、衍生试剂加入量、缓冲液pH对L-脯氨酸甲酯衍生反应的影响.结果表明,衍生反应优化条件为：反应温度60℃,反应时间60 min,衍生试剂加入量为每毫升反应体系中加入0.3 mg NBD-Cl,衍生反应缓冲液pH为9.0.同时对此方法进行了方法学验证,L-脯氨酸甲酯在0.625～7.5 μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 4;检测限为2.5×10-3μg/mL,定量限为7.5×10-3μg/mL;平均回收率为91.9％～ 106.4％;重复性实验中RSD为0.33％;此方法耐用性良好,L-脯氨酸甲酯样品溶液及衍生产物溶液体系稳定.此方法灵敏、简便、专属性强,能对安立生坦原料药中残留的杂质L-脯氨酸甲酯进行检测及定量分析.

外源茉莉酸甲酯对盐胁迫下小桐子幼苗渗透调节和脯氨酸代谢的影响

以小桐子幼苗为材料,采用人工气候箱内水培试验,设置不同浓度(0、20、40、60、80、100μmol·L^(-1))茉莉酸甲酯(MeJA)和150 mmol·L^(-1)NaCl胁迫处理,分析不同处理条件下小桐子幼苗叶片的组织活力、MDA含量、水势、含水量和叶片渗透调节物质脯氨酸、甜菜碱和可溶性糖的含量,以及脯氨酸代谢关键酶P5CS、OAT和甜菜碱合成关键酶BADH活性和相关基因表达水平,探讨外源茉莉酸甲酯对盐胁迫下小桐子幼苗渗透调节能力的影响及其机制。结果表明:(1)外源MeJA处理可提高盐胁迫下小桐子幼苗叶片的组织活力和叶片含水量,降低小桐子幼苗叶片的MDA含量和水势,且60μmol·L^(-1)浓度处理效果最佳。(2)外源MeJA处理可提高盐胁迫下小桐子幼苗叶片的脯氨酸、甜菜碱和可溶性糖的含量,且60μmol·L^(-1)MeJA处理显著提高了盐胁迫下小桐子幼苗内源茉莉酸、脯氨酸和甜菜碱的含量。(3)60μmol·L^(-1)MeJA也提高了盐胁迫下小桐子BADH、P5CS和OAT的活性,并上调了JcBADH、JcP5CS、JcOAT基因的表达水平,但MeJA降低了脯氨酸降解酶ProDH的活性,下调了JcProDH基因的表达。研究发现,在盐胁迫条件下,外源MeJA通过活化脯氨酸生物合成的谷氨酸和鸟氨酸途径,尤其是鸟氨酸途径,以及抑制脯氨酸降解途径来促进小桐子幼苗脯氨酸的积累,同时MeJA也激活了幼苗体内甜菜碱的生物合成过程,从而强化了盐胁迫下幼苗的渗透调节作用和耐盐性,表明MeJA诱导的渗透调节在小桐子耐盐性形成过程中发挥着重要作用。

茉莉酸甲酯诱导人参抗锈腐病的生理机制

人参(Panax ginsengC.A.Meyer)是我国传统名贵药用植物。人参锈腐病(Cylindrocarpon destructans)是人参最为严重的根部病害,也是"老参地"问题的主要原因之一。茉莉酸甲酯(MeJA)是一种重要的抗病诱导剂,目前将其应用于植物诱导抗病性的相关研究已成为热点。文中以2年生人参移栽苗为材料,用200 mg/L的茉莉酸甲酯(MeJA)溶液处理人参,温室人工接种人参锈腐病菌,接种后3,6,9,12,15,20,25,30 d取样,测定人参根内丙二醛(MDA)、脯氨酸、可溶性糖含量和细胞膜电解质外渗率的变化动态。结果表明:经MeJA处理后接种人参锈腐病菌,人参根内MDA含量较未经MeJA处理的参根MDA含量明显降低,细胞膜电解质外渗率也呈降低趋势,脯氨酸与可溶性糖含量升高。这说明以上生理指标在茉莉酸甲酯诱导人参抗人参锈腐病的过程中起重要作用。

小麦脯氨酸脱氢酶活性染色方法研究

以小麦(Triticum aestivum L.)为研究材料,建立了小麦叶片脯氨酸脱氢酶活性染色方法。结果表明,小麦叶片脯氨酸脱氢酶活性染色的最佳反应pH值是10,而且脯氨酸脱氢酶谱带的大小与酶浓度呈正比。该染色方法是在脯氨酸脱氢酶活性测定的基础上建立起来的,克服了酶活力测定过程中由于异硫氰酸甲酯在水溶液中的颜色变化而造成的酶活力测定误差大,平行性差的缺点,具有简单直观的优点。

茉莉酸甲酯浸种对盐胁迫下谷子萌发的影响

茉莉酸甲酯是一种能提高植物对逆境胁迫适应能力的植物生长调节剂,通过研究茉莉酸甲酯浸种对盐胁迫下谷子萌发的影响,探究其在谷子抗盐胁迫初期的作用及生理机制,可为盐胁迫提高谷子幼苗存活率提供理论依据。现选取现代品种晋谷21号为供试材料,用0.1μmol/L茉莉酸甲酯和150 mmol/L氯化钠处理种子,设置4个处理:水(CK),茉莉酸甲酯(MeJA),茉莉酸甲酯+氯化钠(MeJA+NaCl)和氯化钠(NaCl)。在培养第3天和第6天分别测定发芽率、芽长和根长,发芽结束后(第6天)测定脯氨酸、淀粉和可溶性糖的含量。结果表明:茉莉酸甲酯浸种可以提高盐胁迫下谷子的抗逆能力。盐胁迫显著降低了谷子发芽率(P<0.05),用0.1μmol/L茉莉酸甲酯浸种处理后,可以有效缓解盐胁迫导致的发芽率下降现象。同时,茉莉酸甲酯浸种后能有效提高盐胁迫下种子的可溶性糖含量和脯氨酸含量,提升盐胁迫下谷子的发芽率、根长和芽长。综上所述,外源茉莉酸甲酯通过提高萌发期谷子可溶性糖和脯氨酸的含量从而提高其抗盐能力。

无溶剂条件下脯氨酸甲酯催化syn选择性羟醛缩合反应

详细研究了无溶剂条件下L-脯氨酸甲酯催化环戊酮与一系列醛间的直接羟醛缩合反应,结果表明:对于环戊酮与醛的羟醛缩合反应,脯氨酸甲酯是一种高效的催化剂,在优化条件下,反应能给出非常好的收率和syn非对映选择性(可达100%).

7-苄基-1,7-二氮螺[4.4]壬烷-1-羧酸叔丁酯的合成

以N-Boc-DL-脯氨酸甲酯为起始原料,先后经α-取代、NaBH4-CaCl2还原、IBX氧化、鲍奇还原胺化、环合等5步反应得到目标化合物,总收率为44.5%,其结构经^1HNMR和HR-MS确证。该方法合成路线短、条件温和、原料成本低、操作简单,比较适合较大规模的中间体制备。

含十二烷端基聚乙二醇-b-聚(N-丙烯酰脯氨酸甲酯)两嵌段在水溶液中的可逆再组装

以RAFT聚合制备了十二烷基末端聚乙二醇-b-聚(N-丙烯酰脯氨酸甲酯)两嵌段聚合物D12-EA,并用体积排除色谱和核磁氢谱表征了聚合物的结构。结合紫外-可见光(UV-Vis)、动态光散射(DLS)、静态光散射(LLS)、透射电镜(TEM)以及变温核磁氢谱(1 H NMR)研究了其在水溶液中的可逆再组装行为。不同于普通刺激响应性两嵌段在水溶液中由单分子链组装为纳米聚集体,在温度低于温敏性聚丙烯酰脯氨酸甲酯嵌段(A嵌段)浊点(CP)时,D12-EA两嵌段水溶液自组装形成粒径为20nm的球形胶束;而当温度高于CP时,球形胶束能够可逆地再组装为粒径约90nm的囊泡。变温1 H NMR揭示了当温度高于CP时,A嵌段由亲水壳层迁移至疏水核层,从而使体系再组装为自由能更低的结构。

L-脯氨酰胺的合成工艺改进

以L-脯氨酸为原料合成了L-脯氨酰胺,改用将溶剂全部蒸除直接用于下步反应的方法,解决了因L-脯氨酸甲酯盐酸盐吸湿造成的结晶困难,用AR级甲醇代替无水甲醇进行L-脯氨酸甲酯盐酸盐的制备,省去了甲醇的无水处理环节。优化的最佳工艺条件如下:n(L-脯氨酸)∶n(氯化亚砜)=1∶1.1,滴加氯化亚砜温度为-10℃以下,保温反应0.5 h,室温反应9 h;氨化反应在常压0℃进行,时间为24 h。L-脯氨酰胺总产率达94.1%,光学纯度达到98.0%。

生物催化法水解制备N-BOC-L-α-氨基丁酸

利用实验室筛选得到的高立体选择性脂肪酶产生菌株溜曲霉(Aspergillus tamarii WYC3)不对称水解拆分N-BOC-DL-α-氨基丁酸甲酯得到N-BOC-L-α-氨基丁酸,对其反应条件进行研究,确定其最优反应条件为:0.1 mol/L p H 7.2的磷酸钾缓冲液,反应温度30℃,底物浓度52.24 mmol/L,0.1 g菌粉,V(底物)∶V(丙酮)=1∶8,200 r/min恒温水浴反应6 h,可获得产物N-BOC-L-α-氨基丁酸,此时e.e._(s)值达到99.95%,对映体选择率E值为20.11,产率为36.21%。

柱前衍生-高效液相色谱法测定肠内营养剂中脯氨酸的含量

目的建立一种柱前衍生-高效液相色谱法测定肠内营养剂中脯氨酸的含量。方法以氯甲酸-9-芴基甲酯(FMOC-Cl)为衍生化试剂,色谱柱采用Agilent C_(18)(150 mm×4.6 mm,5.0μm)柱,流动相为乙腈-50 mmol·L^(-1)醋酸钠缓冲液(pH4.2),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温30℃;FLD荧光检测,激发波长263 nm,发射波长315nm。待测肠内营养剂样品经10 mol·L^(-1)盐酸溶液溶解稀释后,超声提取,在室温条件下与衍生化试剂反应15 min,反应终止并取20μL进样分析。结果脯氨酸在质量浓度0.1～1 mg·L^(-1)内线性关系良好,r=0.999 6;平均回收率109.42%～112.72%,日间、日内精密度RSD均<7%;样品溶液在24 h内稳定。结论该方法灵敏、简便、专属性强,能对肠内营养剂中的脯氨酸进行准确的定量分析,并能避免制剂中其他氨基酸组分的干扰。

环(L-组-L-脯)二肽的合成

许多环二肽具强的生理活性,以N-叔丁氧羰基-L-组氨酸和L-脯氨酸甲酯盐酸盐为原料,经DCC缩合得直链二肽,再经HCl/Et2O脱Boc保护,弱碱性条件下成环,得环(L-组-L-脯)二肽.结构经ESI-MS、IR、1H NMR、13C NMR等表征.

山芝麻酸甲酯对肝纤维化小鼠的影响

目的观察山芝麻酸甲酯对肝纤维化小鼠的影响及其机制研究。方法小鼠腹腔注射四氯化碳(CCl4)-橄榄油混合液体8周构建肝纤维化模型。按照体重将小鼠随机分为5组:正常组、模型组和低、中、高3个剂量实验组,每组8只。模型组和正常组给予0.9%NaCl,低、中、高3个剂量实验组分别给予山芝麻酸甲酯10,20和40 mg·kg^-1·d^-1。于造模后第5周开始灌胃给药,直至第14周结束。用酶联免疫吸附法检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、透明质酸(HA)和肝组织的羟脯氨酸(Hyp)含量,用蛋白质印迹检测肝组织中肉瘤蛋白(Ras)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的蛋白相对表达量(灰度值)。结果正常组、模型组和低、中、高3个剂量实验组血清GPT分别为(27.68±5.55),(158.54±11.74),(96.90±5.02),(62.97±7.66)和(43.52±2.65)U·L^-1;这5组的血清GOT分别为(27.42±3.05),(108.27±12.62),(75.42±3.77),(58.98±5.82),和(37.49±3.63)U·L^-1;这5组的血清HA分别为(115.17±10.73),(248.39±22.47),(194.12±22.32),(178.42±11.45)和(147.42±13.76)μg·L^-1;这5组的肝组织中Hyp水平分别为(292.09±19.61),(404.53±16.39),(384.43±18.27),(375.04±13.59),和(346.42±14.55)μg·g-1;这5组的Ras蛋白相对表达量分别为0.99±0.08,2.38±0.19,1.73±0.17,1.64±0.11和1.47±0.12;这5组的ERK蛋白相对表达量分别为1.05±0.02,1.02±0.11,1.03±0.12,1.08±0.08和1.00±0.11;这5组的p-ERK蛋白相对表达量分别为1.03±0.12,1.80±0.16,1.59±0.17,1.36±0.08和1.23±0.09。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);低、中、高3个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论山芝麻酸甲酯对小鼠肝纤维化具有一定的抑制作用,且与Ras/ERK信号通路有关。

环(D-天冬氨-D-脯)二肽的合成

以D-天冬氨酸和D-脯氨酸为原料,先合成N-叔丁氧羰基-D-天冬氨酸-β-苄酯和D-脯氨酸甲酯盐酸盐,然后经DCC缩合得直链二肽,再经Pd/C催化氢解,HCl/Et2O脱Boc保护,最后弱碱性条件下成环得环(D-天冬氨-D-脯)二肽,结构经ESI-MS、IR、1HNMR、13CNMR等表征。