老年急性缺血性脑卒中患者N-myc下游调节基因3和信号素3A表达及其临床意义

目的分析老年急性缺血性脑卒中患者N-myc下游调节基因3(NDRG3)和信号素3A(SEMA3A)表达及其临床意义。方法选择2020年9月至2022年9月聊城市人民医院老年病科收治的老年急性缺血性脑卒中患者100例(研究组)。研究组根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组34例,中度组31例,重度组35例;出院后随访3个月,依照改良的Rankin量表评分分为预后良好组69例,预后不良组31例。另选取同期我院健康体检者100例(对照组)。使用Westernblot法检测外周血单个核细胞(PBMC)中NDRG3、SEMA3A表达,ELISA法检测外周血内皮生长因子、转化生长因子β1、TNF-α、白细胞介素17水平,Spearman等级相关性分析NDRG3、SEMA3A与NIHSS评分的相关性,ROC曲线分析NDRG3、SEMA3A对老年急性缺血性脑卒中患者预后不良的预测价值。结果研究组PBMC中NDRG3、SEMA3A表达较对照组明显升高(1.11±0.16vs0.76±0.13,0.78±0.13vs0.42±0.09,P<0.01)。轻度组、中度组、重度组PBMC中NDRG3、SEMA3A表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。预后不良组NDRG3、SEMA3A表达明显高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman等级相关性分析显示,老年急性缺血性脑卒中患者NIHSS评分与NDRG3、SEMA3A表达呈正相关(r=0.597,P<0.01;r=0.618,P<0.01),NDRG3与SEMA3A表达呈正相关(r=0.477,P<0.01)。ROC曲线分析显示,NDRG3+SEMA3A联合预测的曲线下面积优于NDRG3、SEMA3A单独预测(0.962vs 0.861、0.880,P<0.01)。结论老年急性缺血性脑卒中患者NDRG3、SEMA3A表达上调,且与患者病情严重程度及预后密切相关。

过表达N-Myc下游调节基因3促进Hela宫颈癌细胞增殖和迁移

目的研究过表达N-Myc下游调节基因(NDRG)3对Hela宫颈癌细胞增殖和迁移的作用。方法构建NDRG3过表达载体,利用Lipofectamine 2000转染试剂建立稳定转染NDRG3的Hela宫颈癌细胞株,细胞计数试剂(CCK)8和Transwell方法研究细胞增殖和迁移能力,酶联免疫吸附实验研究趋化因子CXC配体(L)5的表达情况。结果过表达NDRG3可明显促进Hela的增殖和迁移能力,并上调Hela的分泌性CXCL5蛋白水平。结论 NDRG3可经上调肿瘤相关基因CXCL5的水平参与宫颈癌进程。

N-myc下游调节基因3低表达与胶质瘤患者预后不良和免疫浸润的相关性研究

目的探讨胶质瘤中N-myc下游调节基因3 (N-myc downstream-regulated gene 3,NDRG3)与免疫浸润和预后价值的关系。方法 首先本文通过Gliovis、Human Protein Atlas等工具分析了NDRG3在胶质瘤的不同数据库中表达量及其与胶质瘤级别的差异。进一步通过将NDRG3的中位表达量分为高低两组,研究其在Gliovis中CGGA (Chinese GliomaGenome Atlas)、TCGA (Cancer Genome Atlas)、Rembrandt、Phillips和Gravendeel数据库中的对胶质瘤生存预后的影响并绘制了各数据库的NDRG3风险系数森林图。随后依据CGGA数据库,本文研究了胶质瘤级别、年龄、性别、复发、IDH程度和1p19q共表达缺失等临床特征与NDRG3表达量之间的关系,通过多因素COX回归分析影响胶质瘤患者预后的独立因素。依托GEPIA和STRING数据库,探索了NDRG3的相关蛋白并进行GO和KEGG富集分析,通过R语言分析绘制了TCGA胶质瘤数据库中NDRG3基因正负相关的多通路富集图,为后续NDRG3的作用机制及通路分析提供了有力支持。最后本文通过CiberSort算法和TIMER2.0网络数据库研究了NDRG3与胶质瘤免疫浸润的关系。结果 在胶质瘤中,NDRG3的表达随着肿瘤级别的增高,表达量显著降低(P<0.05)。NDRG3表达较低的患者,总体生存率(OS)显著低于高表达组(P<0.05)。CGGA多因素COX回归分析中显示,年龄、等级、NDRG3表达量、PRS类型、是否化疗、IDH是否变异和1p19q编码状态为影响胶质瘤患者预后的独立因素(P<0.05)。GO富集分析数据表明,NDRG3相关基因与突触相关的生物过程等相关。KEGG富集分析显示,NDRG3可能通过“MAPK信号通路”和“Ras信号通路”参与对肿瘤发病机制的影响。TCGA样本中GSEA (gene set enrichment analysis)分析显示NDRG3低表达组显著性富集在KEGG_AUTOIMMUNE_THYROID_DISEASEKEGG_INTESTINAL_IMMUNE_NETWORK_FOR_IGA_PRODUCTION、KEGG_PRIMARY_IMMUNODEFICIENCY等免疫通路中。Tregs、NK激活细胞、Monocytes、MacrophagesM2四种细胞是受NDRG3表达影响的显著差异的免疫浸润细胞(P<0.05)。结论NDRG3在多种肿瘤中表达量有显著差异,随着肿瘤级别的增高,其表达量降低,生存时间也显著缩短,提示NDRG3的表达量可作为影响患者生存的独立因素。NDRG3低表达组显著性富集在多种免疫通路中。Tregs、NK激活细胞、Monocytes、MacrophagesM2四种细胞是NDRG3表达影响的显著差异的免疫浸润细胞。

N-myc下游调节基因2、微卫星不稳定在不同病理学特征胃癌患者中的表达及意义

目的:探讨N-myc下游调节基因2(NDRG2)、微卫星不稳定(MSI)在不同病理学特征胃癌患者中的表达及意义。方法:回顾性分析2019年1月至2020年12月该院收治的98例行胃癌根治术患者的临床资料,统计胃癌患者NDRG2、MSI的检测结果,比较不同病理学特征胃癌患者NDRG2、MSI的表达情况。结果:临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未合并淋巴结转移的胃癌患者NDRG2阳性率高于临床分期Ⅲ~Ⅳ期、合并淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤位置在胃窦、Lauren分型为肠型、低分化、临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未合并淋巴结转移胃癌患者的MSI阳性表达率高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:NDRG2在临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未合并淋巴结转移的胃癌患者中呈高表达;MSI在肿瘤位置在胃窦、Lauren分型为肠型、低分化、临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未合并淋巴结转移的胃癌患者中呈高表达,二者共同参与胃癌的发生发展。

N-myc下游调节基因2对巨噬细胞极化及乳腺癌增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究N-myc下游调节基因2(N-myc downstream-regulated gene 2,NDRG2)在乳腺癌中的表达及对巨噬细胞极化和乳腺癌增殖、侵袭及迁移的影响。方法生物信息学分析NDRG2在乳腺癌组织中的表达及与临床相关病理特征和预后的关系。免疫荧光检测乳腺癌组织中NDRG2与巨噬细胞分子标志物的定位与表达。构建巨噬细胞与乳腺癌细胞的共培养体系观察巨噬细胞内NDRG2水平改变对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果NDRG2在乳腺癌组织中表达下调并与不良预后相关,巨噬细胞内NDRG2表达下调促进巨噬细胞向促瘤表型M2极化,NDRG2表达上调则促进巨噬细胞向抑瘤型M1极化,共培养体系中巨噬细胞内NDRG2表达下调可增加乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,从而促进乳腺癌进展。结论巨噬细胞内NDRG2表达下调不仅可以促进巨噬细胞向促瘤型M2转变,还能增强乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高表达。抑制miR-181b的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc下游调节基因2(NDRG2)是miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而抑制miR-181b能够显著提高NDRG2的表达。抑制miR-181b的表达的同时抑制靶基因NDRG2的表达,能够逆转抑制miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论 miR-181b在骨肉瘤中过表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。

褪黑素对大鼠肠缺血再灌注肺损伤及N-myc下游调节基因2表达的影响

目的研究褪黑素对大鼠肠缺血再灌注肺损伤的保护作用及其对N-myc下游调节基因2(NDRG2)表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠40只随机分为褪黑素高剂量组(10 mg/kg)、褪黑素低剂量组(1 mg/kg)、缺血再灌注组和假手术组。褪黑素高、低剂量组造模前30 min给予腹腔注射褪黑素,缺血再灌注组和假手术组造模前30 min腹腔注射与褪黑素治疗量等容量的生理盐水。褪黑素高、低剂量组和缺血再灌注组大鼠经夹闭肠系膜上动脉,缺血60 min后松开动脉夹造成再灌注,建立肠缺血再灌注肺损伤模型,于再灌注45 min后取右肺组织。假手术组全身麻醉后只切除右肺,缝合切口。观察肺组织病理学改变和湿/干重比值(W/D),免疫组化、Western-blot方法观察大鼠肺组织NDRG2的表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组肺泡壁增宽,肺泡腔内可见出血等炎症表现,W/D显著升高,肺组织NDRG2蛋白表达明显降低。与缺血再灌注组比较,褪黑素高、低剂量组肺泡腔内出血等炎症表现减轻,W/D显著降低,肺组织NDRG2蛋白表达明显增强。褪黑素高、低剂量组间各指标均无显著差异。结论褪黑素可能通过上调NDRG2的表达而减轻肠缺血再灌注造成的肺损伤。

N-myc下游调节基因-2在大鼠肠缺血再灌注肺损伤中的表达及其与NF-κBp65的相关研究

目的通过建立大鼠肠缺血再灌注肺损伤(IIRI)模型,观察大鼠肠缺血再灌注肺损伤,肺组织中N-myc下游调节基因-2(NDRG2)表达水平的变化。方法 50只健康成年雄性SD大鼠随机分成对照组(control)、缺血再灌注组(I/R)(其中根据缺血再灌注时间又分4个亚组),每组10只。缺血再灌注4个亚组选择缺血60min后分别再灌注30、60、120和180min,获取样本肺组织。术后样本行病理(HE)、湿干重比例(W/D)检测,免疫组化、Western-blot对NDRG2、核转录因子-κBp65(NF-κBp65)检测,RT-PCR方法对NDRG2在mRNA水平含量进行检测,TUNEL法对凋亡细胞进行检测。结果缺血再灌注组与对照组比较,缺血再灌注组肺泡壁增宽,肺泡腔内可见出血等炎症表现,W/D比值显著性升高(P<0.05),免疫组化显示NF-κBp65发生核转位现象,NF-κBp65蛋白水平表达明显升高(P<0.05),肺组织NDRG2在mRNA水平和蛋白水平的表达明显降低(P<0.05)。结论缺血再灌注损伤可下调肺组织中NDRG2的表达,NDRG2可能通过对NF-κB通路进行调控,是导致缺血再灌注后肺损伤的靶向调控位点,对肠缺血再灌注肺损伤的大鼠起保护作用。

增殖细胞核抗原和细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞分化相关基因N-myc下游调节基因1(NDRG1)在乳腺癌中的表达。方法选择乳腺手术切除标本90例进行切片,应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物(SABC)法检测45例乳腺癌组织、23例乳腺增生组织、22例癌旁正常乳腺组织中PCNA和NDRG1蛋白的表达情况,并分析其与乳腺癌生物学行为的关系。结果 PCNA在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为36.3%、62.5%和88.9%,PCNA在癌旁正常乳腺组织中的表达明显低于乳腺增生组织(P<0.05)和乳腺癌组织(P<0.05)。NDRG1在癌旁正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺癌组织中的表达率分别为63.6%、30.4%和15.5%,NDRG1在癌旁正常乳腺组织中的表达明显高于乳腺增生组织(P<0.05)和乳腺癌组织(P<0.05)。PCNA与NDRG1表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。结论 PCNA与NDRG1共同参与乳腺癌的发生与发展,联合检测PCNA和NDRG1蛋白有助于判断乳腺癌的恶性程度。

三叶因子2和N-myc下游调节基因1在不同子宫内膜组织中的表达

目的 探讨三叶因子2（TFF2）和N-myc下游调节基因1（NDRG1）在不同子宫内膜组织中的表达,为早期诊断子宫内膜癌提供新的生物学指标。方法 收集珠海市人民医院经手术切除并经病理检查确诊为子宫内膜癌组织157例,另选择同期经手术切除并经病理检查确诊的子宫内膜不典型增生组织30例及其他病因手术切除的正常子宫内膜20例,分别检测其TFF2和NDRG1蛋白的表达情况,并分析TFF2和NDRG1蛋白的表达与子宫内膜癌临床病理因素的关系。结果 与正常子宫内膜和子宫内膜不典型增生组织比较,TFF2在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著降低（P〈0.05）,但NDRG1在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。TFF2在Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著高于Ⅲ~Ⅳ期（P〈0.05）;高、中分化子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著高于低分化组织及其他类型（P〈0.01）。与深肌层浸润的子宫内膜癌比较,浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高（P〈0.05）;与有淋巴结转移的子宫内膜癌比较,无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中TFF2的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。而高、中度分化的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于低分化及其他类型（P〈0.05）。浅肌层浸润的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著低于深肌层浸润（P〈0.01）,与无淋巴结转移的子宫内膜癌比较,有淋巴结转移的子宫内膜癌组织中NDRG1的阳性表达率显著升高（P〈0.01）。结论 在子宫内膜组织中,TFF2表达的缺失及NDRG1蛋白的高表达可能与子宫内膜癌的发生发展有重要关系,有望在子宫内膜癌的早期诊断、判断是否存在侵袭转移等临床评估中发挥作用。

行为学干预对血管性痴呆大鼠神经再生及脑组织N-myc下游调节基因1蛋白表达的影响

目的探讨不同干预方法对血管性痴呆(VD)大鼠神经再生及脑组织N-myc下游调节基因1(NDRG1)蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,训练组,b FGF组。采用两血管阻断加硝普钠降压法制作大鼠VD动物模型,用HE、TTC染色法和免疫组织化学方法检测海马组织NDRG1蛋白的表达及穿梭箱训练和b FGF的干预作用。结果脑缺血再灌注第7天缺血海马神经元NDRG1阳性细胞明显增多,且随缺血再灌注时间的延长逐渐增多,第21天达高峰。应用穿梭箱训练和b FGF的干预后NDRG1阳性细胞明显增加。结论穿梭箱训练和b FGF促进神经再生作用可能由NDRG1信号介导。

高危型人乳头瘤病毒感染宫颈癌组织中N-myc下游调节基因1蛋白表达及其临床意义分析

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染宫颈癌组织中N-myc下游调节基因1(NDRG1)蛋白表达及其临床意义。方法选取50例高危型HPV感染宫颈癌患者作为宫颈癌组,同期50例高危型HPV感染宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为CIN组。对比两组组织中NDRG1蛋白表达差异,分析宫颈癌组织中NDRG1蛋白表达情况与临床特征的关系,并分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果宫颈癌组患者宫颈癌组织中NDRG1蛋白阳性表达率高于CIN组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。NDRG1蛋白阳性表达与NDRG1蛋白阴性表达高危型HPV感染宫颈癌患者国际妇产科联盟(FIGO)分期、宫旁侵犯情况、淋巴结转移情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。NDRG1蛋白阴性表达高危型HPV感染宫颈癌患者生存情况优于NDRG1蛋白阳性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。FIGO分期为Ⅲ期、合并宫旁侵犯、合并淋巴结转移、NDRG1蛋白阳性表达均是高危型HPV感染宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论组织中NDRG1蛋白阳性表达是高危型HPV感染宫颈癌患者病情严重、预后不良的重要影响因素。

上调N-myc下游调节基因1表达对胰腺癌细胞增殖及凋亡的作用

目的观察磷酸化增强型绿色荧光蛋白-N-myc下游调节基因N3(p EGFP-NDRG1-N3)上调Nmyc下游调节基因1(NDRG1)表达的胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响并探讨其机制。方法以Western blot法对PANC-1、BXPC-3、CAPAN-2、SW1990细胞中NDRG1表达进行检测;构建过表达质粒p EGFPNDRG1-N3转染CAPAN-2细胞,以免疫荧光、Western blot法及实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测上调效率;采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染后细胞增殖;碘化丙啶(PI)法检测细胞周期;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Western blot显示,NDRG1在4组细胞株中均有表达,而在低分化细胞(PANC-1)中的表达量要高于中分化(BXPC-3)及高分化细胞株(CAPAN-2、SW1990)(P<0.05);免疫荧光显示,p EGFP-NDRG1-N3组荧光细胞数占总细胞数>70%,NDRG1在蛋白及m RNA水平表达上调;在m RNA水平,NDRG1表达上调后Parp、Cleaved Parp、p-P53、Cleaved-Capase3无改变(t=1.456、1.164、2.914和1.075,P>0.05)。在蛋白水平,Parp表达下调,Cleaved Parp表达上调,p-P53下调,Cleaved-Capase3下调(t=6.104、12.273、3.691和14.227,P<0.05);MTT显示,在96和120 h与p EGFP-N3组比较,p EGFP-NDRG1-N3转染后CAPAN-2细胞增殖能力增强(t=8.176和2.246,P<0.05);PI法显示,转染p EGFP-NDRG1-N3的CAPAN-2细胞停留在G1期比例增高,G2及S期比例减少,与p EGFP-N3组比较,差异有统计学意义(t=3.651、4.133和3.092,P<0.05);p EGFPNDRG1-N3凋亡低于p EGFP-N3组,差异有统计学意义(t=9.161,P<0.01)。结论胰腺癌细胞NDRG1表达上调促进胰腺癌细胞增殖,抑制凋亡,促进细胞进入G1期,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因。

过表达N-myc下游调节基因2(NDRG2)抑制直肠癌细胞的增殖和迁移并促进细胞凋亡

目的探讨N-myc下游调节基因2(NDRG2)基因对直肠癌细胞增殖、迁移、凋亡的影响。方法培养SW480人直肠癌细胞,以p CDNA3.1为载体,将p CDNA3.1-NDRG2和空载体(SW480-Ve)转染至SW480人直肠癌细胞,并设定SW480细胞为空白对照组。MTT法检测SW480、SW480-Ve、SW480-NDRG2组细胞增殖活性;划痕愈合试验检测三组细胞在24、48、72 h迁移距离;流式细胞术检测三组转染48 h细胞凋亡率;Western blot法检测三组细胞Bax、caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结果细胞培养7 d后,SW480-NDRG2组细胞生存率显著低于SW480组和SW480-Ve组,且细胞生存率随着培养时间延长逐渐降低,而SW480-Ve组细胞生存率与SW480组无显著差异;SW480-NDRG2组细胞迁移距离显著低于SW480-Ve组和SW480组,SW480-Ve组和SW480组细胞迁移距离无显著差异;SW480-NDRG2组细胞凋亡率显著高于SW480组和SW480-Ve组,SW480组和SW480-Ve组细胞凋亡率差异不明显;SW480-NDRG2组细胞Bax和caspase-3蛋白表达量显著高于SW480组和SW480-Ve组,Bcl-2蛋白表达量显著低于SW480细胞和SW480-Ve细胞,SW480组和SW480-Ve组Bax、caspase-3和Bcl-2蛋白表达差异不明显。结论过表达NDRG2抑制人直肠癌细胞株SW480的增殖,降低细胞迁移,通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡。

N-myc下游调节基因对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制研究

目的探究N-myc下游调节基因(NDRG1)对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并分析可能的机制。方法体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞,并分为空白对照组(细胞不做特殊处理)、pcDNANC组(细胞转染pcDNA-NC)、pcDNA-NDRG1组(细胞转染pcDNA-NDRG1)、通路抑制剂组[转染pcDNA-NDRG1后加入含终浓度为1 mmol/L磷脂肌醇3-激酶(PI3K)通路激活剂bpv的培养液];采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NDRG1 m RNA的表达;CCK-8法检测细胞存活情况;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;Western blotting检测NDRG1、增殖及侵袭迁移相关蛋白[细胞增殖相关核抗原(PCNA)、E-钙黏附蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]及蛋白激酶B/转录激活因子3(Akt/STAT3)通路蛋白[PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、STAT3]的表达。结果与空白对照组、pcDNA-NC组比较,pcDNA-NDRG1组、通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量升高(P<0.05),细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量降低(P<0.05);但通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量低于pcDNA-NDRG1组(P<0.05),细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量高于pcDNA-NDRG1组(P<0.05)。结论过表达NDRG1表达可能通过抑制PI3K/Akt/STAT3通路活化,抑制胰腺癌MZ-3262细胞增殖、侵袭及迁移。

鸟嘌呤核苷酸抑制因子2和N-myc下游调节基因2在肝癌的表达及与病理生物学特点的相关性

目的探讨鸟嘌呤核苷酸抑制因子2(RhoGDI2)和N-myc下游调节基因2(NDRG2)在肝癌组织中的表达及意义。方法所有患者手术中取原发灶癌组织及癌组织旁的正常组织,做好标签,立即放到液氮中保存,以备后期对标本石蜡包埋,免疫组化染色,对RhoGDI2和NDRG2的定位和表达情况进行分析。结果肝癌组织RhoGDI2阳性表达率为69.66%,明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),而NDRG2阳性表达率为22.47%,明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期患者RhoGDI2阳性表达率为91.11%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05),而NDRG2阳性表达率为8.89%,明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移患者RhoGDI2阳性表达率为87.50%,明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05);RhoGDI2与NDRG2表达呈负相关(r s=-0.640,P<0.05)。结论RhoGDI2在肝癌组织中呈高表达,而NDRG2呈低表达,与临床病理特征有一定关系,值得进一步研究。

N-MYC及NDRG1在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞生物学特性的影响

目的分析N-MYC及N-MYC下游调节基因1(NDRG1)在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞生物学特性的影响。方法收集2021年1月至2023年5月于该院行手术切除且经病理确诊为胃癌的82例患者的胃癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测N-MYC、NDRG1 mRNA相对表达量,收集患者临床资料,分析N-MYC、NDRG1 mRNA表达与患者临床病理特征关系。选择对数生长期NCI-N87细胞,将N-MYC干扰质粒(si-N-MYC)与其阴性对照(si-NC)分别转染到NCI-N87细胞中,记为si-NC组、si-N-MYC组;将si-N-MYC分别与anti-NC、anti-NDRG1共转染至NCI-N87细胞中,记为si-N-MYC+anti-NC组、si-N-MYC+anti-NDRG1组。采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测细胞中N-MYC、NDRG1蛋白表达。结果胃癌组织N-MYC mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05),NDRG1 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05)。不同胃癌TNM分期、淋巴结转移、远处转移患者N-MYC、NDRG1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-N-MYC组细胞增殖和侵袭能力下降(P<0.05),NDRG1蛋白表达下调(P<0.05)。与si-N-MYC+anti-NC组比较,si-N-MYC+anti-NDRG1组细胞增殖、侵袭能力增加(P<0.05)。N-MYC可靶向调控NDRG1,敲低NDRG1可逆转N-MYC对细胞产生的生物学作用。结论胃癌组织N-MYC mRNA表达上调、NDRG1 mRNA表达下调,二者参与胃癌的发生发展过程,并对胃癌细胞增殖、侵袭等恶性生物学行为有重要调控作用。

血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平与缺血性脑卒中患者病情和预后的关系

目的探究血清血管性血友病因子裂解蛋白酶13(ADAMTS13)、信号蛋白3A(SEMA3A)、N-myc下游调控基因3(NDRG3)水平与缺血性脑卒中(IS)患者病情和预后的关系。方法选择312例IS患者作为IS组,312例健康体检者作为对照组。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分对IS患者病情严重程度进行评估,根据NIHSS评分将患者分为重度组(n=45)、中度组(n=112)、轻度组(n=155)。对所有患者随访3个月,采用改良Rankin量表(mRS)评分对预后进行评价,根据mRS评分将患者分为预后不良组(n=103)、0~2分为预后良好组(n=209)。Spearman相关法分析血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平与mRS评分、NIHSS评分的相关性;受试者工作特征曲线分析血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平对IS患者预后的预测价值。结果与对照组比较,IS组血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低(P均<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清SEMA3A、NDRG3水平逐渐升高,ADAMTS13水平逐渐降低(P均<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低(P均<0.05)。血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3联合预测IS患者预后的曲线下面积为0.861,均高于各自单独预测(P均<0.05)。ADAMTS13与NIHSS评分、mRS评分呈负相关(r分别为-0.527、-0.435,P均<0.05),SEMA3A与NIHSS评分、mRS评分呈正相关(r分别为0.443、0.496,P均<0.05),NDRG3与NIHSS评分、mRS评分呈正相关(r分别为0.487、0.515,P均<0.05)。结论IS患者血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低,三者与患者病情和预后相关,可预测IS患者预后。

雄激素受体通过微小RNA-9-5p/N-my下游调节基因1通路促进胰腺导管腺癌细胞侵袭的机制研究

目的探讨AR如何通过调控微小RNA(miRNA,miR)-9-5p和N-myc下游调节基因1(NDRG1)通路,从而影响胰腺导管腺癌(PDAC)细胞的侵袭。方法对PDAC组织和相应非肿瘤组织样本的分析。我们通过在PDAC细胞系PANC-1、BxPC-3细胞中过表达或敲低AR,用Transwell方法观察AR对PANC-1、BxPC-3及侵袭的影响。通过生信分析寻找能够调控靶基因NDRG1表达的miRNA,并用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证该miRNA与NDRG1的调控关系,观察其对PANC-1、BxPC-3细胞侵袭的影响。通过转染miR-9-5p和NDRG1等基因来评估对PANC-1、BxPC-3细胞侵袭能力的影响,采用t检验比较各组间差异。结果相对于载体对照细胞(PANC-1、BxPC-3-Ctrl),过表达AR促进了PDAC细胞(PANC-1、BxPC-3-oeAR)的PDAC细胞侵袭(0.65±0.07比2.11±0.52、0.74±0.05比2.28±0.65),差异有统计学意义(t=21.160、10.120,P<0.05)。相对对照细胞(PANC-1、BxPC-3-Scr),敲除AR抑制了PDAC细胞的侵袭(PANC-1-shAR、BxPC-3-shAR)(0.75±0.12比0.34±0.02、0.84±0.13比0.44±0.03)差异有统计学意义(t=45.117、13.155,P<0.01)。miR-9-5p模拟物能显著抑制AR过表达PDAC细胞PANC-1、BxPC-3的侵袭能力(0.67±0.06比2.25±0.22、0.88±0.07比2.07±0.32,t=15.124、8.156,P<0.05),而miR-9-5p抑制剂则能增强对照组细胞的侵袭能力(1.64±0.23比0.75±0.09、1.48±0.26比0.84±0.15,t=11.143、9.175,P<0.05)。PDAC组织里,miR-9-5p的产量明显低于正常胰腺组织(0.23±0.02比1.58±0.57,t=8.122,P<0.05)。利用双荧光素酶基因报告实验,我们更深入地肯定了miR-9-5p直接影响NDRG1的3’非翻译区(3’UTR),以此压低其表达。miR-9-5p的过表达显著降低了NDRG1蛋白水平(0.76±0.04比0.42±0.22,t=7.143、11.106,P<0.05),而miR-9-5p的抑制剂则提高了NDRG1蛋白表达(0.46±0.02比1.22±0.26,t=6.121、15.106,P<0.05)。oeAR显著增加了NDRG1的表达(0.37±0.02比1.56±0.45,t=8.197、8.996,P<0.05),而AR的抑制则减少了NDRG1的表达(0.66±0.05比0.22±0.04,t=11.751、6.196,P<0.05)。过表达NDRG1显著抑制PDAC细胞的侵袭能力(1.13±0.12比0.42±0.06,t=5.175、7.776,P<0.05)。NDRG1敲除PDAC细胞侵袭能力显著升高(0.56±0.06比1.36±0.27,t=16.151、17.135,P<0.01)。结论雄激素受体通过miR-9-5p/NDRG1通路抑制PDAC细胞侵袭的机制,为PDAC的治疗提供治疗策略。

LSD1、NDRG1基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响及两者的关系

目的观察赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、N-myc下游调节基因1(NDRG1)基因沉默对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响,并探讨两者的作用关系。方法取人卵巢癌SKOV3细胞株,通过shRNA方法建立诱导型干扰LSD1的SKOV3细胞株(LSD1-shRNA-SKOV3),将其分为对照组、Dox组、转染组和联合组。对照组用水处理,Dox组用100 ng/m L Dox处理,转染组转染NDRG1 siRNA,联合组转染NDRG1 siRNA的同时加入100 ng/m L Dox处理。采用实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测4组LSD1、NDRG1基因mRNA和蛋白表达;染色质免疫沉淀ChIP法和实时荧光定量PCR法分析对照组和Dox组NDRG1基因启动子区组蛋白H3第4位赖氨酸的二甲基化(H3K4me2)程度;Transwell小室测算4组细胞迁移率。结果 Dox组、转染组、联合组、对照组LSD1mRNA表达分别为0.407±0.029、0.936±0.024、0.413±0.018、0.941±0.035,蛋白表达分别为0.306±0.013、0.879±0.036、0.341±0.057、0.893±0.052,Dox组、联合组与对照组相比,P均<0.05。Dox组、转染组、联合组、对照组NDRG1 mRNA表达分别为0.791±0.045、0.107±0.016、0.165±0.021、0.239±0.027,蛋白表达分别为0.907±0.005、0.130±0.006、0.216±0.019、0.358±0.062,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05。Dox组、对照组细胞NDRG1基因启动子区H3K4me2水平分别为3.32±0.41、0.83±0.17,两组相比P<0.01。Dox组、转染组、联合组、对照组细胞迁移率分别为21.75%±1.816%、79.13%±2.561%、40.13%±2.039%、68.91%±3.167%,Dox组、转染组、联合组与对照组相比,联合组与Dox组、转染组相比,P均<0.05。结论 LSD1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力降低,NDRG1基因沉默人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力升高;LSD1通过降低NDRG1基因启动子区域H3K4me2水平,抑制NDRG1的表达,从而促进卵巢癌SKOV3细胞转移。